CPU-HAP-140对小鼠急性肝损伤的保护作用

从海洋生物纯化获得的一种活性多肽CPU HAP 140 ,用四氯化碳和半乳糖胺分别损伤小鼠肝来研究CPU HAP 140的保肝作用。结果发现 :(1)CPU HAP 140能显著降低四氯化碳和半乳糖胺所致的小鼠血清ALT和AST的异常升高 ,并呈现良好的剂量相关性。 (2 )CPU HAP 140能显著降低半乳糖胺中毒小鼠的死亡率。 (3)肝组织切片 :CPU HAP 140可使四氯化碳和半乳糖胺损伤肝组织的程度减轻。 (4)急性毒性试验表明 ,CPU HAP 140属低毒活性多肽。以上结果提示 ,CPU HAP 140可能是一种有希望用于临床治疗肝病的生物制剂。

miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达在急性脑梗死患者诊疗中的价值研究

目的 探讨miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达在急性脑梗死(ACI)患者诊疗中的应用价值。方法 选取2020年1月至2022年12月南通市第三人民医院全科医学科收治的ACI患者100例作为研究对象,定义为ACI组,根据ACI患者3个月改良Rankin评分量表(mRS评分)将其分为预后良好组(mRS评分≤2分)68例与预后不良组(mRS>2分)32例,另选同期于南通市第三人民医院全科医学科体检的健康者100例作为对照组。记录各组miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达水平并进行比较,采用Pearson相关分析探讨两变量的相关性,通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p联合检测在ACI诊断中的效能,采用多因素Logistic回归分析探讨ACI预后的危险因素。结果 ACI组平均年龄、吸烟史比例、合并高血压比例、miR-140-3p与miR-128-3p及miR-27-3p表达水平均明显高于对照组(均P<0.05)。miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p联合检测用于诊断ACI的曲线下面积(AUC值)为0.965,敏感度为99.00%,特异度为98.00%,表明miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p联合检测用于诊断ACI的效能更高。预后不良组平均年龄、入院时NIHSS评分、梗死体积、吸烟史比例、合并高血压比例、miR-27-3p、miR-128-3p、miR-140-3p表达水平及3个月mRS评分均明显高于预后良好组(均P<0.05)。经Pearson相关分析表明ACI患者miR-27-3p、miR-128-3p、miR-140-3p表达水平均分别与入院时NIHSS评分、梗死体积、3个月mRS评分呈正相关(均P<0.05)。经多因素Logistic回归分析表明年龄(OR:1.546;95%CI:1.124~1.969)、入院时NIHSS评分(OR:1.721;95%CI:1.229~2.308)、梗死体积(OR:1.853;95%CI:1.436~2.786)、吸烟史(OR:1.517;95%CI:1.168~1.825)、miR-27-3p (OR:2.481;95%CI:1.452~3.201)、miR-128-3p (OR:1.692;95%CI:1.288-2.431)及miR-140-3p (OR:2.032;95%CI:1.141~1.976)均为ACI患者预后的独立危险因素(均P<0.05)。结论 ACI患者miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达水平均明显升高,通过三指标联合检测可提高对ACI的诊断效能,而预后不良ACI患者miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p表达水平则升高更为明显,并分别与入院时NIHSS评分、梗死体积、3个月mRS评分呈正相关,且miR-27-3p、miR-128-3p及miR-140-3p均为ACI患者预后的独立危险因素,应予以重点关注。

急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-140-3p、Krüpple样因子5表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性

目的探索急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-140-3p(miR-140-3p)、Krüpple样因子5(KLF5)表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性。方法选择2022年10月—2024年1月本院收治的285例AIS患者作为研究对象,依据超声结果将患者分为斑块易损组(196例)、斑块稳定组(53例)以及无斑块组(36例);将患者依据斑块狭窄程度分为狭窄重度组(42例)、狭窄中度组(57例)、狭窄轻度组(150例)以及无狭窄组(36例)。收集患者的一般资料,采用实时荧光定量PCR对血清miR-140-3p、KLF5表达水平进行检测;多因素Logistic回归分析AIS患者颈动脉斑块不稳定性的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-140-3p、KLF5水平检测对AIS患者颈动脉斑块不稳定的诊断价值;分析不同狭窄程度血清miR-140-3p、KLF5水平;Pearson法和Spearman法相关性分析血清miR-140-3p、KLF5水平的相关性及二者与AIS患者颈动脉斑块稳定及狭窄程度的相关性。结果斑块易损组患者高血压人数、糖尿病人数、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、膀抑素C(Cys-C)及KLF5水平高于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),血小板(PLT)及miR-140-3p水平低于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),斑块稳定组LDL-C、FIB、D-D、Cys-C及KLF5水平高于无斑块组(P<0.05),PLT及miR-140-3p水平低于无斑块组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示PLT、D-D、FIB、Cys-C、miR-140-3p、KLF5是AIS患者斑块不稳定性的影响因素(P<0.05);ROC分析显示,miR-140-3p、KLF5联合诊断AIS患者颈动脉斑块不稳定的ROC曲线下面积(AUC)显著大于miR-140-3p单独诊断的AUC(Z=4.617,P<0.001),KLF5单独诊断的AUC(Z=3.473,P=0.001);随着患者狭窄程度的增加,患者血清miR-140-3p水平降低(F=341.819,P<0.001),血清KLF5水平升高(F=152.186,P<0.001);Pearson法相关性分析显示,血清miR-140-3p水平与血清KLF5水平及斑块稳定性、狭窄程度呈负相关(r=-0.536,-0.529,-0.601,P<0.001),血清KLF5水平与斑块稳定性及狭窄程度呈正相关(r=0.511,0.634,P<0.001)。结论AIS患者血清miR-140-3p水平降低,血清KLF5水平升高,其水平变化与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度密切相关。

LncRNA HCG18通过靶向miR-140-3p/PD-L1通路对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长非编码(lncRNA)HCG18通过微小RNA-140-3p(miR-140-3p)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法 选择人鼻咽癌CNE2细胞、人正常鼻黏膜上皮细胞HNEpC细胞,将CNE2细胞分为HCG18组、pcDNA3.1组、sh-HCG18组、sh-NC组、miR-140-3p组、miR-NC组、miR-140-3p inhibitor组、Scramble组、HCG18+miR-NC组、HCG18+miR-140-3p组、miR-140-3p inhibitor+sh-NC组及miR-140-3p inhibitor+sh-PD-L1组。用CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测PD-L1蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1 mRNA水平,生物信息学、双荧光素酶报告实验分析lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1的靶向关系。结果 CNE2细胞lncRNA HCG18、PD-L1蛋白及其mRNA表达水平高于HNEpC细胞,miR-140-3p表达水平低于HNEpC细胞(P <0.05)。上调lncRNA HCG18或下调miR-140-3p后CNE2细胞增殖、细胞迁移与侵袭能力增强,PD-L1蛋白、PD-L1 mRNA水平升高(P <0.05);下调lncRNA HCG18或上调miR-140-3p后CNE2细胞增殖、细胞迁移与侵袭能力降低,PD-L1蛋白、PD-L1 mRNA水平降低(P <0.05)。miR-140-3p与lncRNA HCG18、PD-L1均有靶向关系。上调miR-140-3p表达可逆转上调lncRNA HCG18对CNE2细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用;沉默PD-L1可逆转下调miR-140-3p对CNE2细胞增殖、迁移与侵袭的促进作用。结论 过表达lncRNA HCG18可通过海绵化miR-140-3p,上调PD-L1表达,促进CNE2细胞增殖、迁移与侵袭。

携载microRNA-140外泌体/海藻酸钠/胶原水凝胶修复关节软骨损伤

背景:研究已证实,上调microRNA-140表达可部分抑制膝关节软骨组织与细胞的骨关节炎样改变,延缓骨关节炎进程,提示microRNA-140参与了骨关节炎的发病机制。目的:采用海藻酸钠/胶原水凝胶负载过表达microRNA-140的外泌体,进一步分析microRNA-140参与骨关节炎的相关机制。方法:利用慢病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞使其过表达microRNA-140,随后分离提取外泌体,得到过表达microRNA-140的外泌体。制备负载外泌体的海藻酸钠/胶原水凝胶。采用随机数字表法将32只SD大鼠随机分为4组,每组8只:正常对照组不进行任何处理,骨关节炎组、未转染外泌体组、转染外泌体组均通过膝关节腔内注射碘乙酸钠的方式建立骨关节炎模型,造模2周后,骨关节炎组膝关节腔内注射PBS,未转染外泌体组、转染外泌体组膝关节腔内分别注射负载未过表达microRNA-140与过表达microRNA-140外泌体的海藻酸钠/胶原水凝胶。造模后第6周,检测大鼠机械刺激缩足反应阈值、滑膜液炎症因子浓度、软骨相关基因表达、膝关节软骨组织的组织学变化与焦亡相关蛋白表达。结果与结论:①与正常对照组比较,骨关节炎组机械刺激缩足反应阈值、Ⅱ型胶原及SOX9 mRNA表达、Ⅱ型胶原免疫荧光强度均减少(P<0.05),滑膜液中促炎症因子水平增加(P<0.05),基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)mRNA表达增加(P<0.05),NLRP3、ASC、GSDMD p30、caspase-1 p20、白细胞介素1β、白细胞介素18蛋白表达均增加(P<0.05),GSDMD、cleaved caspase-1免疫荧光强度增强(P<0.05),软骨组织损伤严重。②与骨关节炎组比较,两外泌体组机械刺激缩足反应阈值、Ⅱ型胶原及SOX9 mRNA表达、Ⅱ型胶原免疫荧光强度均增加(P<0.05),滑膜液中促炎症因子水平减少(P<0.05),基质金属蛋白酶13 mRNA表达减少(P<0.05),NLRP3、ASC、GSDMD p30、caspase-1 p20、白细胞介素1β、白细胞介素18的蛋白表达均减少(P<0.05),GSDMD、cleaved caspase-1的免疫荧光强度减弱(P<0.05),软骨组织损伤减轻(P<0.05),并且转染外泌体组的作用更强。③结果表明,microRNA-140可通过抑制炎症、维持软骨稳态、抑制软骨焦亡来减轻骨关节炎大鼠的疼痛反应,降低软骨损伤,发挥骨关节炎治疗作用。

miR-140-3p在大鳞副泥鳅雌雄性腺中的差异表达和调控功能的研究

miR-140-3p是在不同物种性腺组织中广泛表达的一种miRNA。本研究利用qRT-PCR方法检测miR-140-3p在大鳞副泥鳅性腺中的雌雄表达差异并预测其生物学功能。结果显示:miR-140-3p在大鳞副泥鳅雌雄鱼的性腺组织中均有表达,且精巢中的表达量显著高于卵巢(P<0.01);KEGG pathway分析表明,靶基因CPEB4和GDF9参与卵母细胞成熟分化过程,富集在与性腺发育、繁殖功能相关的孕激素介导卵母细胞成熟通路、卵母细胞减数分裂通路、卵巢类固醇生成通路。荧光定量结果显示CPEB4和GDF9在卵巢中表达量显著高于精巢(P<0.01),且表达量与miR-140-3p的表达呈显著负相关,说明miR-140-3p和CPEB4、GDF9具有潜在的靶标关系。这为进一步探索miR-140-3p在鱼类性腺发育和繁殖过程中的作用奠定了基础。

鳖甲煎丸含药血清通过miR-140调控肝癌干细胞增殖能力及干性的机制研究

目的 研究miR-140在肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)中的生物学功能,以及鳖甲煎丸含药血清抑制肝癌干细胞特性的干预效应。方法 以人肝癌细胞株(Huh7)为研究对象,无血清培养基分选法分选LCSCs,用流式细胞仪鉴定富集的LCSCs,并转染miR-140慢病毒。分为Cin组、Control组、BJJP组、miR-140 mimics NC组、miR-140 mimics组、BJJP+miR-140 inhibitor组。用CCK-8法测定细胞增殖能力,RTPCR检测miR-140、CD133、CD24、EpCAM、AFP表达,Western blot法检测CD133、CD144、EpCAM、AFP蛋白表达。结果 检测显示Con组与Control组细胞增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的蛋白及RNA表达无统计学意义(P>0.05);与miR-140 mimics NC组相比,miR-140 mimics组的肝癌干细胞的增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的RNA及蛋白表达水平均明显减少(P<0.01),但miR-140表达明显增强(P<0.05);与Control组相比,BJJP组和BJJP+miR-140 inhibitor组的细胞增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的RNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),且BJJP组的细胞增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的RNA及蛋白表达水平低于BJJP+miR-140inhibitor组(均P<0.05)。结论 鳖甲煎丸能抑制LCSCs的增殖能力及干性,其机制可能通过上调miR-140的表达发挥作用。

MiR-140-3p调节PI3K/Akt通路减轻缺氧复氧心肌细胞损伤的实验研究

目的:探讨miR-140-3p靶向调节PI3K/Akt通路对缺氧复氧心肌细胞再灌注损伤的影响。方法:对大鼠来源的H9C2心肌细胞进行缺氧/复氧以诱导细胞损伤,使用miR-140-3p mimics及其对照(NC)转染H9C2心肌细胞,再使用10μmol/L LY294002处理过表达miR-140-3p的H9C2细胞。将心肌细胞分为6组,分别为对照组(CON组)、H/R组(Model组)、Model+NC组、Model+miR-140-3p mimics组、Model+miR-140-3p mimics+LY294002组、Model+LY294002组。采用荧光定量PCR(RT-PCR)法检测各组miR-140-3p相对表达量,CCK-8法检测各组心肌细胞活力,流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡率,Western blot检测各组磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Bax、Bcl-2、Cleaved-caspases-3表达量。结果:与CON组比较,Model组miR-140-3p表达量、细胞活力以及Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05),Bax、Cleaved-caspases-3蛋白表达和凋亡率明显提高(P<0.05),与Model组比较,miR-140-3p过表达可上调miR-140-3p表达量、细胞活力以及Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白,下调Bax、Cleaved-caspases-3蛋白表达和凋亡率,LY294002可抑制miR-140-3p表达,下调细胞活力以及Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白,上调Bax、Cleaved-caspases-3蛋白表达和凋亡率。结论:MiR-140-3p可通过调节PI3K/Akt通路减轻缺氧复氧心肌细胞自噬和凋亡,进而减轻心肌损伤。

鳖甲煎丸调控miR-140对肝癌干细胞致瘤性及干性的影响

目的 探讨鳖甲煎丸对裸鼠皮下成瘤、肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)干性的抑制作用及其相关机制。方法 选取12只BALB/c裸鼠,随机分为4组,即肝癌干细胞皮下成瘤+生理盐水灌胃组(A组)、肝癌干细胞皮下成瘤+鳖甲煎丸灌胃组(B组)、miR-140过表达慢病毒肝癌干细胞皮下成瘤+生理盐水灌胃(C组)、miR-140干扰慢病毒肝癌干细胞皮下成瘤+鳖甲煎丸灌胃(D组),将分选出肝癌干细胞种植于裸鼠皮下形成瘤体,记录瘤体体积大小,并进行多组间对比。苏木精-伊红(HE)染色观察瘤体组织的病理学变化。PCR和Western Bolt分别检测肝癌组织中CD133、CD24、EpCAM、AFP的mRNA表达、蛋白表达以及miR-140的基因表达。结果B组、C组瘤体体积均小于A组,D组瘤体体积大于B组;HE染色结果提示瘤体组织呈恶性后进行PCR与Western Bolt检测,结果提示B组、C组的CD133、CD24、EpCAM、AFP的mRNA以及蛋白表达相对含量均小于A组,D组以上检测指标小于B组;予鳖甲煎丸灌胃后,瘤体中miR-140的表达升高。结论 鳖甲煎丸能抑制肝癌干细胞的致瘤能力以及降低肝癌组织中CD133、CD24、EpCAM、AFP,其作用机制可能与促进LCSCs中miR-140的表达有关。

鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2和miR-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系研究

目的探讨鼻咽癌癌组织中长链非编码RNA羧基末端结合蛋白1反义RNA2(long non-coding RNA C-terminal binding protein 1 antisense RNA2,LncRNA CTBP1-AS2)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系。方法选取2018年3月~2020年3月于南通市肿瘤医院确诊的222例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,记录患者临床资料,评估放疗疗效及预后,并分为生存组(n=194)和死亡组(n=28);另选取同期219例鼻咽炎患者为对照组。采用Pearson相关分析检验鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2,miR-140-5p表达水平与患者预后的关系;采用COX比例风险回归模型对鼻咽癌患者预后进行多因素分析。结果鼻咽癌组患者组织中LncRNA CTBP1-AS2表达水平(2.25±0.46)高于对照组(1.02±0.22),miR-140-5p表达水平(0.67±0.19)低于对照组(1.01±0.23),差异具有统计学意义(t=35.742,16.934,均P<0.001)。鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平呈负相关(r=-0.624,P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2高表达的鼻咽癌患者放疗后总有效率(74.11%)和三年生存率(77.68%)低于低表达患者(93.64%,97.27%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.578,19.331,均P<0.001);miR-140-5p高表达患者放疗后总有效率(93.58%)和三年生存率(96.33%)显著高于低表达患者(74.34%,78.76%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.119,15.538,均P<0.001)。死亡组磁共振酰胺质子转移(amide proton transfer,APT)值(2.10±0.26)、放疗无效(85.71%)、LncRNA CTBP1-AS2高表达(89.29%)及miR-140-5p低表达(85.71%)患者比例高于生存组(1.82±0.31,6.19%,44.85%,45.88%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=4.551,108.127,19.331,15.538,均P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的危险因素(HR=2.762,95%CI:1.510~5.051,P=0.001),miR-140-5p表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的保护因素(HR=0.817,95%CI:0.718~0.930,P=0.002)。结论鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2高表达,miR-140-5p低表达,二者与放疗疗效及预后关系密切。

老年冠心病病人血清MCP-1、GDF-15、GMP-140与冠状动脉狭窄程度的相关性

目的:分析老年冠心病病人血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、生长分化因子-15(GDF-15)和血小板颗粒膜蛋白-140(GMP-140)与冠状动脉狭窄程度的相关性。方法:选取中国人民解放军西部战区总医院2022年3月—2023年3月收治的97例老年冠心病病人为冠心病组,并选取同期60名健康体检者为对照组,检测血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平。按照冠心病病人冠状动脉狭窄程度分为轻度狭窄组、严重狭窄组,比较轻度狭窄组、严重狭窄组血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平,采用Spearman相关性分析法分析血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平与冠状动脉狭窄程度的相关性,并使用受试者工作特征曲线(ROC)分析MCP-1、GDF-15、GMP-140评估冠状动脉狭窄程度的效能。结果:冠心病组血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。严重狭窄组血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平高于轻度狭窄组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,冠心病病人血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平与冠状动脉狭窄程度呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,MCP-1、GDF-15、GMP-140联合评估冠状动脉狭窄程度的曲线下面积为0.887,敏感度、特异度分别为88.89%、88.46%。结论:冠心病病人血清MCP-1、GDF-15、GMP-140水平显著升高,且与冠状动脉狭窄程度进展密切相关,联合检测血清MCP-1、GDF-15、GMP-140可有效评估冠状动脉狭窄程度。

LncRNA PSMA3-AS1调节miR-140-3p/DDX5轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(PSMA3-AS1)调节miR-140-3p/DEAD box p68 RNA解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测40例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5表达。将A549细胞分为:control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1和DDX5的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC、si-PSMA3-AS1组,测量肿瘤质量与体积,qRT-PCR检测移植瘤组织中miR-140-3p表达,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、DDX5蛋白表达。结果在肺癌组织/细胞系中,PSMA3-AS1 mRNA、DDX5蛋白表达升高,miR-140-3p mRNA表达水平降低(P<0.05);敲低PSMA3-AS1表达可显著抑制A549细胞增殖、迁移与侵袭,降低PCNA、MMP-2、vimentin、DDX蛋白表达,促进miR-140-3p、Bax、E-cadherin表达及细胞凋亡(P<0.05);下调miR-140-3p,可减弱敲低PSMA3-AS1对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-140-3p与PSMA3-AS1、miR-140-3p与DDX5存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制PSMA3-AS1表达可显著降低移植瘤质量和体积,降低Ki-67、DDX5表达水平,升高miR-140-3p表达(P<0.05)。结论敲低PSMA3-AS可能通过调节miR-140-3p/DDX5轴,抑制肺癌细胞的增殖和EMT,促进细胞凋亡。

外周血sCD14、miR-140-3p及TBIL对冠心病患者冠脉斑块稳定性的评估价值

目的探究外周血可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)、微小RNA-140-3p(miR-140-3p)及总胆红素(TBIL)对冠心病患者冠脉斑块稳定性的评估价值。方法选取郸城县人民医院2021年8月至2023年8月收治的80例冠心病患者为研究对象,行血管内超声检查,对患者的斑块性质进行分类,并根据检查结果对患者进行分组:稳定组55例与不稳定组25例。收集并对比两组患者一般资料信息及血清指标水平,将有统计学意义的变量进行分析,探究影响冠心病患者冠脉斑块稳定性的因素。结果稳定组和不稳定组患者的年龄、性别、体质量指数(BMI)、糖尿病、高血压、尿素氮、尿肌酐以及血中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平比较差异无统计学意义(P>0.05);稳定组sCD14水平显著低于不稳定组,差异具有统计学意义(P<0.05),miR-140-3p、TBIL水平显著高于不稳定组,差异均有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示,高水平sCD14、低水平miR-140-3p及低水平TBIL均为冠心病患者冠脉斑块不稳定性斑块形成的危险因素,差异均有统计学意义(P<0.05);受试者工作特征(ROC)曲线分析表明,高水平sCD14、低水平miR-140-3p及低水平TBIL均对不稳定型斑块均具有一定诊断价值,其曲线下面积(AUC)分别为0.706、0.939、0.807,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论冠心病患者外周血sCD14、miR-140-3p及TBIL表达水平与冠脉不稳定型斑块的形成具有密切关系,对于斑块稳定性具有一定的评估价值。

重型颅脑损伤患者血清miR-129-5p、miR-140-5p水平及其与TLR4/NF-κB信号通路和预后的关系

目的观察重型颅脑损伤(TBI)患者血清微小核糖核酸-129-5p(miR-129-5p)、miR-140-5p水平变化,探讨两者与Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路及预后的关系。方法选取重型TBI患者118例作为sTBI组、轻中型TBI患者100例作为轻中型TBI组、健康体检者100例作为对照组,RT-qPCR法检测血清miR-129-5p、miR-140-5p及外周血单个核细胞TLR4、NF-κB。采用Pearson相关性分析重型TBI患者血清miR-129-5p、miR-140-5p与外周血单个核细胞TLR4、NF-κB的相关性;统计重型TBI患者术后28 d内的全因死亡例数,根据重型TBI患者术后28 d内生存情况将患者分为生存者及死亡者,比较不同预后结局重型TBI患者的临床资料;采用多因素Logistic回归分析重型TBI患者预后影响因素。结果血清miR-129-5p、miR-140-5p水平对照组>轻中型TBI组>重型TBI组(P均<0.05);Pearson相关性分析显示,重型TBI患者血清miR-129-5p与外周血单个核细胞TLR4、NF-κB呈负相关(r分别为-0.320、-0.312,P均<0.01),miR-140-5p与外周血单个核细胞TLR4、NF-κB呈负相关(r分别为-0.358、-0.361,P均<0.01)。118例重型TBI患者28 d内死亡42例、生存76例,28 d生存率为64.40%。死亡重型TBI患者入院时外科损伤严重度(ISS)评分、术中失血量、受伤后至手术时间、外周血单个核细胞TLR4、外周血单个核细胞NF-κB高于生存重型TBI患者,入院时格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分、血清miR-129-5p、血清miR-140-5p低于生存重型TBI患者(P均<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,入院时ISS评分高、受伤后至手术时间长、外周血单个核细胞TLR4表达高、外周血单个核细胞NF-κB表达高为重型TBI患者死亡的独立危险因素(P均<0.05),入院时GCS评分高、血清miR-129-5p水平高、血清miR-140-5p水平高为重型TBI患者死亡的独立保护因素(P均<0.05)。结论重型TBI患者血清miR-129-5p、miR-140-5p水平降低,血清miR-129-5p、miR-140-5p水平与TLR4/NF-κB信号通路相关分子存在相关性,且为重型TBI患者死亡的独立影响因素。

miR-140-5p靶向HDAC7抑制非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制探讨

目的:探讨miR-140-5p靶向组蛋白去乙酰化酶7(histone deacetylase 7,HDAC7)调控非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法:采用qRT-PCR检测人NSCLC组织及癌旁组织中miR-140-5p的表达水平。用miR-140-5p mimic(模拟物)及miR-140-5p NC(阴性对照)转染A549细胞,CCK8法及克隆形成实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-5p与HDAC7的靶向关系,Western blot检测各组细胞HDAC7及PI3K、p-PI3K、AKT、和p-AKT表达水平。结果:与癌旁组织相比,miR-140-5p在NSCLC组织中的表达水平明显减低,差异有统计学意义(P<0.01)。与miR-140-5p NC组相比,过表达miR-140-5p后A549细胞在48和72 h的增殖能力明显降低(P<0.05);且细胞克隆形成、细胞迁移和侵袭能力均降低(均P<0.05),PI3K/AKT信号通路中关键分子p-PI3K和p-AKT蛋白水平明显降低(均P<0.05)。生物信息学预测HDAC7可能是miR-140-5p的一个靶基因,且双荧光素酶报告结果证实miR-140-5p直接靶向调节HDAC7表达。结论:miR-140-5p通过靶向HDAC7表达进而抑制NSCLC A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与通过抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。

CircBACH1调节miR-140-5p/MDM2轴对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响

目的探讨CircBACH1对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响以及在此过程中对miR-140-5p/MDM2轴的调节机制。方法收集MM组和正常对照组骨髓浆细胞,将人MM细胞系U266细胞分为未转染(Control)组、si-NC组、si1-CircBACH1组、si2-CircBACH1组、si-CircBACH1+anti-miR-NC组、si-CircBACH1+anti-miR-140-5p组。实时荧光定量PCR检测细胞中CircBACH1、miR-140-5p、鼠双微体2(MDM2)mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡及对硼替佐米的敏感性;Western blot检测细胞中B细胞淋巴因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶(cleaved caspase)-3蛋白的表达;双萤光素酶报告基因实验验证CircBACH1、miR-140-5p、MDM2三者的靶向关系。结果与正常对照组相比,MM组的骨髓浆细胞及U266细胞中CircBACH1、MDM2 m RNA表达升高,miR-140-5p表达降低(P<0.05);与Control组和si-NC组相比,siCircBACH1组细胞中CircBACH1、MDM2的mRNA表达、细胞增殖活性、Bcl-2蛋白表达均降低,miR-140-5p的表达、细胞凋亡率、化疗敏感性及cleaved caspase-3、Bax表达均升高(P<0.05);而回补实验中,si-CircBACH1对MM细胞的影响被anti-miR-140-5p逆转,且MDM2的表达也升高(P<0.05)。双萤光素酶基因报告实验验证了CircBACH1、MDM2均与miR-140-5p存在靶向关系。结论敲低CircBACH1能够上调miR-140-5p表达,下调MDM2的表达,抑制MM细胞的增殖,促进MM细胞凋亡,提高化疗敏感性。

2型糖尿病患者血清miR-140-3p和EGR1水平与肠道菌群的关系研究

目的 探究2型糖尿病(T2DM)患者血清微小RNA-140-3p(miR-140-3p)和早期生长反应因子1(EGR1)水平与肠道菌群的关系。方法 回顾性选取2021年3月至2022年12月在青岛大学附属青岛市中心医院就诊治疗的125例T2DM患者作为T2DM组,另选取同期体检健康者100名作为对照组。采用实时荧光定量PCR测定血清miR-140-3p、EGR1 mRNA水平,比较对照组与T2DM组的一般资料以及血清miR-140-3p、EGR1 mRNA水平;采用Pearson分析T2DM患者血清miR-140-3p、EGR1 mRNA水平与肠道菌水平的相关性。结果 与对照组比较,T2DM组的体重指数、腰围、空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数、甘油三酯、总胆固醇均显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。T2DM组血清miR-140-3p较对照组均显著下调,血清EGR1 mRNA水平显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,T2DM组乳酸杆菌、拟杆菌水平均显著减少,T2DM组双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌、酵母菌水平均显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,T2DM患者血清miR-140-3p水平与乳酸杆菌、拟杆菌水平均呈正相关(P<0.05),与双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌、酵母菌水平均呈负相关(P<0.05);T2DM患者血清EGR1 mRNA水平与乳酸杆菌、拟杆菌水平均呈负相关(P<0.05),与双歧杆菌、肠杆菌、肠球菌、酵母菌水平均呈正相关(P<0.05)。结论 T2DM患者血清miR-140-3p表达水平显著下调,EGR1表达水平显著上调,且与患者肠道菌水平具有一定相关性。

敲低RIP140基因的ADSCs通过TLR4/NF-κB信号通路改善心肌肥厚大鼠心功能

目的探讨敲低受体相互作用蛋白140(RIP140)基因的脂肪间充质干细胞(ADSCs)通过TLR4/NF-κB信号通路改善心肌肥厚(MH)大鼠心功能的机制。方法利用慢病毒载体构建敲低RIP140基因的ADSCs。采用连续7 d皮下注射异丙肾上腺素(ISO)(7 mg/kg)建立MH大鼠模型。第8 d时移植ADSCs。具体分组如下:将60只大鼠随机分为sham组(连续7 d注射PBS)、MH组(连续7 d注射ISO)、PBS组(连续7 d注射ISO+第8 d注射PBS)、ADSCs组(连续7 d注射ISO+第8 d注射ADSCs)、LV-shRIP140-ADSCs组(连续7 d注射ISO+第8 d注射LV-shRIP140-ADSCs)和LV-shNC-ADSCs组(连续7 d注射ISO+第8 d注射LV-shNC-ADSCs),每组10只。ADSCs移植28 d后进行指标检测。超声心动图评估大鼠心功能;检测心肌酶水平;HE染色观察心肌组织病理学改变;TUNEL染色检测细胞凋亡;ELISA检测炎症因子的表达;RT-qPCR和Western-blot检测TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白表达。结果与sham组相比,MH组心肌纤维排列紊乱,心肌细胞肿大、坏死;LVEF、LVFS水平降低,cTnT、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB p65 mRNA和TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平升高(均P<0.05);与PBS组相比,ADSCs组心肌纤维、细胞损伤明显改善;LVEF、LVFS水平升高,cTnT、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、NF-κB p65 mRNA和TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平降低(均P<0.05);与LV-shNC-ADSCs组相比,LV-shRIP140-ADSCs组LVEF、LVFS水平升高,cTnT、CK-MB、TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65 mRNA和TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白水平降低(均P<0.05)。结论敲低RIP140的ADSCs通过抑制TLR4/NF-κB信号通路减轻心肌肥厚大鼠心肌组织细胞凋亡及炎症反应,促进大鼠心功能恢复。

清热活血方对胶原诱导关节炎大鼠miR-140、TLR4、NF-κB的影响

目的 探讨清热活血方对胶原诱导关节炎(collagen type Ⅱ-induced arthritis, CIA)大鼠miR-140/Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路的影响。方法 6周龄SPF级大鼠24只,随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(0.2 mg/kg)、清热活血方组(34 g/kg),每组6只,通过对大鼠尾根部注射Ⅱ型胶原乳剂构建类风湿关节炎动物模型,连续给药6周。连续监测大鼠关节肿胀程度,Elisa法测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-6含量白细胞介素6(interleukin 6,IL-6),TRAP染色观察破骨细胞(osteoclast,OC)数量,Western blot法检测大鼠骨组织中TLR4、NF-κB的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测大鼠骨组织中miR-140、TLR4、NF-κB的mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠造模开始后足趾容积逐渐增加,第21天起逐渐下降。模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度上升,OC数量明显增多,TLR4、NF-κB的蛋白与mRNA表达增加,miR-140 mRNA表达下降;与模型组比较,甲氨蝶呤组和清热活血方组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度下降,OC数量减少,TLR4、NF-κB的蛋白与mRNA表达下降,miR-140 mRNA表达增加;与甲氨蝶呤组比较,清热活血方组大鼠上述指标改善更明显,以上差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 清热活血方能够干预miR-140/TLR4/NF-κB信号通路,进而调控下游靶点分子,调节OC的成熟分化,从而达到延缓RA骨破坏的作用。

沉默circ_0000218靶向miR-140-3p影响皮肤鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为

目的探讨circ_0000218对皮肤鳞状细胞癌(cSCC)细胞恶性生物学行为的影响及可能机制。方法收集21例cSCC组织和21例正常皮肤组织,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测组织中circ_0000218和微小RNA-140-3p(miR-140-3p)表达。体外培养cSCC SCL-1细胞,分别转染si-circ_0000218、miR-140-3p mimics、共转染si-circ_0000218与anti-miR-140-3p后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法和克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中活化的胱天蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000218和miR-140-3p调控关系。结果cSCC组织中circ_0000218表达量高于正常皮肤组织(P<0.05),而miR-140-3p表达量低于正常皮肤组织(P<0.05);转染si-circ_0000218或miR-140-3p mimics后,cSCC SCL-1细胞光密度(OD)值、集落形成数及划痕愈合率降低(P<0.05),而凋亡率和细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达量升高(P<0.05)。circ_0000218靶向负调控miR-140-3p。与转染si-circ_0000218的SCL-1细胞比较,共转染si-circ_0000218与anti-miR-140-3p的SCL-1细胞OD值、集落形成数及划痕愈合率升高(P<0.05),而凋亡率和细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达量降低(P<0.05)。结论circ_0000218在cSCC组织中呈高表达,其可能通过靶向抑制miR-140-3p促进cSCC细胞增殖和迁移,而阻碍细胞凋亡,有可能成为cSCC治疗的分子靶点。