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利用RNAi抑制cre1基因转录提高里氏木霉表达纤维素酶 被引量:3
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作者 王榕 宫莉 +4 位作者 姚斌 薛鲜丽 罗会颖 张永杰 苏小运 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期189-194,共6页
本研究采用RNA干扰技术(RNAi)对里氏木霉主要的转录抑制因子cre1基因的表达进行抑制,以期提高里氏木霉生产纤维素酶的能力。通过PCR,从里氏木霉的基因组中扩增得到cbh1启动子、反向的cre1基因片段(568-963 bp)、正向的cre1基因片段... 本研究采用RNA干扰技术(RNAi)对里氏木霉主要的转录抑制因子cre1基因的表达进行抑制,以期提高里氏木霉生产纤维素酶的能力。通过PCR,从里氏木霉的基因组中扩增得到cbh1启动子、反向的cre1基因片段(568-963 bp)、正向的cre1基因片段(655-961 bp)和cbh2终止子,利用DNA assembler方法将这些基因连接到pRS424质粒上,构建成p Cre1-i质粒。再将RNAi盒分作两个片段扩增,同时转化里氏木霉并通过PCR鉴定阳性转化子。摇瓶发酵显示其中一株转化子在纤维素诱导培养基中培养4.5 d后,其纤维素酶的滤纸酶活、内切葡聚糖酶活和CBHI酶活为0.67、3.70和0.46 U/m L,较出发菌株分别提高了1.3、1.8和5.6倍。通过实时荧光RT-PCR检测,发现该转化子中cre1基因的转录水平比出发菌株降低了43%。 展开更多
关键词 cre1 RNAI 纤维素酶 DNA ASSEMBLER
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里氏木霉组成型表达siRNA干扰cre1基因对纤维素酶表达的调控作用 被引量:5
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作者 高云雨 钟路遥 +4 位作者 董冠园 佘伟怡 周娇娇 刘思远 田生礼 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期12-19,共8页
使用组成型siRNA干扰载体对里氏木霉碳阻遏抑制因子CRE1进行siRNA干扰以研究其对里氏木霉纤维素酶基因表达的调控作用。根据里氏木霉cre1基因序列设计siRNA干扰片段。利用里氏木霉组成型表达载体将干扰片段分别构建至里氏木霉cre1干扰... 使用组成型siRNA干扰载体对里氏木霉碳阻遏抑制因子CRE1进行siRNA干扰以研究其对里氏木霉纤维素酶基因表达的调控作用。根据里氏木霉cre1基因序列设计siRNA干扰片段。利用里氏木霉组成型表达载体将干扰片段分别构建至里氏木霉cre1干扰载体并将其转化里氏木霉QM9414。分别在48和144 h对各转化子进行纤维素酶酶活力测试(CMC酶活力测试和滤纸酶活力测试)及利用qPCR检测相关基因的表达。在诱导144 h时转化子的两种酶活力平均约比出发菌株高出1倍。qPCR检测cre1基因的表达结果表明,转化子的cre1表达量比出发菌株平均降低约50%,而ace1基因表达量变化不大。其他纤维素酶相关基因的表达水平也均高于出发菌株。通过组成型表达siRNA干扰里氏木霉cre1基因可以明显调控纤维素酶基因的表达,为研究纤维素酶的基因表达与调控提供参考。 展开更多
关键词 里氏木霉 RNA干扰 cre1 纤维素酶
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瑞氏木霉碳源阻遏相关基因Cre1的分子改造 被引量:5
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作者 陈小玲 陈东 +1 位作者 张穗生 陈英 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期288-292,共5页
为了提高瑞氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶的活力,用类似基因改组的方法改造其碳源阻遏相关基因cre1。以瑞氏木霉基因组DNA为模板PCR扩增cre1基因,用DNaseⅠ消化cre1基因后,回收50-100 bp的DNA片段,用T4 DNA连接酶连接,以连接产... 为了提高瑞氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶的活力,用类似基因改组的方法改造其碳源阻遏相关基因cre1。以瑞氏木霉基因组DNA为模板PCR扩增cre1基因,用DNaseⅠ消化cre1基因后,回收50-100 bp的DNA片段,用T4 DNA连接酶连接,以连接产物作为模板进行无引物PCR,并将PCR产物转入瑞氏木霉原生质体,通过测定滤纸酶活的方法筛选突变菌株,并在NCBI上比对分析突变菌株的cre1基因。结果表明,筛选获得1株纤维素滤纸酶活比出发菌株提高0.7倍的突变菌株cre2-3。cre2-3菌株在液体培养基中呈棉花状,而出发菌株呈小颗粒状,菌株cre2-3发酵液的颜色比出发菌株的更黄亮。推测cre1基因与瑞氏木霉菌株的生长代谢有关。 展开更多
关键词 碳源阻遏 DNA改组 cre1基因 瑞氏木霉
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深绿木霉中碳代谢抑制因子CRE1功能特性研究 被引量:2
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作者 李佩忆 周于聪 +1 位作者 李雅乾 陈捷 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期17-25,共9页
木霉菌(Trichoderma spp.)是一种广泛存在于土壤及植物根系生境中的丝状真菌,具有拮抗植物病原真菌和促进植物生长的双重功效。碳代谢抑制子CRE1全局性调控细胞生长代谢过程,保障木霉在不同生境中的存活及拮抗病原菌特性。比较深绿木... 木霉菌(Trichoderma spp.)是一种广泛存在于土壤及植物根系生境中的丝状真菌,具有拮抗植物病原真菌和促进植物生长的双重功效。碳代谢抑制子CRE1全局性调控细胞生长代谢过程,保障木霉在不同生境中的存活及拮抗病原菌特性。比较深绿木霉(T.atroviride)T23及其Cre1突变株(T23Δcre1)在不同培养基中的生长和代谢特性,结果表明:cre1基因沉默后,T23Δcre1较T23菌丝生长变慢,产孢滞后且降低一个数量级,cre1对菌丝生长和产孢的调控依赖于培养基组分。此外,cre1基因抑制几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶基因转录,区别性调控部分次级代谢合成的非核糖体肽合成酶NRPS和聚酮合成酶PKS基因的表达。综上,碳代谢因子CRE1作为一个多效性的转录调控因子,抑制细胞壁降解酶和代谢产物合成相关的基因表达,赋予木霉菌在环境中的适应性和竞争性,是深绿木霉T23生长的必要因子。 展开更多
关键词 深绿木霉T23 碳代谢抑制因子cre1 生长 酶活特性 次级代谢合成基因
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Redesigning transcription factor Cre1 for alleviating carbon catabolite repression in Trichoderma reesei 被引量:1
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作者 Lijuan Han Kuimei Liu +6 位作者 Wei Ma Yi Jiang Shaoli Hou Yinshuang Tan Quanquan Yuan Kangle Niu Xu Fang 《Synthetic and Systems Biotechnology》 SCIE 2020年第3期230-235,共6页
Carbon catabolite repression(CCR),which is mainly mediated by Cre1 and triggered by glucose,leads to a decrease in cellulase production in Trichoderma reesei.Many studies have focused on modifying Cre1 for alleviating... Carbon catabolite repression(CCR),which is mainly mediated by Cre1 and triggered by glucose,leads to a decrease in cellulase production in Trichoderma reesei.Many studies have focused on modifying Cre1 for alleviating CCR.Based on the homologous alignment of CreA from wild-type Penicillium oxalicum 114–2(Po-0)and cellulase hyperproducer JUA10-1(Po-1),we constructed a C-terminus substitution strain—Po-2—with decreased transcriptional levels of cellulase and enhanced CCR.Results revealed that the C-terminal domain of CreAPo−1 plays an important role in alleviating CCR.Furthermore,we replaced the C-terminus of Cre1 with that of CreAPo−1 in T.reesei(Tr-0)and generated Tr-1.As a control,the C-terminus of Cre1 was truncated and Tr-2 was generated.The transcriptional profiles of these transformants revealed that the C-terminal chimera greatly improves cellulase transcription in the presence of glucose and thus upregulates cellulase in the presence of glucose and weakens CCR,consistent with truncating the C-terminus of Cre1 in Tr-0.Therefore,we propose constructing a C-terminal chimera as a new strategy to improve cellulase production and alleviate CCR in the presence of glucose. 展开更多
关键词 Carbon catabolite repression CHIMERA cre1 cel7a Trichoderma reesei
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改良ATMT转化技术在深绿木霉基因敲除中的应用 被引量:2
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作者 周于聪 谢秋瑾 +3 位作者 宋凯 杨朝晖 陈捷 李雅乾 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期58-64,共7页
木霉菌是环境中具有重要经济价值的丝状真菌之一。高效率的基因敲除技术是深入研究木霉菌功能的必要手段。研究改进了传统的农杆菌介导的遗传转化技术(ATMT),成功构建深绿木霉T23中碳代谢抑制因子cre1基因敲除突变株。首先查找深绿木... 木霉菌是环境中具有重要经济价值的丝状真菌之一。高效率的基因敲除技术是深入研究木霉菌功能的必要手段。研究改进了传统的农杆菌介导的遗传转化技术(ATMT),成功构建深绿木霉T23中碳代谢抑制因子cre1基因敲除突变株。首先查找深绿木霉全基因组序列,比对并扩增cre1基因侧翼序列,以改造后的p1300qh质粒为骨架构建cre1敲除载体p C1300qh:cre1-up∷hyg∷cre1-down,转化到农杆菌AGL-1。通过优化ATMT转化中木霉菌分生孢子浓度,改良培养方式和延长诱导转化时间等参数,获得最佳转化条件:木霉菌分生孢子浓度为8×10~6,筛选培养基改为IM培养基,诱导转化时间延长,成功筛选到可能的转化子10个。最后,经鉴定有1个转化子为cre1敲除转化子,9个为T-DNA随机插入。因此,为深绿木霉菌基因功能研究提供了可借鉴的高效便捷的遗传转化方法。 展开更多
关键词 深绿木霉T23 农杆菌介导的遗传转化方法ATMT 碳代谢抑制因子cre1 筛选鉴定 优化
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Rhizobium Lipo-chitooligosaccharide Signaling Triggers Accumulation of Cytokinins in Medicago truncatula Roots 被引量:4
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作者 Arjan van Zeijl Rik H.M. Op den Camp +7 位作者 Eva E. Deinum Tatsiana Charnikhova Henk Franssen Huub J.M. Op den Camp Harro Bouwmeester Wouter Kohlen Ton Bisseling Rene Geurts 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2015年第8期1213-1226,共14页
Legume rhizobium symbiosis is initiated upon perception of bacterial secreted lipo-chitooligosaccharides (LCOs). Perception of these signals by the plant initiates a signaling cascade that leads to nodule formation.... Legume rhizobium symbiosis is initiated upon perception of bacterial secreted lipo-chitooligosaccharides (LCOs). Perception of these signals by the plant initiates a signaling cascade that leads to nodule formation. Several studies have implicated a function for cytokinin in this process. However, whether cytokinin accu- mulation and subsequent signaling are an integral part of rhizobium LCO signaling remains elusive. Here, we show that cytokinin signaling is required for the majority of transcriptional changes induced by rhizo- bium LCOs. In addition, we demonstrate that several cytokinins accumulate in the root susceptible zone 3 h after rhizobium LCO application, including the biologically most active cytokinins, trans-zeatin and iso- pentenyl adenine. These responses are dependent on calcium- and calmodulin-dependent protein kinase (CCaMK), a key protein in rhizobial LCO-induced signaling. Analysis of the ethylene-insensitive Mtein21 Mtsickle mutant showed that LCO-induced cytokinin accumulation is negatively regulated by ethylene. Together with transcriptional induction of ethylene biosynthesis genes, it suggests a feedback loop negatively regulating LCO signaling and subsequent cytokinin accumulation. We argue that cytokinin accumulation is a key step in the pathway leading to nodule organogenesis and that this is tightly controlled by feedback loops. 展开更多
关键词 Medicago truncatula CYTOKININ ethylene RHIZOBIUM lipo-chitooligosaccharides cre1
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