西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫cox1和nad1的多态性

目的分析西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫cox1、nad1的基因多态性。方法采集西藏中部地区45份散养牦牛和绵羊细粒棘球蚴包囊,提取包囊生发层DNA,根据细粒棘球蚴线粒体cox1、nad1基因序列设计扩增的引物序列,用PCR技术扩增线粒体cox1、nad1基因片段,将扩增产物做琼脂糖凝胶电泳并测序;利用MEGA11.0软件做cox1、nad1序列特征与同源性比对,并构建系统进化树;运用DnaSP 5.0软件计算序列单倍型数量(H),分析核苷酸多样性(Pi)、单倍体型多样性(Hd)特性;利用Network软件为cox1、nad1基因的所有单倍体构建单倍体网络图,判断西藏中部地区散养牦牛和绵羊的主要单倍型。结果(1)cox1、nad1序列长度分别为925、839bp。(2)在cox1序列中,A、T、G、C碱基的平均含量分别为32.6%、33.1%、17.4%、16.9%;而nad1序列中,A、T、G、C碱基的平均含量为19.5%、47.6%、25.5%、7.4%;同源性分析结果显示,cox1序列之间的同源性为99.6%~100.0%,nad1序列之间的同源性为98.1%~100.0%;西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫基因型为G1、G3、G6。(3)cox1、nad1单倍型个数分别为19个、7个,Hd、Pi分别为0.89600、0.56000和0.36500、0.00060。(4)单倍型网络图显示,Hc-2、Hc-12、Hn-1为西藏中部地区散养牦牛和绵羊的主要单倍型。结论西藏中部地区散养牦牛和绵羊细粒棘球绦虫基因型为G1、G3、G6,G1是主要基因型。上述结论为探明西藏中部地区细粒棘球蚴的分型和病原体遗传演化的情况提供了参考依据。

胃粘膜病变组织环氧合酶-2和三叶因子1的表达及HP感染对其表达的影响

目的探讨胃粘膜病变过程中COX-2和TFF1的变化规律和所起的作用。方法以88例经胃镜和病理确诊的不同胃粘膜病变患者作为研究对象,用免疫组化染色法检测胃粘膜病变组织中COX-2、TFF1的表达,用快速尿素酶法结合Giesma染色法检测HP感染情况,并探讨HP感染对其表达的影响。结果COX-2从浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠腺化生→异型增生→胃癌中的表达逐渐增强,而TFF1的表达逐渐减弱,COX-2与TFF1经相关性分析呈成负相关(r=-0.397,P<0.01)。HP阳性的各组胃粘膜病变组织中COX-2、TFF1的表达明显高于HP阴性组。结论胃粘膜病变从浅表性胃炎→萎缩性胃炎→肠腺化生→异型增生→胃癌的变化过程中,COX-2、TFF1表达的异常在其中发挥重要作用;HP感染诱导COX-2和TFF1的表达,促进病变的发生发展。

苎麻线粒体基因CoxⅡ和atpA与细胞质雄性不育相关性分析

【目的】探讨线粒体CoxⅡ和atpA基因与苎麻CMS的关系。【方法】根据GenBank报道的双子叶植物线粒体CoxⅡ和atpA基因编码区高度保守序列设计简并引物,通过PCR技术从苎麻细胞质雄性不育系、保持系和恢复系(简称"三系")mtDNA中扩增目的基因片段;采用DNAWalking策略从3′端和5′端扩增基因片段的未知侧翼序列,分离完整的线粒体CoxⅡ、atpA基因;基于全基因序列和基因表达(RT-PCR法)分析这两个基因在苎麻"三系"间的差异。【结果】分离的苎麻CoxⅡ和atpA基因片段与GenBank中一些双子叶植物同类基因的同源性分别高达95%和97%以上,获得的CoxⅡ、atpA全基因包含了完整的开放阅读框。"三系"的CoxⅡ基因在mtDNA水平、转录水平、蛋白质水平上均无明显差异。雄性不育系atpA基因在mtDNA水平、氨基酸序列和蛋白质二级结构上与保持系和恢复系存在比较明显的差异;RT-PCR分析还表明,不育系atpA基因在现蕾期和开花后期的表达量明显低于可育系。【结论】CoxⅡ基因与苎麻CMS可能无关,而不育系atpA基因的序列变异和/或异常表达可能与苎麻CMS关系密切。

L-精氨酸经一氧化氮途径对人结肠癌细胞株LS174的作用及其机制

目的探讨L-精氨酸(L-Arg)经一氧化氮途径对人结肠癌细胞株LS174的作用及其机制。方法LS174细胞在不同浓度L-Arg干预后,采用MTT法检测细胞增殖活性;光镜和电子显微镜观察细胞形态和结构的变化;AnnexinV/PI标记染色测定凋亡细胞;Western blotting和免疫细胞化学染色SP法检测VEGF、COX-2、p53、bcl-2和bax的表达。结果低浓度(0.125mmol/L)L-Arg对LS174细胞的生长有促进作用,高浓度(0.5、2、8、32mmol/L)L-Arg对LS174细胞的生长有抑制作用;在高浓度L-Arg组作用48h后引起了细胞核和细胞质一系列超微结构改变,电子显微镜可见LS174出现细胞缩小、染色质边集、固缩等细胞凋亡的形态改变;对照组凋亡细胞百分比为2.84%,低浓度L-Arg组凋亡细胞百分比为2.29%,随着L-Arg浓度增加,凋亡细胞百分比增加明显,分别为26.88%、28.95%、63.36%、84.51%;VEGF和COX-2在低浓度L-Arg组表达较对照组有增加趋势;p53和bcl-2在高浓度L-Arg组表达较对照组有明显降低趋势;bax在高浓度L-Arg组表达较对照组有明显增加趋势。结论低浓度L-Arg对LS174细胞的生长有促进作用,高浓度L-Arg对LS174细胞的生长有抑制作用;低浓度的L-Arg对LS174细胞的生长有促进作用的机制可能是在L-Arg代谢产物NO作用下,与上调VEGF与COX-2蛋白有关;高浓度的L-Arg对LS174细胞的生长有抑制作用的机制可能是在L-Arg代谢产物NO作用下,诱导肿瘤细胞凋亡;L-Arg诱导凋亡的机制与上调bax蛋白表达及下调p53和bcl-2蛋白表达有关。

育龄期女性缺铁性贫血患者血小板COX-1与COX-2的表达及临床意义

目的:检测育龄期女性缺铁性贫血(iron deficiency anemia,IDA)患者血小板环氧化物酶1(cyclooxygenase-1,COX-1)和环氧化物酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达水平,并探讨其与贫血及血小板各指标间的相关性。方法:募集育龄期女性缺铁性贫血患者40例和健康女性对照组35例,采用流式细胞术分析血小板环氧化酶1和2(cyclooxygenase,COX-1,2)的表达,应用比浊法测定血小板聚集功能,电化学发光法检测血清铁蛋白水平,ELISA测定血清铁含量;采用SPSS19.0软件对各指标在2组中的差异及相关性进行统计分析。结果:与健康对照组相比,育龄期女性缺铁性贫血患者血小板COX-1和COX-2的表达水平显著降低(P<0.05),而血小板计数(Plt)、平均血小板体积(MPV)和血小板聚集率(PAgT)在2组间差异比较均无统计学意义(P>0.05)。相关性分析表明,血小板COX-1的表达水平与血红蛋白(Hb)(r=0.623,P<0.01)、血清铁(r=0.321,P<0.05)、红细胞压积(HCT)(r=0.305,P<0.05)均呈正相关,与Plt数、MPV和PAgT均无相关性(P>0.05);而血小板COX-2的表达水平与各指标间均不存在相关性(P>0.05)。结论:血小板COX-1,COX-2在育龄期女性缺铁性贫血患者中的表达水平明显下降,且COX-1与贫血严重程度密切相关,对育龄期女性缺铁性贫血的临床诊断具有参考价值。

加味丹参饮预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨加味丹参饮（JDSH）预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤（IRI）的保护作用及机制。方法采用结扎大鼠冠状动脉左前降支30 min后再灌注30/60 min模型,将56只SD雄性大鼠随机分为7组：假手术组、缺血/再灌注（I/R）30 min组、I/R 60 min组、p38MAPK阻断剂SB203580＋I/R 30 min组、SB203580＋I/R 60 min组、JDSH＋I/R 30 min组、JDSH＋I/R60 min组。各组干预2 d后,HE染色心肌组织标本,全自动生化分析仪测定血清CK、LDH,免疫组化法检测p38MAPK、COX-2和ICAM-1蛋白的表达。结果经JDSH预处理或p38MAPK阻断剂SB203580处理后心肌细胞形态结构保持更好。与假手术组比较,I/R30 min组和I/R 60min组大鼠血清中的CK、LDH明显升高（P〈0.01）;与I/R 30/60 min比较,SB203580＋I/R 30/60 min组和JDSH＋I/R 30/60 min组均明显降低（P〈0.01）。与假手术组比较,I/R使大鼠心肌组织的p38MAPK、COX-2、ICAM-1蛋白表达增加（P〈0.01）,且随再灌注时间的延长而增加;与I/R 30/60 min组比较,SB203580和JDSH均能减少其蛋白表达（P〈0.01）。结论大鼠心肌IRI时,激活了p38MAPK信号通路,且与再灌注时间（30-60 min）呈正相关。JDSH通过抑制p38MAPK信号通路,降低其下游基因COX-2和ICAM-1的表达,降低CK、LDH,减轻心肌损伤,起到保护心肌作用。

向量参数的线性函数之广义最大似然估计

最大似然估计不存在的情况在非正态回归模型中最为典型 ,当参数向量不能被估计时 ,人们对参数向量的线性函数的估计饶有兴趣 .本文给出了这些线性函数的广义最大似然估计的定义 ,建立了一些关于凹目标函数的结果 ,对某些特殊的目标函数 ,提供了求广义最大似然估计的具体途径 ,并详细地考虑了 Cox的生存时间分析的模型 .

塞来昔布对肝癌HepG2 HepG3细胞的免疫增敏作用

目的探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对人肝癌HepG2和HepG3细胞株对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)的增敏作用及其可能机制。方法以人HepG2 HepG3肝癌细胞为研究对象,以塞来昔布和TRAIL作为干预手段,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测塞来昔布对肝癌细胞株的增殖抑制作用,采用流式细胞术,检测塞来昔布联合TRAIL对HepG2,HepG3细胞的凋亡及DR4,DR5的表达。塞来昔布与不同效靶比的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合作用于人肝癌细胞株,经LDH检测法检测其杀伤作用。结果塞来昔布及TRAIL对人肝癌HepG2和HepG3细胞株均有显著抑制作用,塞来昔布联合TRAIL可显著增敏TRAIL对HepG2和HepG3的杀伤,其差异具有统计学意义(P<0.05),经过塞来昔布预处理的肝癌细胞更易被CIK细胞杀伤。结论塞来昔布对人肝癌HepG2和HepG3细胞株具有明显细胞毒性,联合TRAIL及CIK可显著增敏后者对肝癌细胞的杀伤效应,其机制可能与塞来昔布上调DR4,DR5有关。

NEDD4L作为骨肉瘤预后标志物的生物信息学研究

目的通过生物信息学方法筛查骨肉瘤(OS)患者与健康人骨组织的差异表达基因(DEGs)并进行筛选,构建OS患者的预后预测模型,为OS的预后评估提供潜在的生物标志物。方法基于公共数据库获得OS的DEGs,构建单因素及多因素Cox回归分析预后模型,绘制生存曲线并使用ROC曲线评估预后模型效果,使用蛋白质印迹和组化染色在蛋白水平检测表达格局。结果本研究在OS患者与健康人骨组织中共筛选出2806个DEGs;单因素Cox回归分析显示,其中9个基因是总生存时间的独立危险因素(P<0.05);以神经前体细胞表达发育下调样基因4(NEDD 4 L)为主的多因素Cox回归分析ROC曲线1、3、5年AUC分别为0.76、0.84、0.86,单因素Cox回归分析AUC分别为0.78、0.72、0.72;在肿瘤微环境分析中NEDD 4 L表达量与肿瘤纯度显著正相关(R=0.35,P=0.0010),在基因集富集分析中低表达NEDD 4 L与多种肿瘤相关通路有关;蛋白质印迹和组化染色均提示NEDD4L在OS中低表达。结论低表达NEDD 4 L与OS的不良预后存在紧密联系,构建了稳定的NEDD 4 L单因素与多因素预后预测模型,可为临床OS患者的预后评估提供参考。

维药罗勒不同提取组分在体外对Ecv304细胞COX-1活性的影响

目的:探讨维药罗勒不同提取组分在体外对环氧化酶-1(COX-1)的合成物6-keto-PGF1α浓度的影响,间接证明其对COX-1活性的影响,进而找出该药抗血栓的作用机制及其有效部位。方法:将维药罗勒不同提取组分对Ecv304细胞进行不同时间的药物干预,采用MTT法检测活细胞数目,ELISA法测定细胞上清液中6-keto-PGF1α的浓度。结果:不同组分在不同时间内对6-keto-PGF1α的浓度有不同的影响,在短时间内,OBL-正丁醇和OBL-乙醇均能显著增加6-keto-PGF1α的浓度(P<0.01);长时间内,OBL-乙酸乙酯可显著性地降低6-ket-PGF1α的浓度(P<0.05),而OBL-氯仿和OBL-正丁醇中高剂量可显著增加6-keto-PGF1α的浓度(P<0.01)。结论:维药罗勒可能通过抑制TXA2合成酶的活性,激活COX-1的酶活性,最终维持TXA2-PGI2的平衡而产生抗血栓作用,正丁醇提取部位是其发挥激活COX-1酶活性作用的有效部位。

小麦COXVIIa基因克隆及其蛋白序列分析

为研究小麦(Triticum aestivum L.)细胞色素C氧化酶复合蛋白结构与功能关系,本研究采用电子克隆和RT-PCR技术克隆了一个小麦细胞色素C氧化酶7a亚基(COXVIIa)基因的c DNA序列,并以生物信息学方法对其翻译的蛋白质及相应垂直同源蛋白质序列进行了比较和鉴定,模建了其三级结构,分析了其与被子植物中同源蛋白质之间的进化关系。结果表明,小麦COXVIIa基因的c DNA序列长494 bp,包含一个210 bp长的开放阅读框,编码69个氨基酸组成的多肽。亚细胞定位预测结果表明,该蛋白与其垂直同源蛋白均定位于线粒体中。在小麦COXⅦa蛋白序列中,36~58 aa形成一个跨膜螺旋区,且1~35 AA(N端)位于膜外,59~69AA(C端)位于线粒体内部;模建的三级结构主要由2段α螺旋结构组成,属于全α型蛋白,与其二级结构预测结果一致。基因表达分析表明该基因在叶鞘中不表达,而在其他组织中均不同程度的表达;在花、花冠和花序组织中具有较高的表达量。进化分析表明,小麦COXⅦa蛋白与乌拉尔图小麦(Triticum urartu)、大麦、二穗短柄草(Brachypodium distachyon)和玉米等单子叶植物进化距离较近,与油菜、玉山筷子芥(Arabidopsis lyrata subsp.Lyrata)、大豆、杨树、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)等双子叶植物的进化距离较远,COXⅦa在这些被子植物中具有较强的保守性。本研究为揭示小麦COX蛋白复合物的结构和功能提供了理论依据。

三七总皂苷联用阿司匹林对后者抗血小板凝集作用的影响

目的：对比与三七总皂苷联用前后阿司匹林的抗血小板凝集作用,探讨三七总皂苷对阿司匹林药效的影响。方法：将24只大鼠随机分为4组,分别为正常组,三七总皂苷组（NTS,31.25 mg·kg（-1））,阿司匹林组（ASA,20.83 mg·kg（-1））,三七总皂苷与阿司匹林联用组（NTS,31.25 mg·kg（-1）＋ASA,20.83 mg·kg（-1））。除正常组外,其余各组分别灌胃给药相应浓度药液。于第5,30,60,120,240,480 min时取血,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）测定血清中血栓素A_2（TXA_2）,环氧化酶-1（COX-1）,环氧化酶-2（COX-2）水平。结果：ASA组COX-1及COX-2含量与正常组无显著性差异。NTS组在5240 min内COX-1含量显著低于正常组（P〈0.01）,在30,60,120,480 min COX-2含量显著低于正常组（P〈0.01）。ASA与NTS联用组在560 min内COX-1含量显著低于正常组及ASA组（P〈0.05）,在5240 min内COX-2含量显著低于正常组和ASA组（P〈0.01）。各实验组大鼠血清中TXA_2含量在5240 min内均显著低于正常组（P〈0.01）,其中联用组在第30,60,240 min明显低于阿司匹林组（P〈0.05,P〈0.01）。联用组对TXA_2的抑制作用在60 min时达到峰值。结论：三七总皂苷与阿司匹林联用后抗血小板凝集作用优于阿司匹林或三七总皂苷单用组。二者对TXA_2的抑制为相加作用,其中三七总皂苷可抑制COX-1,COX-2的表达,可能是增强阿司匹林抗血小板凝集作用的途径之一。

COX-2、Ki-67和细菌L型感染在卵巢肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)、Ki-67和细菌L型感染在卵巢肿瘤中的表达及临床相关性。方法应用免疫组化、原位杂交和革兰染色等方法检测了120例卵巢肿瘤中的COX-2、Ki-67蛋白及mRNA的表达,以及细菌L型的检出率。并对97例卵巢乳头状癌和23例卵巢乳头状瘤主要临床资料和病理分级参数进行比较,用χ2检验进行统计学处理。结果 COX-2、Ki-67蛋白及mRNA阳性表达恶性肿瘤明显高于良性肿瘤(P<0.01)。细菌L型检出阳性率与卵巢良、恶性肿瘤差异无统计学意义(P>0.5)。COX-2、Ki-67蛋白及mRNA阳性表达以及细菌L型检出阳性率与卵巢乳头状癌的临床分期、病理分级和腹腔淋巴结有转移有显著相关性(P<0.01)。细菌L型阳性患者中COX-2、Ki-67阳性明显高于L型阴性患者中阳性表达,2组差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 COX-2、Ki-67蛋白及mRNA在卵巢肿瘤中有不同程度的异常表达,与卵巢癌的临床分期、病理分级和浸润、转移呈正相关,L型感染极有可能成为诱发肿瘤因素一,他们可能有协同致瘤作用。研究L型感染与卵巢肿瘤的关系,具有重要的临床应用价值。

COX-2、Ki-67和结核菌L型感染在前列腺癌中的表达

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)和Ki-67在前列腺癌中的表达以及结核菌L型感染率及临床意义。方法应用免疫组化、原位杂交和抗酸染色等方法检测了65例前列腺癌(carcinoma of prostate,PCa)和30例良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)中的COX-2、Ki-67蛋白及mRNA的表达,以及结核菌L型的检出率;并对前列腺肿瘤主要临床资料和病理分级参数进行比较,用χ2检验进行统计学处理。结果COX-2、Ki-67蛋白及mRNA阳性表达和结核菌L型检出率,前列腺癌明显高于前列腺增生(P<0.001～0.05)。COX-2、Ki-67蛋白及mRNA阳性表达和结核菌L型检出率与前列腺癌的临床分期、病理分级有明显差异(P<0.01～0.05)。淋巴结转移组中COX-2、Ki-67蛋白及mRNA的阳性表达率明显高于非转移组(P<0.01)。结核菌L型检出率淋巴结转移组明显高于非转移组(P<0.05)。结论COX-2、Ki-67蛋白及mRNA在前列腺肿瘤中不同程度异常表达以及结核菌L型检出率与肿瘤的临床分期、病理分级和转移呈正相关,提示2种基因均可作为判断前列腺癌生物学行为及患者预后参考指标。结核菌L型感染极有可能导致基因的变异或过表达,成为诱发肿瘤因素之一,它们可能有协同致瘤作用。

阿尔泰金莲花有效成分抗炎作用的研究

目的:研究阿尔泰金莲花总黄酮及其成分荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷(OGA)的抗炎作用。方法:以环氧合酶1/2(COX 1/2)及5-脂氧酶(5-LO)抑制剂筛选试剂盒检测阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对COX 1/2和5-LO的抑制作用;脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞建立炎症细胞模型,采用MTS法检测阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对RAW264.7细胞活力的影响,Griess试剂检测一氧化氮(NO)的分泌量,用2’,7’-氯荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)释放情况,ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和前列腺素E;(PGE;)的分泌量,RT-qPCR法测定炎症因子Tnf-α、Il-1β和Il-6的mRNA表达。结果:阿尔泰金莲花总黄酮对COX-1、COX-2酶的半数抑制浓度分别106.66μg/mL,6.94μg/mL;荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对COX-1、COX-2的半数抑制浓度分别为140.34μg/mL,5.01μg/mL,阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对5-LO无明显影响;阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷在1.95μg/mL~125μg/mL条件下对RAW264.7细胞不产生毒性作用。与正常对照组比较,模型对照组细胞中NO、ROS、TNF-α、IL-6、MCP-1和PGE;含量显著升高(P<0.01),Tnf-α、Il-1β和Il-6 mRNA表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷呈剂量依赖性地降低细胞中NO、ROS、TNF-α、IL-6、MCP-1和PGE;的分泌(P<0.05或P<0.01),下调Tnf-α、Il-1β和Il-6的mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。结论:阿尔泰金莲花总黄酮具有良好的抗炎作用,荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷是其发挥抗炎作用的物质基础之一,其作用机制可能是通过抑制COX-2活性,减少RAW 264.7细胞NO、PGE;、MCP-1及炎性因子的分泌,下调Tnf-α、Il-6、Il-1βmRNA的表达有关。