两种CpG寡核苷酸对乙型肝炎疫苗免疫小鼠淋巴细胞增殖的影响

目的观察人工合成的两种CpG寡核苷酸(CpG ODN)对乙型肝炎疫苗免疫小鼠淋巴细胞增殖效应的影响。方法BALB/c小鼠分别经乙肝疫苗、乙肝疫苗+CpG1826和乙肝疫苗+CpG2006免疫后,取小鼠脾和胸腺淋巴细胞,进行非特异性和特异性淋巴细胞增殖试验,应用MTT法分别检测淋巴细胞增殖效应。结果CpG两组与疫苗组及对照组相比,脾淋巴细胞增殖效应均显著增强,CpG1826组均优于CpG2006组,且差异有统计学意义;CpG两组的胸腺淋巴细胞非特异性增殖效应也显著增强,但CpG两组之间差异无统计学意义。结论CpG1826和CpG2006均能明显刺激BALB/c小鼠脾脏及胸腺淋巴细胞增殖,且CpG1826显示出更强的脾淋巴细胞免疫刺激效应。

CpG寡核苷酸的筛选及其对rSj28GST的免疫佐剂作用

目的 研究 Cp G寡核苷酸 (Cp G ODN)对日本血吸虫重组 2 8k Da GST(r Sj2 8GST)抗原分子的免疫佐剂作用和诱导 Th1型反应的效应。方法 用淋巴细胞增殖试验筛选对鼠有良好免疫刺激作用的 Cp G ODN;用基因工程方法生产 r Sj2 8GST抗原分子 ;EL ISA检测小鼠抗 r Sj2 8GST的同型抗体 Ig G1 、Ig G2 a水平。结果 筛选出的 Cp G ODN如 182 6、2 0 0 2、182 6 4、2 10 2等具有良好的免疫刺激活性 ,其 SI>2 ;纯化的 r Sj2 8GST抗原分子 ,呈单一电泳条带 ;以 Cp G ODN为 r Sj2 8GST免疫佐剂 ,其免疫小鼠产生的抗体滴度显著高于对照组 ,且同型抗体 Ig G2 a与 Ig G1 比值也明显升高。结论 Cp G ODN182 6 4是一种良好的免疫佐剂 ,并可显著诱导

CpG寡核苷酸增强鸡新城疫疫苗免疫效力的研究

为了探讨CpG寡核苷酸(CpG oligonucleotide,CpG ODN)对鸡新城疫疫苗免疫效力的影响,将CpG2007与鸡淋巴细胞共孵育,测定淋巴细胞增殖率,结果发现CpG2007对鸡淋巴细胞具有显著的刺激活性。将CpG2007与不同浓度的新城疫抗原混合,制备灭活疫苗,免疫健康雏鸡。分别于免疫后不同时间采血,测定抗体效价和细胞因子表达量,并进行攻毒保护试验。结果发现,添加CpG ODN佐剂的试验组均比对应相同抗原剂量的免疫对照组的抗体水平高,产生抗体速度快;抗原剂量降低10倍的佐剂试验组与高抗原剂量免疫对照组抗体水平和攻毒保护率均相当,表明CpG ODN能显著增强新城疫疫苗的免疫效力,能促进机体产生更强烈的免疫应答,是有效的疫苗佐剂候选物质。

哮喘诱发过程中腹腔注射CpG寡核苷酸的小鼠肺组织病理及BALF和血清TSLP表达观察

目的观察腹腔注射CpG寡核苷酸(CpG oligonucleotides,CpGODN)的急性支气管哮喘(简称哮喘)小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)、血清胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)表达变化。方法36只SPF雄性BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D组,每组各9只。A、B、C组用0.1%卵清百蛋白(OVA)/AL(OH)3混合凝胶0.1 mL于第1、14天腹腔注射致敏,第25~31天1%OVA雾化吸入激发小鼠,每日1次,每次30 min,连续7 d,制备急性哮喘模型。B组激发前1 d和每次激发前1 h,0.5 mg/kg的地塞米松腹腔注射;C组激发前1 d和每次激发前1 h,50μg的CpGODN腹腔注射;D组为正常对照组,每次致敏和激发均以生理盐水代替。末次激发24 h时取各组小鼠,采集眼球血后处死小鼠,收集右肺BALF,取肺组织观察肺组织炎性变化,ELISA法检测BALF、血清中TSLP。结果A组小鼠肺组织炎症水平、超微结构改变明显,B、C组肺组织炎症水平、超微结构改变轻于A组,D组小鼠肺组织无炎症水平改变。A、B、C、D组BALF中TSLP水平分别为(2.481±0.152)、(2.263±0.122)、(2.483±0.191)、(2.483±0.280)pg/mL,与A、C、D组比较,B组小鼠BALF中TSLP水平低(P均<0.05)。A、B、C、D组血清TSLP水平分别为(2.739±0.127)、(3.028±0.142)、(3.556±0.102)、(2.560±0.096)pg/mL,与D组比较,A、B、C组血清TSLP水平升高(P均<0.05),A、B、C组间两两比较,P均<0.05。结论腹腔注射CpGODN可减轻急性哮喘小鼠肺组织炎症水平,其机制可能与CpGODN影响TLSP的生物学效应有关。

CpG寡核苷酸的安全性实验研究

目的研究CpG寡核苷酸(CpGODN)作为免疫佐剂应用可行性。方法按要求配制CpGODN检测内毒素,采用昆明小鼠和豚鼠进行异常毒性试验和超敏试验;分别以10μg/只、100μg/只、300μg/只3个剂量组CpGODN进行小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验;以10μg/只、30μg/只、90μg/只3个剂量组的CpGODN分别交替于双侧后肢胫前肌肌肉注射Balb/c小鼠,每周2次,连续4周,进行血液学、血生化、病理组织学检查及抗核抗体、抗双链DNA抗体和肿瘤坏死因子检测。结果内毒素检测阴性,实验期内所有动物均未出现异常毒性反应和超敏反应,实验结束后所有动物全部健存且体重增加。CpGODN小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验为阴性结果;实验期间各组动物未见异常表现,体重增加各组间差异无显著性,血液学、血生化和病理组织学检查未见明显异常。未检测到ANA、dsDNA。各剂量组肿瘤坏死因子含量在与对照组之间比较差异均有显著性。结论所选用CpGODN作为生物制品使用是安全的;在受试剂量下微核试验阴性;在小鼠亚急性毒性实验中未引起毒性损害,安全性良好。

新型疫苗佐剂——细菌CpG寡核苷酸

佐剂的优化与研制 ,直接关系到新型疫苗的发展 ,开发新型疫苗佐剂是免疫策略的重要内容。含有细菌 Cp G基序的寡核苷酸 (Cp G ODN) ,因其具有免疫激活作用 ,可作为新型疫苗佐剂 ,以提高疫苗的免疫效应。本文就 Cp G ODN免疫佐剂作用机制以及相关研究进展进行了综述。

A、C型CpG寡核苷酸对变应性鼻炎小鼠鼻腔炎症反应的作用

目的探讨A、C型CpG寡核苷酸(ODN)对卵清蛋白诱导小鼠鼻腔炎症反应的作用。方法 40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、变应性鼻炎组、A组和C组。变应性鼻炎组、A组和C组用卵清蛋白致敏及激发,A、C组在激发同时分别应用A、C型CpGODN干预,正常对照组用生理盐水做对照。观察各组小鼠鼻部症状评分、鼻黏膜病理改变及测量血清IL-4、IL-5和IFN?水平。结果 A、C组鼻部症状评分均高于正常对照组(P<0.05或0.01),但明显低于变应性鼻炎组(P<0.05或0.01)。变应性鼻炎组血清IL-4、IFN?水平最高,IL-5水平最低(P<0.01)。C组血清IL-4、IFN?水平最低,IL-5水平最高(P<0.05或0.01)。结论 A、C型CpGODN可抑制卵清蛋白诱导的小鼠鼻腔炎症,且C型CpGODN抑制作用更强。

CpG寡核苷酸对人外周血淋巴样树突状细胞的增殖作用

目的 观察不同剂量的鸟嘌呤寡核苷酸 (CpGODN)对健康人外周血淋巴样树突状细胞 (DC2 )的增殖作用。 方法 用浓度为 4μm、1μm及 0 .1μm的CpGODN2 2 16单独或联合肿瘤抗原刺激健康人外周血新鲜分离的单个核细胞。培养 48h后用流式细胞术检测单个核细胞中DC2含量。结果 CpGODN2 2 16能显著刺激DC2增殖 ,使其数量增加。结论 CpGODN 2 2 16能有效促进淋巴样树突状细胞的增殖。

CpG寡核苷酸对人外周血单个核细胞的免疫刺激作用

目的 观察CpGODN、GM CSF、CD40 L对正常人外周血单个核细胞 (PBMC)的免疫刺激作用 ,以期筛选出一种高效的疫苗佐剂。方法 用CpGODN 2 0 0 6、GM CSF、CD40 L刺激正常人PBMC ,48h后采用ELISA法检测培养上清液中IFN γ、IL 12及IL 10水平 ;应用免疫荧光法检测PBMC上CD40、CD86、HLA DR的表达。结果 CpGODN 2 0 0 6能诱导正常人PBMC分泌较高水平的IL 12、IFN γ ,抑制IL 10的分泌 ;上调PBMCCD40、CD86、HLA DR表达的作用最强。结论 CpGODN 2 0 0 6是一种免疫刺激作用强大的新型佐剂 ,可用于多种疫苗的制备。

CpG寡核苷酸对IBDV VP2基因真核表达质粒免疫增效作用

以传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2蛋白基因表达质粒 DNA为免疫原 ,以 Cp G的寡核苷酸 (Cp G- ODN)为免疫佐剂 ,肌肉注射于 14日龄 SPF鸡 ,1周后加强免疫 1次 ,2次免疫后 15 d和 2 1d分别测定血清 EL ISA抗体效价 ,并于免疫后 2 1d用 IBDV99J1强毒株攻毒和进行病理学观察。结果显示 ,(1) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组的 EL ISA抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ;(2 ) IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组抗体水平明显高于 VP2重组质粒免疫组 ,且比 VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组略高 ;(3) VP2基因重组质粒 DNA与 Cp G共同免疫组及 IBD弱毒苗与 VP2重组质粒免疫组可明显降低 IBDV强毒攻击后引起的急性发病率和死亡率。由此表明 ,Cp G寡核苷酸对 IBDV VP2蛋白基因真核表达质粒免疫具有明显增强作用 ,有很大的应用前景。

CPG寡核苷酸对卵清蛋白致敏幼鼠血清中Th1/Th2细胞因子及肥大细胞趋化蛋白1的影响

目的利用卵清蛋白（ovalbumin,OVA）建立幼鼠食物过敏模型,观察非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤寡核苷酸（CPG oligodeoxynucleotide,CPG-ODN）对OVA致敏的干预作用。方法选用2~3周龄BALB/c雌性幼鼠40只建立幼鼠食物过敏模型,分为对照组、不同剂量OVA致敏组（20μg、50μg和100μg组）及CPG-ODN干预组（50μg OVA＋CPG-ODN）,每组8只。观察过敏症状并评分;眼球取血,检测血清中OVA-Ig E、肥大细胞趋化蛋白1（mast cell chemotactic protein 1,m MCP-1）及Th1/Th2相关细胞因子IFN-γ、IL-4的水平;空肠组织行病理学检测。结果除对照组外,致敏组小鼠均出现不同程度过敏症状,空肠表现为Ⅰ型变态反应病理特点,Th2细胞因子、OVA-Ig E、m MCP-1水平升高,20μg、50μg致敏组Th1水平降低,50μg致敏组指标改变最显著;与致敏组相比,干预组小鼠过敏症状及病理改变明显减轻,Th2细胞因子、Ig E及m MCP-1水平降低,Th1水平升高。结论用50μg OVA建立的BALB/c幼鼠食物过敏模型致敏效果最好,CPG-ODN通过改善Th1/Th2失衡状态,抑制幼鼠食物过敏反应。m MCP-1在过敏性疾病的发生、发展中起重要作用,有望成为食物过敏临床检测指标之一。

CpG寡核苷酸的免疫刺激作用及其在疫苗中的应用

CpG寡核苷酸 (ODN)是含有CpG基元的寡核苷酸 ,对树突状细胞、单核细胞、B细胞、T细胞和NK细胞等均具有较强的免疫激活功能。因此 ,目前CpGODN已用作免疫佐剂、粘膜疫苗、肿瘤疫苗及DNA疫苗 ,具有安全、高效、低毒的效果 。

用富含CpG的质粒初免并以蛋白及CpG寡核苷酸和Quil A加强免疫可诱导强的抗HCV NS3细胞及体液免疫应答

丙型肝炎病毒(HCV)中具有丝氨酸蛋白酶活性和解旋酶活性的NS3蛋白是最保守的蛋白之一；另外，与慢性感染病人相比，在感染恢复病人体内更易于检测到较强的NS3特异性免疫应答，使得NS3成为一种受到关注的候选疫苗。

Toll样受体9配体CpG寡核苷酸在特异性免疫治疗中的作用

变应性疾病的变应原特异性免疫治疗开始于1911年，是目前惟一能够影响变应性鼻炎自然进程的治疗手段。经过一个世纪的临床实践，特异性免疫治疗日臻完善，尤其是标准化变应原疫苗在特异性免疫治疗中的应用和推广，大大降低了急性超敏反应等并发症，同时在临床上取得了令人满意的疗效。但目前特异性免疫治疗还面临着一些需要解决的问题。首先，免疫接种后急性超敏反应虽然被限制在极低的水平，但仍有个别病例发生。

CpG寡核苷酸可作为幽门螺杆菌疫苗的佐剂

目的 研究一种新型黏膜佐剂 (一段寡核苷酸 ,序列为 :非甲基化的 5′ …嘌呤 嘌呤 CpG 嘧啶 嘧啶 … 3′(CpG ODN)是否可作为幽门螺杆菌 (Hp)疫苗的佐剂成分。 方法 C5 7BL/6小鼠经口灌胃给予Hp整菌超声粉碎物 (WCS) /CpG ODN或WCS/霍乱毒素 (CT) ,或经鼻给予WCS/CpG ODN ,并设立相应对照组。免疫程序及途径为每周 1次 ,共 4次 ,最后 1次免疫后 1周 ,以 5× 10 8Hp活菌攻击小鼠 ,攻击后 2周和 8周时 ,处死小鼠 ,鉴定Hp感染情况。同时收集小鼠血清、唾液、胃液 ,ELISA法检测血清中IgG、IgG1、IgG2a及IgA水平和唾液、胃液中IgA水平。 结果 以WCS作为抗原 ,不同佐剂及接种途径免疫小鼠 ,保护率分别为 :口服CT组 75 % (9/12 ) ,口服CpG ODN组 0 % (0 /10 ) ,滴鼻CpG ODN组 70 % (7/10 )。第 2和第 8周滴鼻CpG ODN组小鼠血清IgG2a水平显著高于未免疫的对照组(P <0 .0 5 )。结论 通过鼻道免疫CpG ODN是一很有前景的Hp疫苗佐剂成分。

非甲基化的CpG寡核苷酸对鼠巨噬细胞Toll样受体9及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响

目的探讨非甲基化的CpG寡核苷酸(CpG-ODN)对鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7 Toll样受体9(TLR-9)的表达及Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法体外培养小鼠单核-巨噬细胞系RAW264.7,置24孔培养板中,随机将细胞分为四组,分别为CpG-ODN组,Non-CpG-ODN组,CpG-ODN+氯喹组和对照组,分别添加CpG-ODN(0.3μg/ml),Non-CpG-ODN(0.3μg/ml),CpG-ODN+氯喹组(CpG-ODN和氯喹各0.3μg/ml),培养基。逆转录聚合酶链反应及Western blot检测24h后巨噬细胞TLR-9的表达,放免法及ELISA法检测刺激前后巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)及IL-12的表达水平。结果刺激24h后,巨噬细胞TLR-9mRNA的表达,CpG-ODN组与Non-CpG-ODN组比较,差异有统计学意义(t值为7.12,P<0.01);CpG-ODN组与对照组比较,差异有统计学意义(t值为8.04,P<0.01);CpG+氯喹组与Non-CpG-ODN组比较,差异有统计学意义(t值为4.25,P<0.05);CpG+氯喹组与对照组比较,差异有统计学意义(t值为5.58,P<0.01)。TLR-9蛋白,CpG-ODN组为1.35±0.18,高于Non-CpG(1.01±0.04)及对照组(0.91±0.10),差异有统计学意义(t值分别为3.21、3.67,P值均<0.05)。CpG-ODN+氯喹组为1.34±0.15,高于Non-CpG及对照组,差异有统计学意义(t值分别为3.71、4.10,P值均<0.05),而CpG-ODN组及CpG-ODN+氯喹组比较,差异无统计学意义(t值为0.10,P>0.05)。细胞上清液中TNF-α水平CpG-ODN组[(0.48±0.12)ng/ml]高于Non-CpG-ODN组[(0.29±0.23)ng/ml]、CpG-ODN+氯喹组[(0.32±0.24)ng/ml]和对照组[(0.29±0.19)ng/ml],差异有统计学意义(t值分别为2.84、2.38、3.25,P值均<0.05);IL-6,IL-12水平:CpG-ODN组分别为[(27.69±15.61)pg/ml和(48.59±25.17)pg/ml]与Non-CpG-ODN组分别为[(17.02±10.66)pg/ml和(59.58±32.89)pg/ml]、CpG-ODN+氯喹组分别为[(28.58±24.08)pg/ml和(41.30±13.17)pg/ml]和对照组分别为[(16.12±17.70)pg/ml和(61.54±39.69)pg/ml],差异无统计学意义(t值分别为1.94、0.75,P值均>0.05)。结论CpG-ODN刺激可引起鼠巨噬细胞TLR-9表达增高,Th1类细胞因子分泌增加。

含CpG基序寡核苷酸对rHBsAg免疫小鼠脾脏组织及细胞增殖的影响

目的探讨合成含CpG基序的寡核苷酸(CpGODN)与重组乙型肝炎表面抗原(rHBsAg)联合免疫对小鼠脾脏淋巴组织及细胞增殖的影响。方法经后腿胫骨前肌初次免疫BALB/c小鼠,2周后加强免疫1次;常规石蜡切片,H-E染色,观察脾脏组织学改变;3H-TdR掺入法检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应。结果抗原+CpG组脾脏可见明显的组织学改变。加CpG与不加CpG的2组比较,淋巴细胞增殖反应显著增强。结论CpGODN能够有效刺激小鼠脾脏组织T细胞区淋巴细胞增生,生发中心明显增大,而且能够显著增强淋巴细胞增殖反应。

CpG寡核苷酸增强UPEC FimH疫苗黏膜免疫的实验研究

尿路致病性大肠杆菌（uropathogenic Escherichia coli，UPEC）是引起尿路感染（UTI）的主要病原菌。FimH蛋白是UPECI型菌毛的黏附成分，介导UPEC侵入膀胱上皮细胞。本实验用FimH的真核表达质粒和蛋白免疫小鼠可产生较高浓度的IgG抗体。

CpG脱氧寡核苷酸对抗原致敏性小鼠气道反应的影响

目的 :探讨以非甲基化胞嘧啶 -鸟嘌呤 ( Cp G)脱氧寡核苷酸 ( ODN)治疗支气管哮喘的免疫抑制作用。 方法 :以卵白蛋白 ( OVA)免疫 C5 7BL / 6小鼠建立支气管哮喘模型 ,致敏阶段腹腔注射 Cp G ODN,以不含 Cp G序列的 ODN及生理盐水作对照 ,观察应用 Cp G ODN对支气管哮喘形成、气道过敏性免疫反应的影响。结果 :应用 Cp G ODN组与对照组相比 :( 1)明显抑制抗原激发后气道内嗜酸粒细胞的浸润 ( P<0 .0 1) ;( 2 )明显抑制肺内 IL-4、IL-5产生 ,增加 IL-12、IFN-γ的产生 ;( 3)明显抑制抗原诱导的气道反应性的增高 ;( 4 )明显抑制外周血总 Ig E及抗原特异性 Ig E的水平。结论 :致敏阶段应用 Cp G ODN对抗原诱导的气道过敏反应有明显的抑制作用 ,可阻断支气管哮喘的形成 ,这种抑制作用部分与 IL-12、IFN-γ的产生增加有关。

CpG寡核苷酸在免疫治疗中的作用

人工合成的含有免疫刺激活性CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN)能触发B细胞、NK细胞和T细胞以及专职抗原呈递细胞的免疫调节级联反应。对CpG ODN的反应促使机体免疫环境向Th1型细胞应答漂移以及促炎因子的释放。这成为CpG ODN在免疫治疗中作为免疫保护剂、抗变态反应以及疫苗佐剂的基础。基础研究提供了CpG ODN作用有效性的证据,正进行的临床研究将提示CpG ODN应用的安全性。本文就此相关的研究作一综述。