局灶性脑缺血大鼠CREB1活性调节转导子的相关研究

目的探讨磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)、CREB1活性调节转导子(TORC1)和脑源性神经影响因子(BDNF)在局灶性脑缺血大鼠脑皮质中的表达规律及意义。方法用线栓法分别制作雄性SD大鼠右侧大脑中动脉闭塞(MCAO)后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72h模型,应用蛋白印迹法分别检测TORC1、BDNF和p-CREB在局灶性脑缺血皮质的蛋白表达水平,用聚合酶链反应技术检测TORC1和BDNF mRNA的相对表达水平。结果与正常组相比,TORC1的核累积和细胞表达的两个高峰为术后3 h和48 h,而p-CREB和BDNF的两个高峰分别为3 h和72 h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TORC1可能在大鼠局灶性脑缺血后48 h前参与促进了顶叶皮质神经元细胞CREB/BDNF通路的活化,对皮质神经元具有保护作用。

吗啡处理后原代培养的海马神经元CREB_1蛋白的改变

目的研究急、慢性吗啡处理后原代培养的海马神经元cAMP反应元件结合蛋白(CREB1蛋白)的改变。方法取原代培养7d的成熟海马神经元,随机分为吗啡急性作用组、纳洛酮急性戒断组、吗啡慢性作用组、纳洛酮慢性戒断组和空白对照组,每组6皿细胞。采用细胞免疫荧光染色法检测CREB1蛋白相对含量。结果吗啡急性作用组和纳洛酮急性戒断组原代培养的海马神经元内CREB1蛋白表达没有影响,而吗啡慢性作用组海马神经元内CREB1蛋白表达明显增强(P<0.01),且纳洛酮慢性戒断组免疫荧光强度进一步增加(P<0.01),但与吗啡慢性作用组比较差异无统计学意义。吗啡慢性作用组海马神经元内CREB1蛋白较吗啡急性作用组表达明显增强(P<0.01),纳洛酮慢性戒断组较急性戒断组CREB1蛋白表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论慢性、多次使用成瘾药物才引起CREB1蛋白表达增加,其机制可能是多次使用吗啡通过反复对细胞内信号转导途径的影响引起神经元细胞核CREB1蛋白的改变。

逍遥散对抑郁大鼠大脑皮层cAMP信号通路的影响

目的:观察抑郁大鼠血清前列腺素E_(2)(PGE_(2))、P物质(SP)含量和大脑皮层环磷酸腺苷(cAMP)、元件结合蛋白1(CREB1)mRNA表达水平的变化,探讨逍遥散在治疗抑郁症方面相关的分子机制。方法:将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、逍遥散组、氟西汀组。采用慢性束缚应激的方法制备抑郁大鼠模型,造模前30min给予相应药物灌胃治疗,持续21d。通过大鼠宏观表征、糖水消耗实验、旷场实验、强迫游泳实验等观察逍遥散对抑郁大鼠行为学改变的影响。实时荧光定量PCR法检测各组大鼠大脑皮层cAMP和CREB1 mRNA表达水平,酶联免疫法检测大鼠血清PCE2、SP的含量。结果:与模型组比较,逍遥散和氟西汀均可有效减轻抑郁大鼠的抑郁样行为;使得抑郁大鼠糖水消耗量与旷场实验中大鼠的直立活动次数、水平穿格数、整理毛发次数增加;缩短强迫游泳累计不动时间(P<0.01);改善抑郁大鼠大脑皮层病理结构;逍遥散和氟西汀均能提高抑郁大鼠大脑皮层cAMP、CREB1mRNA表达水平,降低血清PCE,和SP的含量(P<0.01)。结论:逍遥散对抑郁大鼠的作用效果明显,可参与调节大鼠大脑皮层cAMP信号通路而发挥抗抑郁作用。

miR-1468对延边黄牛垂体细胞生长激素分泌影响的研究

为研究血液外胞体中miRNA对延边黄牛垂体细胞中生长激素(GH)分泌的影响,本研究选择在延边黄牛和韩延牛血液外胞体中显著差异表达的miR-1468,利用实时定量PCR(qPCR)和Western blot技术,研究了miR-1468对延边黄牛垂体细胞中GH分泌水平的影响及miR-1468与靶基因之间的调控机制。结果显示,miR-1468水平的增加能显著抑制延边黄牛垂体细胞中GH mRNA和蛋白的表达(P<0.01),反之降低miR-1468水平能显著提高GH mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达。生物信息学分析和双荧光素酶报告基因系统结果显示,miR-1468靶向了环磷腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)的3′UTR;miR-1468水平的增加能够显著抑制CREB1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),反之降低miR-1468水平能显著提高CREB1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。本研究表明,miR-1468可通过调节CREB1基因的表达而调控垂体细胞GH的分泌,该结果将为研究外胞体miRNA调控动物生长发育机制提供理论依据。