Cpd5抗宫颈癌作用的研究

目的观察2-(2-巯基乙醇)-3-甲基-1,4-萘醌(Compound 5,Cpd5)对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察Cpd5对HeLa细胞的生长抑制作用,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测Cpd5对HeLa细胞的凋亡诱导,Hoechst-33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态。结果 10、20、30、40、50μmol/L Cpd5处理HeLa细胞48h,生长抑制率分别为4.23、13.11、35.13、51.37、79.90%。不同时间点(12、24、48和72h)检测,细胞生长抑制率存在剂量-时间依赖关系。流式细胞术检测,30μmol/L Cpd5处理12、24和48h后,细胞凋亡率分别达7.15、16.07、44.16%;50μmol/L组的细胞凋亡率明显高于30μmol/L,且随时间增加而显著增加。结论 Cpd5能以剂量-时间依赖的方式抑制HeLa细胞增殖并诱导调亡,是潜在的抗宫颈癌新药。

Cpd5对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的:观察Cpd5[2-(2-巯基乙醇)-3-甲基-1,4-萘醌,Compound5]对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。方法:MTT法观察Cpd5对SK-OV3细胞的生长抑制作用,AnnexinV/PI双标记流式细胞术检测Cpd5对SKOV3细胞的凋亡诱导,Hoechst-33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态。结果:5、10、20、30、40、50、60μmol/LCpd5处理SKOV3细胞48h,生长抑制率分别为2.77%、5.19%、10.61%、41.15%、71.37%、82.90%、89.81%。不同时间点(12、24、48和72h)检测,细胞生长抑制率存在剂量-时间依赖关系。流式细胞术检测,30μmol/LCpd5处理12、24和48h后,细胞凋亡率分别达9.25%、20.07%、56.16%;50μmol/L组的细胞凋亡率明显高于30μmol/L,且随时间增加而显著增加。用40、50和60μmol/LCpd5处理细胞12h,光镜观察即可见明显的形态学改变。荧光显微镜观察:AnnexinV-EGFP/PI双染显示,实验组比阴性对照组细胞凋亡率明显增多;Cpd5作用24、48h后,Hoechst-33258染色可见细胞出现明显的凋亡形态,20μmol/L浓度组凋亡率增加,30、40、50、60μmol/L各组细胞凋亡率显著增加。结论:Cpd5能以剂量-时间依赖的方式抑制SKOV3细胞增殖并诱导凋亡,是潜在的抗卵巢癌新化合物。

Cpd5的抗肿瘤作用机制

2-（2-巯基乙醇）-3-甲基-1，4-萘醌（Cpd5）在体内外均能抑制多种肿瘤细胞生长，诱导凋亡。其作用机制主要是抑制蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）尤其是Cdc25磷酸酶诱导细胞外信号调节激酶（ERK）持续磷酸化，负调节c—myc基因表达，导致细胞周期阻滞并影响相关基因表达，抑制细胞生长。Cpd5抑制cAMP反应元件结合蛋白（CREB）活性，抑制核糖体S6激酶磷酸化，抑制cAMP效应元件介导的基因表达和细胞生长，激活caspase通路，诱导癌细胞凋亡。cpd5有望发展成为高效、低毒的新抗肿瘤药物。

普鲁卡因对光动力作用的影响

目的：1)体外观察光敏剂CPD_5对人胰癌细胞(HS766T)的光动力效果；2)观察普鲁卡因对CPD_5光动力作用的影响。方法：浓度为1×10~5／ml的胰癌细胞,加到96孔培养板中,每孔100μl,然后再加入不同浓度的CPD_5,培养24 h弃旧液,更换新鲜培养液。普鲁卡因组加普鲁卡因,CPD_5光动力对照组加生理盐水。670 nm半导体激光器,光剂量10 J／cm^2,逐孔照射3 min。继续培养24 h后,用细胞排染试验测细胞存活率。结果：1)CPD_5浓度为2．5μg／ml时,PDT后胰癌细胞存活率为2．0%；2)加入普鲁卡因(20μg／ml)后,CPD_5(浓度为2．5／μg／ml)光动力效果是胰癌细胞存活率97．0%。结论：普鲁卡因可明显地淬灭CPD_5光动力作用。

探讨亚甲蓝的光动力作用

目的:探讨亚甲蓝的光动力作用及其在CPD5的PDT中是否表现出抗氧化特性。方法:采用细胞排染试验(1)对比观察了亚甲蓝和CPD5对胰癌细胞的光动力效果。(2)观察了亚甲蓝对CPD5光动力作用的影响。结果:(1)亚甲蓝的PDT效果不如CPD5。(2)CPD5浓度在(0.625～5)μg/ml范围内时,由于有亚甲蓝存在,CPD5的治疗作用下降;CPD5浓度在(0.078125～0.3125)μg/ml范围内时,亚甲蓝表现出光敏化作用。结论:(1)亚甲蓝的光动力效果不理想。(2)体外光动力过程中,未发现亚甲蓝的抗氧化性质。

CPD_5的光动力作用及维生素C抗光毒效果

采用细胞排染试验,观察CPD5对人胰癌细胞(Hs766T)的体外光动力疗法(PDT)作用及维生素C减轻光毒的效果。结果表明:1)人胰癌细胞对CPD5PDT敏感,在CPD5浓度为2.5μg/mL时,PDT造成胰癌细胞抑制率达97.4%;2)浓度为40μg/mL的维生素C有明显的减轻光毒作用,最高可使细胞存活率提高86.0%。