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CPC乙酰化酶底物结合区域Loop上脯氨酸对其催化特性的影响
1
作者
唐存多
史红玲
+4 位作者
焦铸锦
刘飞
许建和
阚云超
姚伦广
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第12期34-39,共6页
低温CPC乙酰化酶在7-ACA的生物合成中具有重要作用和显著的优势,开发低温CPC乙酰化酶具有重大的经济价值。为了获得在低温下具有更高催化活性的CPC乙酰化酶,在前期的研究基础上,以先前获得的CA IIIM为亲本,借助分子对接的手段确定了它...
低温CPC乙酰化酶在7-ACA的生物合成中具有重要作用和显著的优势,开发低温CPC乙酰化酶具有重大的经济价值。为了获得在低温下具有更高催化活性的CPC乙酰化酶,在前期的研究基础上,以先前获得的CA IIIM为亲本,借助分子对接的手段确定了它的底物结合区域,并利用py MOL软件找出了底物结合区域Loop上关键的脯氨酸残基,分析后将选定的脯氨酸用甘氨酸进行替换。借助p ET32a质粒在E.coli BL21(DE3)中进行了可溶性表达研究,除P272G外,其它突变体均实现了可溶性表达。P238G、P582G和P679G在13℃对CPC的催化活性分别为1.25、1.04和1.38U/mg,较亲本的0.85 U/mg有了显著的提高。此外,分别考察了亲本及突变体的温度稳定性,它们之间无明显的差异。然后,在13℃下进行了7-ACA低温生物合成的研究,结果表明反应24 h后CPC的转化率也能达到80%以上。由此可见在CPC乙酰化酶冷适应性改造方面取得了较为理想的结果,为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础,也为其它低温酶的创制提供了可资借鉴的经验。
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关键词
cpc
乙酰化酶
冷适应性
分子改造
理性设计
活性检测
原文传递
头孢菌素C乙酰化酶的半理性改造及7-ACA的生物合成
被引量:
4
2
作者
马晨露
唐存多
+5 位作者
史红玲
王瑞
岳超
夏敏
邬敏辰
阚云超
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期65-71,共7页
CPC乙酰化酶是一步酶法制备7-ACA的关键酶,针对它的研究具有重大的经济价值。为了获得对CPC具有更高催化活性的CPC乙酰化酶,以Pseudomonas sp SE 83来源的Ⅲ型CPC乙酰化酶CA Ⅲ为亲本,借助分子对接的手段确定了它与CPC结合的关键氨基酸...
CPC乙酰化酶是一步酶法制备7-ACA的关键酶,针对它的研究具有重大的经济价值。为了获得对CPC具有更高催化活性的CPC乙酰化酶,以Pseudomonas sp SE 83来源的Ⅲ型CPC乙酰化酶CA Ⅲ为亲本,借助分子对接的手段确定了它与CPC结合的关键氨基酸残基,并确定将这些关键氨基酸残基突变为侧链基团更小的氨基酸残基,对CA Ⅲ的编码基因利用多点定点突变试剂盒完成定点突变后借助p ET32a质粒在E.coli BL21(DE3)中实现了可溶性表达,获得了对CPC催化活性更高的重组突变体reCA Ⅲ~M,其比酶活为26.7 IU/mg,较原酶提高了3.44倍。此外,初步研究了利用reCA Ⅲ^M进行一步酶法生产7-ACA的工艺,40 IU/g CPC的加酶量、25℃的条件下反应12 h,CPC的转化率和7-ACA的得率分别可达96.3%和63.4%,表明该酶具有良好的应用前景。CPC乙酰化酶的分子改造上取得的较为理想的结果,为该酶进一步的分子改造及应用奠定了坚实的基础,也为其它酶的分子改造提供了可资借鉴的经验。
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关键词
cpc
乙酰化酶
生物催化
分子改造
理性设计
活性检测
原文传递
题名
CPC乙酰化酶底物结合区域Loop上脯氨酸对其催化特性的影响
1
作者
唐存多
史红玲
焦铸锦
刘飞
许建和
阚云超
姚伦广
机构
南阳师范学院昆虫生物反应器河南省工程实验室河南省南水北调中线水源区生态安全重点实验室
华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第12期34-39,共6页
基金
国家自然科学基金(31371381)
河南省科技攻关项目(162102210116)
+1 种基金
河南省高等学校重点科研项目计划(15A416008)
河南省南水北调中线水源区水生态安全创新型科技团队专项(17454)资助项目
文摘
低温CPC乙酰化酶在7-ACA的生物合成中具有重要作用和显著的优势,开发低温CPC乙酰化酶具有重大的经济价值。为了获得在低温下具有更高催化活性的CPC乙酰化酶,在前期的研究基础上,以先前获得的CA IIIM为亲本,借助分子对接的手段确定了它的底物结合区域,并利用py MOL软件找出了底物结合区域Loop上关键的脯氨酸残基,分析后将选定的脯氨酸用甘氨酸进行替换。借助p ET32a质粒在E.coli BL21(DE3)中进行了可溶性表达研究,除P272G外,其它突变体均实现了可溶性表达。P238G、P582G和P679G在13℃对CPC的催化活性分别为1.25、1.04和1.38U/mg,较亲本的0.85 U/mg有了显著的提高。此外,分别考察了亲本及突变体的温度稳定性,它们之间无明显的差异。然后,在13℃下进行了7-ACA低温生物合成的研究,结果表明反应24 h后CPC的转化率也能达到80%以上。由此可见在CPC乙酰化酶冷适应性改造方面取得了较为理想的结果,为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础,也为其它低温酶的创制提供了可资借鉴的经验。
关键词
cpc
乙酰化酶
冷适应性
分子改造
理性设计
活性检测
Keywords
cpc
acylase
Cold adaptation
molecular
modification
rational
design
activity
assay
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
头孢菌素C乙酰化酶的半理性改造及7-ACA的生物合成
被引量:
4
2
作者
马晨露
唐存多
史红玲
王瑞
岳超
夏敏
邬敏辰
阚云超
机构
南阳师范学院昆虫生物反应器河南省工程实验室
江南大学无锡医学院
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第12期65-71,共7页
基金
国家自然科学基金(31401989)
河南省高等学校重点科研项目计划(15A416008)资助项目
文摘
CPC乙酰化酶是一步酶法制备7-ACA的关键酶,针对它的研究具有重大的经济价值。为了获得对CPC具有更高催化活性的CPC乙酰化酶,以Pseudomonas sp SE 83来源的Ⅲ型CPC乙酰化酶CA Ⅲ为亲本,借助分子对接的手段确定了它与CPC结合的关键氨基酸残基,并确定将这些关键氨基酸残基突变为侧链基团更小的氨基酸残基,对CA Ⅲ的编码基因利用多点定点突变试剂盒完成定点突变后借助p ET32a质粒在E.coli BL21(DE3)中实现了可溶性表达,获得了对CPC催化活性更高的重组突变体reCA Ⅲ~M,其比酶活为26.7 IU/mg,较原酶提高了3.44倍。此外,初步研究了利用reCA Ⅲ^M进行一步酶法生产7-ACA的工艺,40 IU/g CPC的加酶量、25℃的条件下反应12 h,CPC的转化率和7-ACA的得率分别可达96.3%和63.4%,表明该酶具有良好的应用前景。CPC乙酰化酶的分子改造上取得的较为理想的结果,为该酶进一步的分子改造及应用奠定了坚实的基础,也为其它酶的分子改造提供了可资借鉴的经验。
关键词
cpc
乙酰化酶
生物催化
分子改造
理性设计
活性检测
Keywords
cpc acylase biocatalysis molecular modification rational design activity assay
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
CPC乙酰化酶底物结合区域Loop上脯氨酸对其催化特性的影响
唐存多
史红玲
焦铸锦
刘飞
许建和
阚云超
姚伦广
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2017
0
原文传递
2
头孢菌素C乙酰化酶的半理性改造及7-ACA的生物合成
马晨露
唐存多
史红玲
王瑞
岳超
夏敏
邬敏辰
阚云超
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
4
原文传递
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