粗叶悬钩子总生物碱对非酒精性脂肪肝大鼠脂代谢及CPTⅠ的影响

目的:探讨粗叶悬钩子总生物碱(TARAP)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂代谢及肝脏形态学的影响,研究其作用机制。方法:购入的SD大鼠适应性喂养7d,然后按照体重分层随机分为正常组、模型组、东宝肝泰组、TARAP低剂量组和高剂量组,正常组饲以基础饲料,饮用自来水,其余各组饲以高脂饲料,持续喂养12周。造模成功后各组予以相应药物灌胃4周后取材,HE染色,观察肝组织病理形态学变化。RT-PCR和免疫组化法检测肉碱脂酰转移酶Ⅰ(carnitine palmityl transferaseⅠ,CPTⅠ)的基因和蛋白表达。结果:TARAP低剂量组、高剂量组脂肪变细胞较模型组明显减少;RT-PCR和免疫组化结果显示,TARAP能显著提高CPTⅠ的表达。结论:TARAP能提高CPTⅠ的表达,减轻肝细胞脂肪变性,提示TARAP通过调节CPTⅠ的表达是其治疗NAFLD作用机制之一。

酒精性肝硬化患者CPTⅠα表达水平及其临床意义

目的观察酒精性肝硬化患者的肉碱转移酶Ⅰα(CPTⅠα)表达水平,并分析其临床意义。方法选取2017年3月-2018年3月在我院接受治疗的酒精性肝硬化患者为研究对象,同时选取同期在我院接受体检的健康成年人作为对照,观察两组研究对象CPTⅠα表达水平、肝功能指标和细胞因子水平的差异,分析酒精性肝硬化患者的CPTⅠα表达水平与肝功能指标和细胞因子水平的相关性。结果酒精性肝硬化患者的CPTⅠα表达水平和胃泌素-17(G-17)水平高于对照组(t=-33.031、-18.786,P<0.001);酒精性肝硬化患者的谷丙转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、直接胆红素(DBil)、总胆红素(TBil)和白蛋白(Alb)水平高于对照组(t=-31.460、-15.451、-21.106、-12.646、15.799,P<0.001);酒精性肝硬化患者的IL-10、IL-6、IL-12水平均高于对照组(t=-28.845、-49.270、-29.824,P<0.001);酒精性肝硬化患者的CPTⅠα表达水平与ALT、AST、DBil、TBil、Alb、IL-10、IL-6、IL-12水平正相关。结论酒精性肝硬化患者的CPTⅠα表达水平较高,且与肝功能和炎性因子水平密切相关,可作为临床监测酒精性肝硬化的重要指标。

罗格列酮上调高脂饮食老年大鼠骨骼肌CPTⅠ和PPARγ的表达

目的观察高脂饮食对老年大鼠骨骼肌肉碱棕榈酰基转移酶Ⅰ(CPTⅠ)和过氧化体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响及罗格列酮的干预效果。方法大鼠随机分为对照组、高脂组(HF)、罗格列酮干预组(RSG),每组20只。应用清醒状态下正常葡萄糖高胰岛素钳夹技术的葡萄糖输注率评价胰岛素抵抗,用RT-PCR法和Western blot印迹技术检测骨骼肌CPTⅠ和PPARγ的表达。结果高脂组骨骼肌三酰甘油(TG)升高而葡萄糖输注率明显下降(P<0.01),骨骼肌CPTⅠ和PPARγ表达明显降低(CPTⅠbmRNA 3.16±0.59vs1.30±0.18,P<0.05;PPARγmRNA1.48±0.25vs1.04±0.33,P<0.01),罗格列酮干预组显著缓解高脂组上述变化(CPTⅠbmRNA1.30±0.18vs2.84±0.72;PPARγmRNA1.04±0.33vs2.13±0.42)(P<0.01)。结论罗格列酮上调高脂饮食老年大鼠骨骼肌CPTⅠ和PPARγ的表达,可能是减少骨骼肌内脂质堆积、改善胰岛素抵抗的机制之一。

小檗碱的调脂作用与CPTⅠA基因表达的关系研究

目的:研究小檗碱对高脂血症大鼠的调脂作用及对肝脏细胞CPTⅠA基因表达的影响。方法:按血脂高低将大鼠随机分为正常组,高脂模型组,小檗碱3006,0 mg.kg-1.d-1组和洛伐他汀7.2 mg.kg-1.d-1组。正常组用基础饲料喂养,其余各组喂以高脂、高胆固醇饲料,制备实验性高脂血症模型。于给药12周,分别取血样,采用全自动生化分析仪测定血脂变化;以RT-PCR和Western blot法评价大鼠肝脏细胞CPTⅠA mRNA和蛋白表达以及PPARαmRNA表达。结果:与高脂模型组相比,小檗碱呈剂量依赖性明显阻遏总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平的增加和提升高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;明显促进CPTⅠA mRNA和蛋白表达,但对PPARαmRNA表达无明显影响;洛伐他汀也显著阻遏TC,TG,LDL-C水平增加和提升HDL-C水平,但对CPTⅠA和PPARα基因表达均无明显影响。结论:小檗碱具有良性调血脂作用,其作用机制可能涉及与促进脂质代谢相关的CPTⅠA基因表达有关。

小檗碱对脂质代谢相关基因PPARα和CPTIA表达的影响

目的研究小檗碱(Berberine,Ber)对HepG2细胞的PPARα基因及其调控基因CPTⅠA表达的影响。方法以PPARα激动剂非诺贝特作阳性对照药,采用RT-PCR法研究Ber对HepG2细胞PPARα基因及其调节基因CPTⅠAmR-NA表达影响的时—效和量—效关系。结果非诺贝特明显促进CPTⅠAmRNA表达;Ber也呈浓度和时间依赖性促进CPTⅠAmRNA的表达,而对PPARαmRNA表达无影响;PPARα特异拮抗剂MK-886能阻断非诺贝特和Ber上述作用。结论Ber可能通过激动PPARα促进与脂质代谢相关的靶基因CPTⅠAmRNA的表达。

早期饲料构成对大鼠甲状腺素及肉碱棕榈酰转移酶-ⅠmRNA表达的影响

目的:研究早期饲料构成对高脂膳食大鼠体重、体脂含量、血糖、甲状腺素FT4及肝脏肉碱棕榈酰转移酶-Ⅰ(CPT-Ⅰ)mRNA水平的影响。方法:新生Wistar雄性大鼠24d断乳,按体重随机分为A、B、C、D四组,分别给予高碳水化合物构成的基础饲料、高蛋白质、高不饱和脂肪酸、与高饱和脂肪酸构成的饲料喂养3w后,基础饲料喂养2w。按体重将A组随机分为A1、A2两组。A1组喂饲基础饲料作为对照组,A2与B、C、D组给予高脂饲料喂养6w,结束实验;A2组为高碳水化合物对照组。每组32头大鼠,动态观察体重、体脂含量、血糖、甲状腺素(FT4)及肝脏CPT-ⅠmRNA水平。结果:实验末期,C组大鼠体重、体脂含量和血糖显著低于A2组(P<0.05)、甲状腺素FT4水平明显高于A2组(P<0.05);B组体重、体脂含量明显低于A2组(P<0.05),甲状腺素FT4水平明显高于A2组(P<0.05),但血糖水平高于A2组(P>0.05);D组大鼠体重明显低于A2组(P<0.05),血糖、体脂含量和甲状腺素FT4水平与A2无差异(P>0.05)。动态观察表明,实验中C组大鼠肝脏CPT-ⅠmRNA水平持续升高。结论:早期饲料构成可能通过影响甲状腺素水平、持续改变CPT-Ⅰ基因表达,影响高脂膳食大鼠的体重和体脂含量。

卵形鲳鲹肉碱棕榈酰基转移酶Ⅰ全长cDNA序列的克隆及生物信息学分析

采用RACE-PCR克隆卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)肉碱棕榈酰基转移酶Ⅰ(carnitine palmitoyltransferaseⅠ,CPTⅠ)c DNA序列全长,并对其编码氨基酸进行生物信息学分析。结果表明,卵形鲳鲹CPTⅠ基因(Gen Bank登录号KP987456)c DNA序列全长2 841 bp,其开放阅读框(ORF)为2 363 bp,编码787个氨基酸,3'非编码区(URT)335 bp,5'非编码区142 bp;生物信息预测显示CPTⅠ基因编码的蛋白无信号肽序列,脂溶指数高达85.63,亲水性平均值(GRAVY)为-0.213,具有2个跨膜区螺旋,在第312和367氨基酸残基处存在N-糖基化位点,在19个丝氨酸(Ser)、9个苏氨酸(Thr)和14个酪氨酸(Tyr)残基上可能发生磷酸化;二级结构中α螺旋(Alpha helix)占比例最大,为40.66%;该蛋白亚细胞定位预测其主要分布于细胞质和线粒体中;分子系统进化分析显示,卵形鲳鲹CPTⅠ蛋白与花鲈(Lateolabrax japonicas)的同源性最高,达94%,与大黄鱼(Larimichthys crocea)、金鲷(Sparus aurata)的次之,均为93%,与人(Homo sapiens)、鼠(Mus musculus)等的同源性较低(65%)。

脂肪酸代谢酶在坏死型高脂血症性急性胰腺炎大鼠肝脏组织中的表达及意义

目的:动态观察脂肪酸代谢及转移酶(SCD-1、CPT-Ⅰ和CD36)在坏死型高脂血症性急性胰腺炎(HLP)大鼠肝脏组织中的表达并探讨其意义。方法:采用胰管内注射5%牛磺胆酸钠诱导高脂血症大鼠产生坏死型HLP大鼠模型。制模后第6、12、24h分别处死大鼠,每组6只大鼠。对照组仅建立坏死型急性胰腺炎大鼠模型。测定血清淀粉酶和胰腺组织病理学评分观察大鼠胰腺组织炎症程度。RT-PCR检测肝脏组织SCD-1、CPT-Ⅰ和CD36mRNA表达;免疫组化检测肝脏组织SCD-1蛋白表达。结果:HLP组大鼠血清淀粉酶水平低于对照组;病理学评分示HLP组大鼠急性胰腺炎程度加重。RT-PCR和免疫组化分析示HLP组大鼠肝脏组织中SCD-1mRNA和蛋白表达显著低于对照组;RT-PCR检测示HLP组大鼠肝脏组织中CPT-Ⅰ和CD36mRNA表达略高于对照组。结论:HLP大鼠肝脏脂肪酸代谢及转移酶异常表达,加重了肝脏组织细胞内外的脂质代谢紊乱,是加重坏死型急性胰腺炎胰腺组织损伤的重要机制之一。

孕期补充二十二碳六烯酸对母鼠脂肪代谢及CPT-Ⅰ mRNA表达的影响

目的探讨孕期补充二十二碳六烯酸(DHA)对母鼠脂肪代谢和肉碱棕榈酰转移酶-Ⅰ(CPT-Ⅰ)mRNA表达的影响。方法将SD雌鼠按体重随机分成A、B、C3组,孕期分别食用补充高剂量DHA膳食(A)、补充低剂量DHA膳食(B)、普通膳食(C),待母鼠分娩,实验结束。观察母鼠妊娠期间体重变化及各组子鼠出生数量、出生体重情况,检测母鼠产后肾周脂肪含量、血清甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(TC)、血清高密度脂蛋白(HDL-C)水平、瘦素(Leptin)及肝脏组织中CPT-ⅠmRNA的表达丰度。结果各组孕鼠妊娠时间、产子数量、子鼠出生体重均无明显差异,但A、B组的母鼠产后血清甘油三酯水平低于C组;A组母鼠孕期增重量、肾周脂肪含量、总胆固醇、瘦素水平均明显低于C组;A、B组母鼠产后肝脏组织的CPT-ⅠmRNA水平高于C组。结论孕期补充DHA有调节母体血脂、减少体内脂肪含量的作用,而CPT-Ⅰ基因表达的上调可能是其一潜在机制。

藏猪和杜洛克猪SCD、CPT1B基因表达差异及其与IMF含量相关性分析

为了揭示脂肪型的藏猪和瘦肉型的杜洛克猪肌内脂肪(IMF)沉积相关基因的表达差异,试验采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测了两猪种背最长肌中硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)基因、肉碱脂酰转移酶Ⅰ(CPT1B)基因在180日龄的表达差异,分析其表达与IMF含量的相关性。结果表明:180日龄藏猪SCD mRNA表达量极显著高于杜洛克猪(P<0.01),而藏猪CPT1B mRNA表达量显著高于杜洛克猪(P<0.05)。相关性分析结果显示,SCD、CPT1B mRNA表达量均与IMF含量呈正相关。