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水稻叶绿体基因CPN60-β多克隆抗体的制备
被引量:
1
1
作者
兰汉红
陈海煌
+1 位作者
黄伟鑫
何昕翼
《福建农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期512-517,共6页
【目的】制备针对水稻叶绿体蛋白Chaperonin-60-beta(CPN60-β)多克隆抗体,为进一步研究CPN60-β蛋白在由NSvc4蛋白所介导的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的运动和致病过程中的调控功能及作用机制提供技术支持和材料准备。【方...
【目的】制备针对水稻叶绿体蛋白Chaperonin-60-beta(CPN60-β)多克隆抗体,为进一步研究CPN60-β蛋白在由NSvc4蛋白所介导的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的运动和致病过程中的调控功能及作用机制提供技术支持和材料准备。【方法】通过RT-PCR从水稻幼嫩叶片基因组扩增CPN60-β基因的功能片段,与原核表达质粒pET-28a(+)构建重组质粒pET-CPN60-β,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞进行诱导表达;将表达纯化的CPN60-β融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得高效价高浓度的多克隆抗体。【结果】RT-PCR扩增获得的水稻叶绿体CPN60-β基因片段约为657 bp,构建的重组质粒pET-CPN60-β转化大肠杆菌BL21后在诱导剂IPTG浓度0.5 mmol·L^(−1)、摇床温度37℃、转速220 r·min^(−1)振荡培养3.5 h条件下成功表达CPN60-β融合蛋白。ELISA和SDS-PAGE检测表明,以纯化CPN60-β融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得的多克隆抗体效价为1∶1000000,抗体质量浓度约300μg·mL^(−1)。【结论】明确CPN60-β基因原核表达条件;制备获得的水稻叶绿体CPN60-β蛋白的多克隆抗体质量浓度和效价较高,可用于后续研究CPN60-β蛋白在RSV病毒运动和致病过程中发挥的功能。
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关键词
水稻
叶绿体
cpn60-β
多克隆抗体
效价
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职称材料
题名
水稻叶绿体基因CPN60-β多克隆抗体的制备
被引量:
1
1
作者
兰汉红
陈海煌
黄伟鑫
何昕翼
机构
闽南师范大学生物科学与技术学院
出处
《福建农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第5期512-517,共6页
基金
福建省自然科学基金项目(2018J01465)
国家自然科学基金项目(31601613)
福建省高等学校优秀人才培育计划项目(2017)。
文摘
【目的】制备针对水稻叶绿体蛋白Chaperonin-60-beta(CPN60-β)多克隆抗体,为进一步研究CPN60-β蛋白在由NSvc4蛋白所介导的水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)的运动和致病过程中的调控功能及作用机制提供技术支持和材料准备。【方法】通过RT-PCR从水稻幼嫩叶片基因组扩增CPN60-β基因的功能片段,与原核表达质粒pET-28a(+)构建重组质粒pET-CPN60-β,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞进行诱导表达;将表达纯化的CPN60-β融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得高效价高浓度的多克隆抗体。【结果】RT-PCR扩增获得的水稻叶绿体CPN60-β基因片段约为657 bp,构建的重组质粒pET-CPN60-β转化大肠杆菌BL21后在诱导剂IPTG浓度0.5 mmol·L^(−1)、摇床温度37℃、转速220 r·min^(−1)振荡培养3.5 h条件下成功表达CPN60-β融合蛋白。ELISA和SDS-PAGE检测表明,以纯化CPN60-β融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得的多克隆抗体效价为1∶1000000,抗体质量浓度约300μg·mL^(−1)。【结论】明确CPN60-β基因原核表达条件;制备获得的水稻叶绿体CPN60-β蛋白的多克隆抗体质量浓度和效价较高,可用于后续研究CPN60-β蛋白在RSV病毒运动和致病过程中发挥的功能。
关键词
水稻
叶绿体
cpn60-β
多克隆抗体
效价
Keywords
rice
chloroplast
cpn60-β
polyclonal antibody
titer
分类号
S511 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
水稻叶绿体基因CPN60-β多克隆抗体的制备
兰汉红
陈海煌
黄伟鑫
何昕翼
《福建农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
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职称材料
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参考文献
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