Lnc CPS1-IT1靶向调控内皮-间质转化抑制OSA所致肺动脉高压的机制

目的探讨在低氧环境下,长链非编码RNA CPS1内含子转录本1(Lnc CPS1-IT1)通过影响内皮-间质转化(EndoMT)治疗阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)所致肺动脉高压(PH)的分子调控机制。方法本研究为实验研究。以人脐静脉内皮细胞构建OSA的细胞模型,并使用该模型分别构建空白对照组,空过表达载体组(阴性对照过表达载体),长链非编码RNA CPS1内含子转录本1(Lnc CPS1-IT1)过表达组(Lnc CPS1-IT1过表达载体),空沉默载体组(阴性对照沉默载体),沉默Lnc CPS1-IT1组(沉默Lnc CPS1-IT1的短发夹RNA);使用吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)阻断细胞核因子κB(NF-κB)信号通路构建Lnc CPS1-IT1过表达+PDTC组。比较空过表达载体组与Lnc CPS1-IT1过表达组,空沉默载体组与沉默Lnc CPS1-IT1组EndoMT相关分子标志物[血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、锌指转录因子(SNAIL)]和胶原蛋白(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原)mRNA、蛋白表达,以及促炎细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-10、IL-13]的水平。通过Transwell测定法检测Lnc CPS1-IT1对于细胞迁移能力的影响。RNA免疫沉淀和荧光素酶报告基因法检测Lnc CPS1-IT1和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的结合情况。比较PDTC处理前后EndoMT相关分子标志物和胶原蛋白mRNA、蛋白表达,以及促炎细胞因子的水平。结果Lnc CPS1-IT1过表达组CD31 mRNA和蛋白表达均较空过表达载体组升高,α-SMA、SNAIL、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达均较空过表达载体组降低,差异均有统计学意义(均P<0.001)。沉默Lnc CPS1-IT1组中CD31 mRNA和蛋白表达均较空沉默载体组降低,α-SMA、SNAIL、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达均较空沉默载体组升高,差异均有统计学意义(均P<0.001)。Lnc CPS1-IT1过表达组TNF-α、IL-10、IL-13的水平均较空白过表达载体组降低,沉默Lnc CPS1-IT1组TNF-α、IL-10、IL-13的水平均较空白沉默载体组升高,差异均有统计学意义(均P<0.001)。与空白对照组(49.33±2.52)相比,Lnc CPS1-IT1过表达组细胞迁移数量减少(30.00±2.65),而沉默Lnc CPS1-IT1组细胞迁移数量增多(82.00±4.00),差异均有统计学意义(均P<0.001)。RNA免疫沉淀结果显示,Lnc CPS1-IT1与HIF-1α的结合较免疫球蛋白G增加,差异有统计学意义[(4.22±0.03)比(0.99±0.02),t=163.50,P<0.001]。荧光素酶报告基因法检测结果显示,Lnc CPS1-IT1与HIF-1α结合后的荧光强度下降[(120.33±2.83)比(24.33±2.12)],差异有统计学意义(t=43.42,P<0.001)。Lnc CPS1-IT1过表达+PDTC组CD31 mRNA和蛋白质较Lnc CPS1-IT1过表达组升高,α-SMA、SNAIL、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白质均较Lnc CPS1-IT1过表达组降低,差异均有统计学意义(均P<0.001)。Lnc CPS1-IT1过表达+PDTC组TNF-α、IL-10、IL-13水平均较Lnc CPS1-IT1过表达组下降(均P<0.05)。结论Lnc CPS1-IT1可以通过抑制HIF-1α的转录活性影响NF-κB通路,降低炎症因子的释放,靶向调控EndoMT,从而抑制OSA所致PH。