32株碳青霉烯类耐药的高毒力肺炎克雷伯菌血清荚膜、毒力基因及多位点序列分型

目的探讨耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌(CR-hvKP)的基因型、耐药现状及相关感染因素,为临床的早期预警提供参考。方法收集2018年2月至2022年11月在浙江中医药大学附属温州市中医院进行细菌培养的非重复耐碳青酶烯类肺炎克雷伯杆菌(CRKP)共230株,采用MALDI-TOF质谱仪细菌鉴定,VITEK-2 Compact进行药敏实验,采用反转录PCR法检测碳青霉烯耐药基因、血清分型和毒力基因,并进行多位点序列分析(MLST)分型。结果230株CRKP中共有CR-hv KP 32株(13.91%),其中32株CR-hv KP对亚胺培南、卮他培南、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦耐药率为100%,其次为头孢替坦(82.1%)、头孢吡肟(84.3%)、呋喃妥因(89.3%)、环丙沙星(78.5%)、庆大霉素(60.7%)、妥布霉素(60.6%)、阿米卡星(60.7%)、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑(37.5%)。通过PCR及琼脂糖电泳分析共有K1型2株、K2型2株、K5型1株,部分常见毒力基因携带率超过50%,其中rmp A占56.25%(18/32)、iro N占59.37%(19/32)、aerobactin占18.75%(6/32)、mag A占6.25%(2/32)。MLST主要以ST11、ST23为主,结论血清型以K1、K2为主的碳青霉烯类耐药的肺炎克雷白菌,大部分以rmp A、iro N毒力基因为主,MLST主要以ST11、ST23为主,基因型复杂,临床上要加强该类菌株的流行病学监测与基因型分析。

宁波地区耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌的分子生物学特征研究

目的研究宁波地区耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant hypervirulent Klebsiella pneumoniae,CR-hvKP)分子流行特征,为宁波地区CR-hvKP院内防控及临床治疗提供理论依据。方法从宁波地区3家医院收集150株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,用PCR筛选出CR-hvKP;再用PCR检测其耐药基因和毒力基因。结果150株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中检出14株CR-hvKP,占比为9.33%;主要标本类型为血流感染6株和痰液5株;临床科室分布以ICU(5株)为主,其次为呼吸科(3株)和血液科(3株)。14株CR-hvKP拉丝试验阳性,荚膜血清型以K2为主,整合子均为intI1型;碳青霉烯类耐药基因以KPC-2为主,且发现3株同时携带KPC-2和NDM-1耐药基因;14株CR-hvKP均携带rmpA、kpn、entB、wabG、ureA、fimH毒力基因,其中2株aerobactin基因阳性。结论宁波地区出现的CR-hvKP以K2荚膜型为主,耐药情况严重,且同时携带耐药及毒力基因,提示临床须合理使用抗生素,加强耐药监测及院感防控,以减少CR-hvKP的传播。

替加环素与临床常用抗生素对碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌体外联合药敏试验

目的研究替加环素与临床常用抗生素对碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent and carbapenemresistant Klebsiella pneumonia,CR-HvKP)的体外联合抗菌活性。方法收集2017~2019年河北医科大学第二医院临床分离非重复性CR-HvKP共20株。应用微量肉汤稀释法测定替加环素与5种抗生素的最低抑菌浓度(MIC),采用棋盘稀释法检测替加环素与5种抗生素(多黏菌素、头孢哌酮钠/舒巴坦钠、美罗培南、阿米卡星、磷霉素钠)的联合药敏试验。结果20株CR-HvKP主要来源于呼吸ICU 13例(65%),均为ST11型,碳青霉烯酶基因均为KPC-2型。血清型12株(60%)为K2型,为主要的血清型,1株(5%)为K1型。拉丝试验及毒力基因rmpA2均为阳性。替加环素与多黏菌素出现协同作用,百分比为60%。替加环素与美罗培南、磷霉素钠、头孢哌酮钠/舒巴坦钠均未出现协同作用。结论替加环素与多黏菌素体外联合有协同作用,可供临床作为参考治疗CR-HvKP感染。

碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌的实验室研究及与临床转归相关危险因素分析

目的研究碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent and carbapenem-resistant Klebsiella pneumonia,CR-HvKP)实验室检测及临床转归相关危险因素。方法回顾性研究2016年12月~2017年12月河北医科大学第二医院CR-HvKP感染患者20例,对患者临床资料进行分析,采用PCR检测毒力基因(rmpA和rmpA2)、血清型(K1和K2)以及碳青霉烯酶基因(KPC-2,NDM-1,OXA,VIM和IMP)。结果20例CR-HvKP感染患者中,毒力基因rmpA2均为阳性,拉丝试验阳性17例(85%),K2血清型16例(80%)和碳青霉烯酶基因KPC-2型18例(90%)。标本来源主要为痰/肺泡灌洗液16例(80%),治疗好转9例(45%)和治疗无效11例(55%)。患者使用气管插管辅助呼吸以及感染并发症危及生命的感染性休克治疗无效和好转比较,差异均具有统计学意义(χ^2=5.690~7.593,均P<0.05)。结论CR-HvKP感染临床治愈率低,传播性强,应引起高度重视。

Acquisition of a novel conjugative multidrug-resistant hypervirulent plasmid leads to hypervirulence in clinical carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae strains

The co-occurrence of plasmid-mediated multidrug resistance and hypervirulence in epidemic carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae has emerged as a global public health issue.In this study,an ST23 carbapenem-resistant hyper-virulent K.pneumoniae(CR-HvKP)strain VH1-2 was identified from cucumber in China and harbored a novel hybrid plasmid pVH1-2-VIR.The plasmid pVH1-2-VIR carrying both virulence and multidrug-resistance(MDR)genes was likely generated through the recombination of a virulence plasmid and an IncFIIK conjugative MDR plasmid in clinical ST2318622 isolated from a sputum sample.The plasmid pVH1-2-VIR exhibited the capacity for transfer to the clinical ST11 carbapenem-resistant K.pneumoniae(CRKP)strain via conjugation assay.Acquisition of pVH1-2-VIR plasmid directly converted a CRKP into CR-HvKP strain characterized by hypermucoviscosity,heightened virulence for Galleria mellonella larvae,and increased colonization ability in the mouse intestine.The emergence of such a hybrid plasmid may expedite the spread of CR-HvKP strains,posing a significant risk to human health.