以CP23重组蛋白为抗原建立检测微小隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究

以在 E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原 CP2 3为抗原 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的山羊抗鼠Ig G为二抗 ,建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接 EL ISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为 1μg/孔纯化的 E.coli表达的CP2 3抗原包被酶标板 ,用 10 %兔血清进行封闭 ,以正常 E.coli裂解上清液稀释待检血清。实验表明应用 CP2 3重组蛋白作为诊断 C.parvum抗原具有特异性高。

微小隐孢子虫重组蛋白CP23与CP15/60-23免疫原性的研究

目的探讨微小隐孢子虫重组蛋白CP23与CP15/60-23的免疫原性。方法用重组蛋白CP23与CP15/60-23分别免疫BALB/c小鼠,免疫3次,2w后检测抗CP23与CP15/60-23的特异性抗体IgG滴度、小鼠脾脏CD4+、CD8+T细胞及其培养上清中的细胞因子IFN-γ、IL-12,实验同时设PBS对照组;之后用微小隐孢子虫卵囊攻击免疫小鼠,收集小鼠粪便,计算小鼠排出的卵囊量。结果自免疫第2周特异性IgG抗体滴度水平逐渐升高,重组蛋白CP15/60-23组升高更为明显,免疫小鼠脾脏T细胞CD4+、CD8+百分比及CD4+/CD8+比值都增高,细胞因子IFN-γ、IL-12的水平亦增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);卵囊攻击后,各组小鼠粪便中的卵囊数量都很低,各组之间无明显差异。结论重组蛋白CP23和CP15/60-23皆可产生较好的细胞及体液免疫反应,具有较强的免疫原性。

保定地区奶牛源微小隐孢子虫子孢子表面抗原Cp23免疫特性的研究

为了解河北省保定地区奶牛源微小隐孢子虫子孢子表面抗原Cp23的免疫特性,将重组质粒p ET28-Cp23表达产物纯化后免疫4周龄BALB/c小鼠,进行细胞免疫水平和体液免疫水平的检测。结果显示,试验组的CD4~＋/CD8~＋T淋巴细胞比值和Ig G水平增加明显,IL-12及IFN-γ的质量浓度亦都增高,与对照组比较均有统计学意义（P〈0.01）。结果表明,用重组蛋白Cp23免疫小鼠后可产生高水平的体液免疫和细胞免疫。本研究为保定地区隐孢子虫病的预防提供了材料。

构建检测隐孢子虫特异性抗体的多重微粒子免疫检测法

目的建立一种检测微小隐孢子虫特异性抗体的微粒子免疫检测法(MIA)。方法以纯化的重组蛋白CP23、SA35和SA40为检测抗原,以牛血清白蛋白(BSA)为内参,偶联微粒子,并进行蛋白偶联效率验证。比较单一MIA法和多重MIA法的一致性,以及多重MIA法检测的板内和板间差异。结果纯化蛋白和BSA成功偶联到相应的微粒子上,建立了多重MIA法检测血清隐孢子虫抗体的最佳检测条件,且证实多重检测并不降低检测的敏感性和特异性。结论多重MIA法可以快速检测隐孢子虫感染后人体产生的多种特异性抗体,敏感性、特异性均较高,可成为人群大规模血清流行病学调查的有力工具之一。