藤壶cp19k基因mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响

目的探究藤壶cp19k基因5′端mRNA二级结构对其在大肠杆菌中表达的影响。方法通过对3个藤壶物种的cp19k基因(balcp19k、mrcp19k、bicp19k)序列进行分析,并利用大肠杆菌密码子偏好性对其进行优化,将优化后的3个基因序列利用BioSun软件分析其5′端和3′端的mRNA二级结构和自由能。利用大肠杆菌原核表达系统对3个基因进行表达,并通过SDS-PAGE观察蛋白表达情况。结果3个基因的3′端mRNA二级结构和自由能差异较小;5′端mRNA二级结构相比,balcp19k结构相对简单,自由能较高,mrcp19k和bicp19k二级结构较稳定,自由能较低。SDS-PAGE及Western印迹结果显示,Balcp19k蛋白有表达,而Mrcp19k蛋白和Bicp19k蛋白无表达。结论cp19k基因5′端mRNA二级结构稳定且自由能低不利于蛋白表达。此结果为藤壶cp19k的进一步研究奠定了基础,也为其他外源基因在原核系统中表达提供了借鉴。

Anti-CD19Fab-(CP)_(3)新型二聚化抗体的构建及靶向性观察

目的构建并表达Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化抗体,鉴定其蛋白分子量及相对含量并观察其靶向性。方法通过基因克隆技术构建原核表达载体PAYZ-Anti-CD19Fab-(CP)_(3)及阳性对照质粒PAYZ-Anti-CD19Fab-(CPP)_(3),将质粒转化至大肠杆菌16C9中进行表达。表达产物经过透析及Protein G亲和层析柱纯化,采用SDS-PAGE电泳法及液相串联质谱法(LC-MS)鉴定Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化抗体分子量及相对含量;采用流式细胞术检测二聚化抗体与CD19^(+)B系淋巴瘤Raji细胞的结合能力以及二聚化抗体对CD19鼠源亲本全抗的竞争能力。结果成功构建并表达Anti-CD19Fab-(CP)_(3),所得产物纯化后经SDS-PAGE及LC-MS法鉴定其主要成分为二聚化抗体,含量为76.2%;Anti-CD19Fab-(CP)_(3)二聚化比例高于对照Anti-CD19Fab-(CPP)3,差异有统计学意义(P<0.05)。同浓度下,与Anti-CD19Fab-(CPP)_(3)及Anti-CD19Fab相比,Anti-CD19Fab-(CP)_(3)对Raji细胞的结合能力更强,亲和力更好,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论通过在Fab的CH1尾端引入(CP)_(3)的改构方式可有效形成高比例二聚化抗体,显著提高抗体对靶细胞的靶向性,未来可应用于多价抗体及相关药物研发。

曲线的魅力——SONY VAIO VGN-A11C试用报告

SONY VAIO，一个充满活力、个性张扬的品牌，每隔一年便会推出全新的系列，且每次都让人有焕然一新的感觉。日前，SONY再次对VAIO产品线进行了重新定位和调整，推出了包括A、X、S和TR四个系列共十款机型，其中的A系列便是VAIO的新旗舰级产品。经过与SONY的积极联系，我们在第一时间试用和测试了SONY VAIO VGN—A11C国内行货版。