猪CR1-like蛋白酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定

为了研究猪红细胞免疫粘附病原体的分子机制,筛选能与猪红细胞类补体受体I型(CR1-like)蛋白发生相互作用的蛋白,将CR1-like36和Cr1-like811基因与pGBKT7载体连接后,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CR1-like36和pGBKT7-CR1-like811。转化入酵母细胞Y2HGold中,检测融合蛋白的表达及其对酵母细胞的毒性和自激活现象。结果表明,CR1-like基因成功连接到pGBKT7载体,重组质粒表达的融合蛋白对酵母细胞无毒性作用,也无自激活现象。成功构建了符合酵母双杂交系统要求的诱饵质粒pGBKT7-CR1-like36和pGBKT7-CR1-like811,为课题组后期研究猪红细胞CR1-like发挥免疫粘附功能的分子机理奠定基础。

枯草芽孢杆菌CH-1降解羽毛产物对Cr(Ⅵ)的还原作用

本研究旨在探索一种对环境友好的方法以减少重金属六价铬Cr(Ⅵ)的毒性。采用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CH-1发酵羽毛,制备出富含半胱氨酸的羽毛发酵液(Feather Fermentation Broth,FFB)。实验结果显示FFB能够有效地将有毒的六价铬还原为相对无害的三价铬。通过对FFB的β-角蛋白酶酶活性、半胱氨酸浓度以及对六价铬Cr(Ⅵ)的还原率的测定。我们发现FFB中β-角蛋白酶酶活性在21 h左右达到最大值,而半胱氨酸含量在36 h达到最高值,Cr(Ⅵ)的还原效果最佳时间也是36 h。值得注意的是,即使经过高压高温处理,FFB对Cr(Ⅵ)的还原力并未受到影响,表明还原过程不依赖于生物酶的作用。进一步实验,将FFB上清原液浓缩5倍后处理重铬酸钾溶液,发现浓缩液的还原效果是原始上清液效果的1.5倍。研究表明枯草芽孢杆菌CH-1能较好地降解羽毛废弃物,水解产物中含大量半胱氨酸,对Cr(Ⅵ)具有显著的还原能力。综上所述,本研究提供了一种使用枯草芽孢杆菌CH-1无公害处理羽毛废弃物的新策略,并为其在循环农业生态系统中的应用提供了理论依据和精确计算方法。这一发现对于实现农业废弃物资源化利用,以及环境中有毒六价铬的安全处理具有重要意义。

MTB Hsp16.3重组蛋白通过Fractalkine/CX3CR1信号轴调控小鼠肺泡巨噬细胞M2型极化

目的初步探讨Fractalkine/CX3CR1信号轴在MTB Hsp16.3重组蛋白诱导小鼠肺泡巨噬细胞向M2型极化中的作用及机制。方法提取小鼠肺泡巨噬细胞,观察细胞形态后用其特异性标志CD68鉴定;MTB Hsp16.3(100 ng/mL)刺激肺泡巨噬细胞后,采用Real-time qPCR检测TNF-α、Arg-1等极化相关分子mRNA表达水平,Western blot检测Fractalkine、CX3CR1的表达情况。用慢病毒干扰肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达后,荧光显微镜观察病毒感染情况;流式细胞术检测感染效率;Real-time qPCR和Western blot检测感染前后肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达情况。采用MTB Hsp16.3刺激慢病毒感染过的肺泡巨噬细胞,Real-time qPCR检测各组极化相关分子mRNA表达水平;Western blot检测CD206、Arg-1的蛋白表达情况。利用Western blot检测各组中JNK、p38、ERK的磷酸化水平。结果显微镜下观察发现新分离的肺泡巨噬细胞为圆形,大小不等,约2 h后贴壁较牢,24 h后,肺泡巨噬细胞呈圆形、梭形等多种形态,且胞体更大,通过CD68鉴定为肺泡巨噬细胞;经MTB Hsp16.3处理后巨噬细胞TGF-β、IL-10、Arg-1、Fizz1的mRNA水平明显增高(P<0.05),巨噬细胞表面Fractalkine、CX3CR1的表达增高(P<0.05),与JNK、p38的磷酸化水平升高(P<0.05)相关。干扰肺泡巨噬细胞CX3CR1的表达后,慢病毒感染效率在72 h达到最高峰,并且可降低巨噬细胞表面CX3CR1的表达。经MTB Hsp16.3刺激慢病毒感染过的肺泡巨噬细胞发现,TGF-β、IL-10、Arg-1、Fizz1 mRNA水平降低(P<0.05),CD206、Arg-1的表达水平降低(P<0.05),与JNK、p38磷酸化水平被抑制(P<0.05)相关。结论Fractalkine/CX3CR1信号轴可能参与调控MTB Hsp16.3重组蛋白诱导的肺泡巨噬细胞M2型极化,并且可能通过激活JNK、p38的磷酸化水平发挥作用。

新风胶囊对类风湿性关节炎补体调节蛋白红细胞CR1及CD59的影响

目的:探讨新风胶囊对类风湿性关节炎(RA)补体调节蛋白的影响及其作用机制。方法:将40例RA患者按随机数字表分为新风胶囊实验组(20例)和正清风痛宁对照组(20例),并设10名健康者为健康对照组,观察两组RA患者治疗前后补体调节蛋白红细胞CR 1、CD 59以及临床症状、体征关节疼痛度、关节肿胀度、关节压痛度、晨僵时间、握力、步行15 m时间和实验室指标〔血沉(ESR),类风湿因子滴度(RF),C反应蛋白(CRP),补体C 3、C 4,免疫球蛋白IgG、IgM、IgA,α1糖酸蛋白(1αAGP),红细胞计数(RBC)〕的改善情况。结果:RA患者治疗前红细胞CR 1与CD 59表达水平均显著低于健康对照组(P均<0.05);治疗后两组RA患者临床症状、体征及实验室指标均较治疗前有明显改善(P均<0.05),其中实验组关节疼痛度、晨僵时间、双手平均握力、15 m步行时间及ESR、补体C 3、RBC改善程度均较对照组显著(P<0.05或P<0.01)。两组治疗后红细胞CR 1、CD 59均比治疗前显著升高(P均<0.05),治疗后实验组的红细胞CR 1、CD 59均值均显著高于对照组(P均<0.01)。结论:新风胶囊能有效提高体内过低的补体调节蛋白红细胞CR 1、CD 59含量,进而抑制过亢的体液免疫反应,使补体有效清除体内循环免疫复合物,并减少补体对自身细胞的攻击损伤,从而控制病情活动,这也是其治疗RA的机制之一。

六味地黄汤对IgA肾病模型大鼠转化生长因子-β1和补体调节蛋白CR1表达的影响

目的观察六味地黄汤对IgA肾病模型大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)和补体调节蛋白CR1表达的影响,并探讨其作用机制。方法 40只SD大鼠适应性喂养1周,按完全随机方法分为正常组、模型组、雷公藤组、六味地黄汤组。采用复合方法建立IgA肾病模型,成模后各给药组给予相应药物灌胃,连续4周。检测各组大鼠尿常规、尿红细胞计数和24 h尿蛋白,取血检测肌酐、尿素氮、血清总蛋白、血清白蛋白,取肾组织HE、Masson染色观察大鼠肾脏病理结构,免疫组化检测大鼠肾脏组织TGF-β1和CR1的表达。结果与模型组比较,六味地黄汤组模型大鼠蛋白尿、血尿及肾脏纤维化减轻(P<0.05),TGF-β1表达下降、CR1表达上调(P<0.05)。结论六味地黄汤可能通过降低TGF-β1的生成,促进CR1的表达,延缓IgA肾病模型大鼠肾脏纤维化。

新的STK11互作蛋白LOH12CR1的筛选及鉴定

PJ综合征(Peutz-Jeghers syndrome,PJS)的疾病基因STK11编码由433个氨基酸残基组成的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶STK11,具有调控细胞周期,调节细胞极性以及细胞基础能量代谢等重要功能.STK11蛋白羧基端含有123个残基,对STK11生物学功能的实现起着调节作用,但机制尚未明确.本研究利用pGEX4T-2原核表达系统,构建pGEX4T-2-STK11羧基端重组载体,并诱导表达了GST-STK11羧基端融合蛋白,采用GST-pulldown结合质谱分析的方法,鉴定出STK11羧基端的可能互作蛋白LOH12CR1.通过免疫共沉淀技术证实了STK11激酶同LOH12CR1互作;免疫荧光共定位实验亦发现STK11与LOH12CR1共定位.STK11与LOH12CR1互作的发现为研究STK11的功能提供新的切入点.

池蝶蚌组织蛋白酶L1-like基因的克隆及表达特征分析

为了解淡水贝类是否存在组织蛋白酶L的亚型及其亚型的免疫相关作用,本实验利用已构建的池蝶蚌血细胞全长c DNA文库,筛选获得与之同源的EST序列,结合RACE技术进一步克隆了池蝶蚌一个新的组织蛋白酶L基因的c DNA全长,命名为Hs Cts L1-like基因(Gen Bank登录号为KF015273)。该序列全长为1280 bp,5′-非翻译区(5′UTR)为31 bp,3′-非翻译区(3′UTR)为256 bp,开放阅读框区(ORF)为993 bp,编码330个氨基酸,预测蛋白相对分子量为36.86 ku,理论等电点为6.23。序列分析结果显示,Hs Cts L1-like与其他软体动物相对应序列具有共同结构特征,包含信号肽、前肽抑制域和成熟肽三部分,在其他物种中已鉴定的Cts L签名序列标签(ERF/WNIN、GNFD、GCXGG和QCHN等)在Hs Cts L1-like中均可找到。其氨基酸序列同缢蛏Cts L1(AGL33704.1)同源性最高,达67%;与报道的三角帆蚌Cts L(ADV03094)和池蝶蚌中另一个Cts L(AEX88474)仅均为52.91%;系统进化分析表明,Hs Cts L1-like与缢蛏、长牡蛎和合浦珠母贝的Cts L1聚为一分支,推测Hs Cts L1-like属于Cts L家族中的亚型1。实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测显示,Hs Cts L1-like m RNA在肝脏中表达量最高,其次是卵巢和精巢。注射鳗弧菌后,血细胞和肝脏Hs Cts L1-like m RNA转录水平显著升高,暗示其是一个免疫有关的基因,参与了池蝶蚌的先天免疫应答反应。

LOH12CR1互作蛋白GPS2的筛选及鉴定

12号染色体短臂杂合子缺失的现象存在于多种血液科肿瘤和实体瘤患者中,提示此区域中可能存在抑瘤基因,LOH12CR1是此区域中已鉴定的基因之一。为探讨LOH12CR1的生物学功能,首先采取酵母双杂交系统筛查其互作蛋白,鉴定到转录调控因子GPS2是其互作蛋白。进一步在HEK293细胞中运用免疫共沉淀方法证实GPS2与LOH12CR1在体内存在相互作用;免疫荧光共定位结果显示GPS2与LOH12CR1在细胞核内存在共定位信号。

春尺蠖海藻糖转运蛋白基因AcinTret1和AcinTret1-like的克隆、分子特性与表达分析

海藻糖作为昆虫的血糖,不仅对增强其在抵御外界不利环境中的能力起着重要作用,还可为昆虫的生长发育和繁殖提供能量。海藻糖转运体(Tret)在从脂肪体等海藻糖产生组织向消耗组织转运过程中起着重要作用。为深入探究Tret基因在春尺蠖(Apocheima cinerarius)低温胁迫中的作用,研究基于已有春尺蠖幼虫转录组数据(不同低温胁迫条件),克隆获取Tret1和Tret1-like基因,分别命名为AcinTret1和AcinTret1-like(GenBank登录号:MZ689788、MZ689789),对基因的分子特征进行分析,同时构建系统进化树,最后对其在不同低温胁迫下的表达谱进行分析。结果显示,春尺蠖AcinTret1、AcinTret1-like基因编码蛋白序列(CDS)全长分别为1 926、1 533 bp,分别编码641、510个氨基酸,二者均具有主要协同转运蛋白超家族(major facilitator superfamily,简称MFS)的保守结构域,在N端均不含信号肽,但均具有12个跨膜区。系统进化结果表明,春尺蠖AcinTret1和AcinTret1-like基因分别与其他昆虫的Tret1和Tret1-like基因聚为一类,且AcinTret1与同为鳞翅目尺蛾科的冬尺蠖(Operophtera brumata)的亲缘关系最近,Tret1-like则与同为鳞翅目的粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的亲缘关系最近。基因表达分析结果显示,AcinTret1和AcinTret1-like基因的表达量均在-10℃达到最大值,其次为25℃,呈现先下降后上升的趋势。由研究结果可以看出,2个Tret1基因在春尺蠖抵御低温胁迫调控中扮演重要角色,该研究结果有助于探索春尺蠖低温胁迫中调控海藻糖代谢的机制,为进一步揭示春尺蠖低温胁迫的分子机制奠定基础。

NF-κB上调神经病理性疼痛大鼠脊髓CX3CR1表达

目的:观察鞘内注射核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对坐骨神经慢性挤压伤(CCI)大鼠痛阈和脊髓CX3CR1受体表达的影响.方法:60只成年雄性SD大鼠,体质量250～300g,鞘内置管成功后,随机分5组(n=12):假手术+生理盐水(sham组)、CCI+生理盐水(CCI组)、假手术+PDTC1000pmol/d(PDTC+sham组)、CCI+PDTC100pmol/d(PDTC+CCI组1)、CCI+PDTC1000pmol/d(PDTC+CCI组2).鞘内置管5d后开始鞘内输注生理盐水或不同剂量的PDTC,鞘内注射1d后建立大鼠CCI神经病理性疼痛模型或者假手术模型,分别于术前及术后不同时点测定5组大鼠的痛敏值,并在鞘内注射4d后取脊髓腰膨大部进行Western Blot实验检测CX3CR1的表达.结果:CCI组与sham组比较大鼠术后各时点痛敏阈值明显下降,并在术后第3日降至最低点(P<0.05),脊髓CX3CR1的表达明显升高(P<0.01).PDTC+CCI组与CCI组比较,术后各时点大鼠痛敏阈值增高(P<0.05),脊髓CX3CR1的表达下降(P<0.01).结论:鞘内给予PDTC可减轻CCI大鼠的病理性疼痛,并抑制脊髓CX3CR1的表达.活化的NF-κB可能通过上调脊髓CX3CR1表达而参与了神经病理性疼痛的发生.

microRNA-141与HMGB1通路在不同程度心肾综合征中的表达及临床意义

目的研究心肾综合征(cardiorenal syndrome, CRS)患者外周血中microRNA-141(miR-141)与重组人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)通路的表达,探讨其与CRS发生、发展之间的关系。方法收集2017年1月至2018年12月入住东营市胜利油田中心医院重症医学科的CRS患者80例及同期体检中心40例健康志愿者外周血标本,按照2010年改善全球肾脏病预后组织/急性透析质量倡议(KDIGO/ADQI)共识将患者分为急性心肾综合征(CRS Ⅰ型)和慢性心肾综合征(CRS Ⅱ型)各40例。检测血清B型钠尿肽前体(NT-proBNP)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血肌酐(SCr)、左室射血分数(LVEF)、二尖瓣口舒张早期峰值血流速度(E峰)、舒张晚期峰值血流速度(A峰),计算E/A比值。运用RT-PCR法及Western blot法检测外周血标本中miR-141、HMGB1、 Beclin-1及自噬标志物(LC3)蛋白的表达情况并进行对比。结果 CRS I型患者常规指标NT-proBNP、hs-CRP、SCr、LVEF、E/A比值均高于CRSⅡ型患者,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR结果显示,miR-141表达量在正常组、CRSⅠ组及CRSⅡ组分别为(1.64±0.17)、(0.58±0.12)及(1.21±0.28),两个研究组表达均低于正常组,且CRS Ⅰ组表达最低(P<0.05);HMGB1-mRNA在正常组、CRSⅠ组及CRSⅡ组中表达水平分别为(0.81±0.31)、(2.23±0.35)及(1.61±0.42),两个研究组表达均高于正常组,且CRSⅠ组表达最高(P<0.05);Western blot结果显示, HMGB1、Beclin-1和LC3在CRSⅠ型中的表达量分别为(1.69±0.21)、(1.89±0.35)、(1.94±0.28),均高于CRSⅡ型(1.31±0.29)、(1.39±0.29)、(1.34±0.31),差异有统计学意义(P<0.05),且两组表达均高于正常组(0.61±0.23)、(0.64±0.12)、(0.51±0.22),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-141在CRSⅠ型患者血清中表达下降,与miR-141通过影响HMGB1的水平从而影响自噬水平,进而导致CRS的发生、发展有关,故miR-141可能为CRS潜在的治疗靶点。

一个棉花微管结合蛋白基因GhSP1L5的克隆及表达分析

利用RT-PCR技术从处于快速伸长发育时期的棉花纤维组织中克隆得到Spiral1-Like(SP1L5)基因(GhSP1L5),其开放读码框为315 bp,编码105个氨基酸的蛋白质,生物信息学分析表明,GhSP1L5蛋白N端和C端较为保守,并含有SCOP结构域,是典型的微管结合蛋白。进化树分析表明该基因与SP1L5家族基因的亲缘关系较近。构建原核表达载体pET28a-GhSP1L5,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,获得分子质量约为12 kD的重组蛋白。QRTPCR结果分析表明GhSP1L5基因在开花后15和20 dpa的纤维组织中表达量较高,在棉纤维发育的其他时期及根、茎、叶组织中表达量较低。

CX3CR1对骨髓间充质干细胞修复受损肠上皮细胞的影响

目的:探讨趋化因子受体CX3CR1对骨髓间充质干细胞(bone marrow-mesenchymal stem cells,BM-MSCs)修复受损肠上皮细胞的影响.方法:体外分离培养、鉴定BM-MSCs.采用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor a l p h a,T N F-α)处理结肠癌上皮细胞(c o l o n adenocarcinoma epithelial cell line,Caco-2)建立肠上皮损伤模型.实验分为6组:(1)单纯BM-MSCs组;(2)单纯Caco-2组;(3)Caco-2+TNF-α组;(4)BM-MSCs+Caco-2组;(5)BMMSCs+Caco-2+TNF-α组;(6)anti-CX3CR1-BM-MSCs+Caco-2+TNF-α组,利用Transwell培养板将各组共培养,通过免疫荧光、We s t e r n b l o t及荧光定量RT-P C R方法检测Caco-2上ZO-1(zonula occluden 1)、Occludin和BM-MSCs上CX3CR1蛋白及mR NA表达水平.结果:选择100 ng/mL TNF-α处理Caco-2细胞48 h建立损伤模型后,检测ZO-1和Occludin表达水平明显降低(P<0.05).在BM-MSCs与未受损的Caco-2共培养时ZO-1、Occludin和CX3CR1蛋白及m RNA的表达不受影响,而在BM-MSCs与受损Caco-2共培养时,其表达增加(P<0.05).阻断CX3CR1后,ZO-1、Occludin蛋白及m RNA的表达与未阻断前相比明显减少(P<0.05).结论:CX3CR1参与BM-MSCs对受损肠上皮的修复.

人CRIF1基因调控骨髓间充质干细胞细胞周期分布初步研究

目的探讨人CRIF1基因对骨髓间充质干细胞(hBMSCs)细胞周期调控机制。方法通过构建慢病毒载体改变CRIF1表达水平,合成发夹shRNA模板寡核苷酸链,构建pGreenPuro-sh-CRIF1干扰载体;PCR扩增CRIF1基因CDS全长,链接pMD18-T载体经测序鉴定后,构建pLentis-CMV-CRIF1-SFFV-GTP过表达载体。载体成功构建后包装慢病毒,并转染hBMSCs,以pLentis-CMV-SFFV-GTP空载体病毒作为对照,定量PCR及Western blot(WB)检测CRIF1基因和蛋白表达,流式细胞仪检测hBMSCs细胞周期分布,并通过免疫荧光观察CRIF1与CDK2细胞共定位。结果成功构建CRIF1 shRNA及过表达慢病毒载体,测定后病毒滴度达到108TU/mL。以MOI=10转染hBMSCs,并以0.8μg/mL嘌呤霉素筛选1周后,感染效率可达到>95%,WB及定量PCR证实,CRIF1基因和蛋白的表达水平,在pGreenPuro-sh-CRIF1载体转染后hBMSCs细胞受到抑制:与对照组比较,mRNA相对表达水平0.42±0.03 vs1.00±0.03(P<0.01),蛋白相对表达水平0.13±0.024 vs 1.00±0.04(P<0.01),而pLentis-CMV-CRIF1-SFFV-GTP载体转染后得到增强:与对照组比较,mRNA相对表达水平5.54±0.53 vs 1.00±0.03(P<0.01),蛋白相对表达水平4.21±0.22 vs 1.00±0.04(P<0.01)。同时,CRIF1基因过表达诱导hBMSCs G0/G1期阻滞(与对照组比较,84.99±2.66 vs 77.28±0.86,P<0.01),抑制CRIF1基因表达促进其进入细胞周期循环:G0/G1期比例与对照组比较,61.60±3.02 vs 77.28±0.86(P<0.01)。激光共聚焦显示,CRIF1与CDK2共定位于胞浆与胞核。结论 CRIF1可能通过与CDK2结合,负性调控hBMSCs细胞周期分布。

淫羊藿苷干预自然衰老模型大鼠大脑皮质趋化因子Fractalkine及其受体CX3CR1的表达

背景:趋化因子Fractalkine(FKN)不仅涉及到趋化、黏附和炎症反应,在脑组织中也参与神经细胞的增殖和凋亡。目的:观察淫羊藿苷对自然衰老大鼠大脑皮质趋化因子Fractalkine及其受体CX3CR1的影响。方法:选用3月龄雄性SD大鼠80只,随机分为4组:青年组、自然衰老组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷高剂量组。淫羊藿苷组从16月龄开始分别灌胃淫羊藿苷30,60 mg/kg,连续60 d,青年组和自然衰老组灌胃等量生理盐水60d至取材前。采用苏木精-伊红染色法观察大鼠脑组织形态学变化;β-半乳糖苷酶染色测定脑组织衰老情况;免疫组织化学检测皮质趋化因子Fractalkine和CX3CR1的表达;酶联免疫吸附法检测脑组织中白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平;免疫印迹检测脑组织Caspase-3蛋白表达,比色法检测Caspase-3活性。结果与结论:(1)自然衰老组趋化因子Fractalkine表达明显低于青年组,CX3CR1表达、Caspase-3表达及活性、SA-β-gal阳性颗粒数、炎性指标白细胞介素6、肿瘤坏死因子α明显高于青年组;而淫羊藿苷用药后能逆转上述现象,且淫羊藿苷高剂量组好于淫羊藿苷低剂量组;(2)结果提示淫羊藿苷能够低脑组织中的炎性因子水平,抑制神经细胞凋亡,可能与影响趋化因子Fractalkine及CX3CR1表达有关。

2型糖尿病肾病CX3CR1基因多态性相关因素及中医证型分析

目的探讨糖尿病肾病(DN)患者CX3CR1-V249I基因突变与中医证型、尿微量白蛋白与肌酐比值(ACR)及炎症因子之间的关系。方法应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性的方法及反向测序法检测108例DN患者CX3CR1-V249I多态性情况,同时测定DN患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、ACR、低密度脂蛋白(LDL)、核因子-κB(NF-κB)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、趋化因子Fractalkine(FKN)含量,并记录患者的中医证型。结果108例DN患者中CX3CR1基因VV型87例,Ⅵ型17例,Ⅱ型4例。中医证型与CX3CR1-V249I基因型之间具有相关性(χ2=10.136,P<0.05),VV型基因多辨证为气阴两虚型,Ⅵ和Ⅱ型以阴虚燥热为主。与阴虚燥热型和阴阳两虚型比较,气阴两虚型患者具有更高的ACR水平[(948.3±36.4)mg/g比(919.3±31.5)mg/g、(921.8±37.9)mg/g,F=4.946,P<0.05];与痰湿证、湿热证比较,兼血瘀证患者具有更高的ACR水平[(954.3±34.3)mg/g比(921.5±36.9)mg/g、(917.8±37.1)mg/g,F=7.283,P<0.05]。CX3CR1-V249I基因突变与Hcy、ACR水平相关(t=3.601、2.692,P均<0.05)。且V249I野生型(VV型)患者较突变型(Ⅵ型+Ⅱ型)患者NF-Κb[(0.94±0.16)ng/m L比(0.75±0.17)ng/m L,t=7.926,P<0.05]、IL-6[(170.75±34.01)pg/m L比(147.43±27.23)pg/m L,t=5.472,P<0.05]、TNF-α[(95.91±19.21)ng/m L比(81.12±13.50)ng/m L,t=2.887,P<0.05]含量要高,FKN则在突变型患者表达更多[(1.10±0.19)ng/m L比(0.83±0.12)ng/m L,t=9.246,P<0.05)。结论 DN患者CX3CR1-V249I基因多态性与Hcy、ACR、NF-κB、IL-6、TNF-α、FKN及中医证候相关。

组蛋白赖氨酸甲基转移酶DOT1L抑制剂分子水平高通量筛选模型的建立

类端粒沉默干扰体1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)是一种能够催化组蛋白H3第79位赖氨酸(H3K79)发生甲基化修饰的表观遗传调控酶,是第一个被发现不含有SET结构域的赖氨酸甲基转移酶.H3K79位点的甲基化程度能够影响和调控某些特定基因的表达,与急性髄性白血病(acute myelocytic leukemia,AML)的发生与发展密切相关.为建立一种分子水平DOT1L小分子抑制剂的高通量筛选模型,以EPZ-5676为阳性化合物,探讨最佳反应酶浓度、底物浓度及反应时间等,并对优化后的反应体系进行检测和确认.通过对多种参数优化使得高通量筛选体系的Z'因子达到0.54,表明已成功建立了DOT1L小分子抑制剂高通量筛选模型.

Fractalkine/CX3CR1系统调节β细胞功能及胰岛素分泌

Fractalkine（FKN）是一个细胞膜蛋白，其功能主要通过与其受体（CX3CR1）结合介导细胞和细胞的粘附和信息交流。本研究证明了Fractalkine（FKN）／CX3CR1系统在调控胰岛B细胞的功能及胰岛素分泌中的作用。研究人员发现CX3CRl基因缺陷小鼠表现出葡萄糖和胰高血糖素样肽-1（GLP-1）刺激的胰岛素分泌功能缺陷，

FKN影响动脉粥样硬化信号传导机制及G-蛋白在其中作用的研究

目的探讨鸟苷酸结合蛋白(G-蛋白)对fractalkine(FKN)诱导单个核细胞合成NF-κB、TNF-α的影响及FKN-CX3CR1可能存在的一条信号传导机制,并研究G-蛋白在其中的作用。方法抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。将每份提取的单个核细胞分为空白对照组、FKN组及百日咳毒素(PTX)组。应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平。结果(1)FKN诱导组较空白组NF-κB、TNF-α表达明显增多,G-蛋白阻断剂PTX组较FKN组NF-κB、TNF-α表达明显减少。结论(1)FKN-CX3CR1有促进动脉粥样硬化形成的作用,CX3CR1为G-蛋白偶联受体,FKN与CX3CR1结合以后,可以通过与G-蛋白偶联,启动细胞内信号传导机制。