醒脑静调节CREB/PGC-1α信号通路对创伤性脑损伤大鼠神经炎症的影响

目的分析醒脑静调节cAMP反应元件结合蛋白(CREB)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1-α(PGC-1α)通路对创伤性脑损伤(TBI)大鼠神经炎症的影响。方法将75只SD大鼠分为对照组、模型组、醒脑静低剂量组(0.52mL/100g)、醒脑静高剂量组(1.04mL/100g)、醒脑静高剂量组+666-15(CREB抑制剂)组(10mg/kg),每组15只,除对照组外均构建创伤性脑损伤模型,计算大鼠神经损伤严重程度评分(NSS),干湿比重法测定大鼠脑含水量,TUNEL法测定大鼠神经细胞凋亡情况,ELISA法测定大鼠脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)水平,Western blot法测定大鼠CREB/PGC-1α通路蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠NSS评分、脑含水量、神经细胞凋亡率、脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平、p-CREB/CREB、PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,醒脑静低剂量组、醒脑静高剂量组大鼠NSS评分、脑含水量、神经细胞凋亡率、脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低,脑组织p-CREB/CREB、PGC-1α蛋白表达升高(P<0.05);与醒脑静高剂量组相比,醒脑静高剂量+666-15组大鼠NSS评分、脑含水量、神经细胞凋亡率、脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6水平升高,脑组织p-CREB/CREB、PGC-1α蛋白表达降低(P<0.05)。结论醒脑静可能通过激活CREB/PGC-1α通路抑制TBI大鼠神经炎症。

优化新生脉散方调控β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 基于β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路探讨优化新生脉散方对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、卡托普利组和中药低、高剂量组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃4周。超声心动图测定大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS),测定心、肺质量并计算心、肺脏器系数,组织病理学观察心肌纤维化程度,ELISA测定血清N端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)及心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)含量,免疫组化检测心肌组织β1肾上腺素受体(β1-AR)、cAMP阳性表达,Western blot检测心肌组织β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低(P<0.01),心、肺脏器系数明显升高(P<0.01);心肌细胞数目减少、胶原容积分数升高、Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比增加(P<0.01),血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量明显升高,心肌组织cAMP含量明显降低(P<0.01),心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达明显降低(P<0.01),β1-AR、腺苷酸环化酶(AC)1、cAMP、p-蛋白激酶A(PKA)、p-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达明显降低,p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,给药组不同程度增加大鼠LVEF、LVFS,降低心、肺脏器系数;增加心肌细胞数目、减少胶原容积分数和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比,下调血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量,上调cAMP含量,增加心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达,上调β1-AR、AC1、cAMP、p-PKA、p-CREB蛋白表达,抑制p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA蛋白表达,其中中药高剂量组和卡托普利组作用更明显(P<0.01,P<0.05)。结论 优化新生脉散方能减轻心力衰竭大鼠心肌纤维化程度,改善心肌肥厚和重构,增加左心室收缩力,其机制可能与激活β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

基于TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路探讨心衰康胶囊对糖尿病大鼠心肌纤维化的改善作用

目的探究心衰康胶囊是否通过调控TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路改善糖尿病大鼠心肌纤维化。方法清洁SPF级雄性大鼠32只,随机分为对照组、模型组、心衰康胶囊组(1.0 g·kg^(-1)·d^(-1))、缬沙坦组(30 mg·kg^(-1)·d^(-1))。除对照组外,按30 mg/kg体质量腹腔注射浓度为1 mg/mL的链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病模型大鼠,对照组和模型组均0.9%氯化钠溶液灌胃。采用苏木素-伊红(HE)染色观察糖尿病大鼠心肌组织病理变化;免疫组织化学法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达水平;酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法检测大鼠TGF-β1、大鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白水平;Western Blot法检测心肌组织中TGF-β1、磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶p38抗体(p-p38MAPK)、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)蛋白表达水平的变化。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌排列紊乱,组织肿胀,有大量炎性细胞浸润,Bcl-2、p-CREB蛋白表达水平明显降低(P<0.01),TGF-β1、Caspase-3、p-p38 MAPK蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,心衰康胶囊组大鼠心肌纤维排列较整齐,炎性浸润减少,组织间隙无明显水肿,TGF-β1、p-p38 MAPK、Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01,P<0.05),p-CREB、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论心衰康胶囊可抑制糖尿病大鼠的心肌纤维化以及细胞凋亡,其改善作用可能与调控TGF-β1/p38MAPK/CREB信号通路有关。

β-乳香酸通过抑制CREB1/USP22信号通路抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究β-乳香酸对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用及可能机制。方法将口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞分为Control组、β-乳香酸组、β-乳香酸+空载体组和β-乳香酸+USP22组,CCK-8检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR检测细胞CREB1和USP22 mRNA表达,Western blot检测细胞CREB1和USP22蛋白表达。结果β-乳香酸抑制CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭,抑制CREB1和USP22mRNA和蛋白表达,过表达USP22逆转β-乳香酸对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论β-乳香酸通过抑制CREB1/USP22信号通路抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭。

基于PTPN22干扰的艾灸对实验性类风湿性关节炎家兔滑膜细胞JAK1-STAT4信号通路的影响

目的:研究艾灸对实验性类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大耳白兔滑膜组织非受体22型蛋白酪氨酸磷酸酶基因(protein tyrosine phosphatase,nonreceptor type 22,PTPN22)、JAK1及STAT4表达的影响,探索慢病毒介导的PTPN22干扰对艾灸治疗实验性RA大耳白兔滑膜细胞JAK1-STAT4信号通路的影响。方法:日本大耳白兔随机分为对照组、模型组、艾灸组、PTPN22干扰组,6只/组。将FCA按0.5 mL/kg注入模型组、艾灸组及PTPN22干扰组动物双后腿膝关节腔内造模,对照组同法注入无菌生理盐水。将慢病毒介导的PTPN22 RNAi作为干预手段,艾灸组及PTPN22干扰组动物双侧“肾俞”“足三里”穴进行小艾炷灸治疗。治疗前后测量各大耳白兔左、右膝关节周长,治疗第21天行滑膜取材,采用RT-PCR法检测滑膜组织PTPN22 mRNA、JAK1 mRNA及STAT4 mRNA表达;采用Western blot法检测滑膜组织PTPN22蛋白表达情况。结果:与对照组相比,模型组大耳白兔双膝关节周长、JAK1 mRNA及STAT4 mRNA的表达升高(P<0.05),PTPN22 mRNA及蛋白的表达降低(P<0.05);与模型组相比,艾灸组大耳白兔双膝关节周长、JAK1 mRNA及STAT4 mRNA的表达降低(P<0.05),PTPN22 mRNA及蛋白的表达升高(P<0.05);与艾灸组相比,PTPN22干扰组大耳白兔双膝关节周长、JAK1 mRNA及STAT4 mRNA的表达升高(P<0.05),PTPN22 mRNA及蛋白的表达降低(P<0.05)。结论:艾灸可能通过PTPN22途径良性调控RA中JAK-STAT通路异常激活的JAK1与STAT4基因表达水平,负向调节JAK1-STAT4信号通路而达到抗炎治疗效应,其对JAK1-STAT4信号通路的调控可能是艾灸治疗RA抗炎效应实现的途径之一。

基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨加味葛根芩连汤对糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响

目的观察加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响,基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨其治疗糖尿病胰腺损伤的作用机制。方法将50只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中、低剂量组,每组10只。另取10只m/m小鼠作为空白组。加味葛根芩连汤高、中、低剂量组分别予加味葛根芩连汤31.9、19.1、6.4 g/kg灌胃,二甲双胍组予二甲双胍0.2 g/kg灌胃,空白组和模型组予蒸馏水灌胃,连续12周。给药结束后检测小鼠空腹血糖(FBG),进行口服葡萄糖耐量试验,检测小鼠糖化血红蛋白(HbA1c)含量,TUNEL法检测胰腺组织细胞凋亡情况,RT-qPCR检测胰腺组织G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)、蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、前蛋白转化酶1/3(PC1/3)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)mRNA表达,免疫组化法检测胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达,免疫荧光染色检测胰腺组织TGR5/GLP-1、神经源性分化因子1(NeuroD1)/GLP-1共表达。结果与空白组比较,模型组小鼠FBG、HbA1c含量显著升高(P<0.01),口服葡萄糖耐量显著降低;胰腺组织细胞凋亡率显著升高(P<0.01),TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著降低(P<0.01),TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著降低(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠FBG、HbA1c含量显著降低(P<0.01,P<0.05),口服葡萄糖耐量升高(P<0.01);各给药组小鼠胰腺组织细胞凋亡率显著降低(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠胰腺组织TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著升高(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著升高(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高剂量组胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论加味葛根芩连汤可能通过激活TGR5调节PKA/CREB/GLP-1信号通路,恢复db/db小鼠胰岛功能,改善胰腺损伤。

白藜芦醇影响SIRT-1/CREB/BDNF信号通路表达的研究进展

母对白藜芦醇以及SIRT-1/CREB/BDNF信号通路进行介绍,分析现存研究中白藜芦醇与SIRT-1/CREB/BDNF信号通路之间存在的关系,进一步探讨白藜芦醇发挥神经保护作用是否与SIRT-1/CREB/BDNF信号通路有关。

氧化苦参碱对糖尿病大鼠骨代谢及CREB/CRTC1信号通路的影响

目的:探讨氧化苦参碱(OMT)对糖尿病大鼠骨代谢相关指标与CREB/CRTC1信号通路的影响。方法:40只SD大鼠分为正常对照组、糖尿病模型组、OMT低剂量组、OMT高剂量组,每组10只。糖尿病模型组和OMT低、高剂量组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)构建糖尿病模型,OMT低、高剂量组大鼠在建模结束后分别给予100、200 mg/kg OMT灌胃,每日1次且持续7 d。给药结束24 h后邻甲酚酞络合铜比色法检测尿钙和血清钙、磷含量,ELISA法测定血清Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)、骨钙素(OC)及骨特异性碱性磷酸酶(BSAP)的含量。4周后取大鼠股骨,双能X射线检测骨密度,qRT-PCR检测股骨组织中ALP、CEBP、OPG、RANKL mRNA的表达水平,HE染色观察骨组织病理形态学改变,免疫组化染色检测股骨组织中OCN蛋白的表达,Western blot检测股骨组织中p-CREB、t-CREB、CRTC1蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,糖尿病模型组和OMT低、高剂量组大鼠24 h尿量与尿钙含量升高,血清中CTX-Ⅰ、OC、BSAP的含量增加,骨密度降低,ALP、OPG mRNA表达下调,CEBP、RANKL mRNA表达上调;股骨组织中骨小梁减少、排列稀疏、断裂,OCN蛋白表达降低,p-CREB和CRTC1的蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与糖尿病模型组比较,OMT低、高剂量组血清中CTX-Ⅰ、OC、BSAP的含量降低,骨密度增加,ALP mRNA表达上调,CEBP、RANKL mRNA表达下调;股骨组织中骨小梁有所增加、排列与连续性较好,OCN蛋白表达升高;OMT高剂量组p-CREB和CRTC1的蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。与OMT低剂量组比较,OMT高剂量组OPG mRNA表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:氧化苦参碱可以促进糖尿病大鼠骨形成,并有效抑制骨吸收,其作用可能与抑制CREB/CRTC1信号活化有关。

下调IGF-1通过CREB信号通路失活间接加重大鼠脑缺血损伤

目的探讨MEK/ERK/CREB信号通路是否介导IGF-1在大鼠脑缺血中的调控作用。方法成年雄性SD大鼠使用MACO线栓法建立永久性局灶性脑缺血模型,进行m NSS神经功能缺损评分,脑缺血48 h时进行TTC染色观察脑梗死情况、末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,并利用实时荧光定量PCR和Western blot检测缺血同侧大脑皮质内IGF-1及下游信号分子MEK、ERK1/2和CREB的mRNA和蛋白表达变化,及其磷酸化水平的变化情况。结果脑缺血组大鼠m NSS评分、细胞凋亡百分比均明显高于假手术组,缺血大脑皮质内IGF-1表达下调,MEK、ERK1/2和CREB的基因水平下降,MEK、ERK1/2的蛋白水平及其磷酸化蛋白水平均明显降低。结论本实验结果表明永久性局灶性脑缺血早期大鼠皮质内下调的IGF-1,可以通过负调控MEK/ERK/CREB促存活信号通路,间接加重大鼠脑缺血性损伤。

低氧预处理通过调控PKA/CREB及JAK1/STATA3信号通路减轻低氧暴露力竭运动小鼠心肌损伤

目的建立低氧暴露力竭运动小鼠模型,探究低氧预处理(HPC)减轻低氧暴露力竭运动小鼠心肌损伤的分子学机制。方法40只小鼠随机分为对照组(Con组)、模型组(MG组)、低氧预适应1组(HP1组)及低氧预适应2组(HP2组),采用低氧干预+力竭游泳实验建立低氧暴露运动模型。MG组小鼠进行低氧条件下力竭游泳实验建模,HP1组低氧力竭游泳造模前给予低氧预适应刺激,HP2组造模同时给予重复低氧预适应刺激,连续8周。末次实验后小鼠取血及心肌组织,ELISA法检测血清谷丙转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,实时定量PCR和Western Blot技术检测心肌组织HIF-1αmRNA表达及PRKACA/B、CREB1、JAK1、STATA3蛋白表达。结果与Con组比较,MG组小鼠生长速率及力竭游泳时间显著降低(P<0.05),血清AST、LDH、CK水平显著上升(P<0.05),MDA含量下降(P<0.05),SOD含量上升(P<0.05),心肌HIF-1αmRNA表达升高(P<0.05),JAK1、STAT3、PRKACA/B及CREB1蛋白表达均显著下降(P<0.05)。与MG组比较,HP1组及HP2组小鼠生长速率及力竭游泳时间显著升高(P<0.05),血清AST、LDH、CK水平下降(P<0.05)。HP1、HP2组心肌组织PRKACA/B、CREB1、JAK1、STATA3蛋白表达水平显著高于MG组(P<0.05),HIF-1αmRNA表达显著低于MG组(P<0.05)。结论低氧预处理可能通过上调PKA/CREB及JAK1/STATA3信号通路相关组分蛋白,并下调心肌组织HIF-1αmRNA表达水平,以促进低氧暴露力竭运动小鼠心肌损伤的恢复进程。

七氟醚预处理对老年大鼠认知功能及海马区Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达影响

目的探讨常用吸入麻醉药物七氟醚对老年大鼠相关认知功能影响及其对海马区Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达影响。方法30只20月龄的老年雄性wister大鼠,随机分为3组:对照组(C组n=10),七氟醚1组(S1组n=10),和七氟醚2组(S2组n=10),老年雄性wister大鼠放置一密闭麻醉箱中,该麻醉箱放置于预设温度为35℃度的水浴箱中。麻醉箱进气口与装有七氟醚气体挥发罐的麻醉机连接,出气口接延长管置于通风厨,S1组大鼠用1.5%七氟醚麻醉2h,S2组大鼠用3.0%七氟醚麻醉2h,C组大鼠暴露于纯氧中2h。麻醉气体由纯氧通过麻醉机输送通过该麻醉箱,实验中使用麻醉气体监测仪监测麻醉箱出气口的麻醉气体浓度。在麻醉过程中每隔30 min监测大鼠肤色,并记录呼吸频率。对照组在手术后第一天处死,七氟醚组分别于处理后第2天各断头处死10只,冰盘上快速取海马,Western Blot法测定海马区BDNF、CREB及Erk1/2相关表达,并分别在处死前2小时进行水迷宫实验,并判断其记忆认知相关行为是否产生了改变。结果试验组吸入低浓度1.5%七氟醚老年雄性wister大鼠试验后认知记忆功能不如对照组,试验组Western Blot法测定海马BDNF、CREB及Erk1/2相关表达均低于对照组,实验组组间比较浓度越高该信号通路表达活性越低。七氟醚预处理后吸入低浓度1.5%七氟醚后老年雄性wister大鼠认知功能减退,其机制可能与Erk1/2/CREB/BDNF信号通路表达有关,高浓度组(吸入低浓度3%七氟醚)影响情况较低浓度组显著。S1组、S2组麻醉后潜伏期均较麻醉前及C组麻醉后明显延长(P<0.05),S2组麻醉后潜伏期较S1组延长更为显著(P<0.05);S1及S2组大鼠120S内穿越原平台区域进入次数麻醉后显著低于麻醉前及C组,组间比较S2组<S1组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论七氟醚可通过调节Erk1/2/CREB/BDNF信号通路的分子机制上对大鼠行为记忆认知功能产生影响从而加重老年大鼠认知功能障碍。

虾青素预处理通过调控Sirt1/miR-134信号通路改善脑缺血再灌注大鼠认知功能

目的:探究虾青素(ATX)预处理是否通过调控沉默信息调节因子1(Sirt1)/微小RNA-134(miR-134)信号通路影响脑缺血再灌注(CI/R)大鼠认知功能。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(CI/R组)、ATX低剂量(50 mg/kg)组(ATX-L组)、ATX高剂量(100 mg/kg)组(ATX-H组)和ATX(100 mg/kg)+Sirt1抑制剂EX527(10 mg/kg)组(ATX+EX527组),每组12只。分组完成后给予相应的药物进行预处理,每天1次,连续3 d。末次给药1 h后,建立CI/R大鼠模型。再灌注24 h后对大鼠进行神经功能缺损评分,并采用Morris水迷宫实验检测大鼠的认知功能;HE染色观察海马神经元损伤;TUNEL染色检测海马神经元凋亡;免疫组化法检测海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)的表达;RT-qPCR检测海马组织miR-134水平及Sirt1、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和BDNF mRNA表达;Western blot检测海马组织Sirt1、CREB和BDNF蛋白表达。结果:与sham组相比,CI/R组大鼠神经功能缺损评分、海马神经元凋亡率、miR-134水平和逃避潜伏期均增加,空间探索实验中在目标象限停留时间和穿越平台次数、Sirt1和BDNF的mRNA和蛋白表达、CREB的mRNA表达及p-CREB/CREB比值降低(P<0.05),海马神经元数量减少;与CI/R组相比,ATX-L组和ATX-H组大鼠神经功能缺损评分、海马神经元凋亡率、miR-134水平和逃避潜伏期均降低(P<0.05),在目标象限停留时间和穿越平台次数、Sirt1和BDNF的mRNA和蛋白表达、CREB的mRNA表达及p-CREB/CREB比值升高(P<0.05),海马神经元数量增加;在ATX干预的基础上使用EX527可明显上调miR-134的表达,减弱ATX对CI/R后大鼠认知功能的改善作用和对CREB/BDNF信号通路的激活作用。结论:ATX预处理可能通过调控Sirt1/miR-134信号通路,激活CREB/BDNF信号通路,进而改善CI/R后大鼠的认知功能。

Notch信号通路在小鼠肝癌细胞H22增殖凋亡中的作用及意义

目的观察Notch信号通路在小鼠肝癌细胞H22增殖和凋亡中的作用,并探讨其可能的机制。方法培养小鼠肝癌细胞株H22,将细胞随机分为A、B、C组,分别加入Notch信号激活剂rhNF-κB、抑制剂DAPT及PBS共培养48 h。用MTT法检测细胞吸光度值(A值)观察细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,应用免疫组化法检测各相关处理过的细胞株,RT-PCR、Western blotting法分别检测H22细胞中的Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白。结果培养24、48、72、96 h后,A、B组与C组比较,细胞增殖差异明显(P均<0.05)。A、B、C组细胞凋亡率分别为25.52%±2.13%、0.91%±0.18%、8.91%±1.50%,A、B组与C组比较差异明显(P均<0.05)。与C组比较,A组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著增加(P均<0.05),B组细胞中Notch1、Hes1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量均显著降低(P均<0.05)。结论 Notch1信号通路在抑制小鼠肝癌细胞株H22增殖、促进其凋亡中发挥了重要的调控作用,其机制可能与调节靶基因Hesl、Bcl-2表达有关。

USP22调控肿瘤中信号转导通路的研究进展

USP22作为肿瘤干细胞标志物之一,在几种类型的人类癌症中已被观察到,这表明USP22可能参与各种生理和病理过程,并作为致癌基因在癌症进展中起作用。然而,导致USP22转录激活的机制,特别是USP22介导人类肿瘤进展的机制,至今仍然未知。前期研究表明USP22主要通过调节正常T细胞和B细胞中丝裂原的激活诱导肿瘤发生。而最新研究发现,仅USP22过表达不足以诱导肿瘤发生,USP22是通过肿瘤相关信号通路的激活参与肿瘤进展的,该理论的出现为肿瘤机制的研究提出了新见解,也为USP22介导肿瘤治疗耐药性提供了新思路。该文对USP22参与肿瘤进展的相关信号通路进行概述和总结,以期发现USP22介导肿瘤发生发展的分子机制及不同信号通路之间的串扰对肿瘤进展的影响,为癌症治疗提供新思路。

基于PGC-1α-Sirt3通路探讨九龙藤总黄酮对氧糖剥夺诱导HT22细胞损伤的保护作用

目的:基于PGC-1α-Sirt3信号通路探讨九龙藤总黄酮(BCF)对氧糖剥夺(OGD)诱导小鼠海马神经元(HT22)细胞损伤的保护作用。方法:25,50,100,200,400,600μg·ml^-1的BCF预处理HT22细胞24 h后,OGD诱导HT22细胞损伤12 h,MTT法检测HT22细胞存活率,筛选BCF作用OGD诱导HT22细胞的最佳浓度。HT22细胞分为空白对照组、OGD组、OGD+BCF(200μg·ml^-1)组、OGD+BCF(200μg·ml^-1)组+过氧化物酶体增殖物受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)抑制剂(SR-18292)组、OGD+SR-18292组。TUNEL法检测HT22细胞凋亡,试剂盒检测HT22细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,Rt-PCR和Western Blot分别检测HT22细胞PGC-1α、沉默信息调节因子3(Sirt3)mRNA和蛋白表达。结果:200μg·ml-1的BCF作用OGD诱导的HT22细胞存活率最大。OGD诱导后,HT22细胞凋亡指数、LDH漏出量和MDA含量升高(P<0.05),SOD和GSH-Px活力、PGC-1α和Sirt3 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。BCF作用后,OGD诱导的HT22细胞凋亡指数、LDH漏出量和MDA含量降低(P<0.05),SOD和GSH-Px活力、PGC-1α和Sirt3 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05)。而加入PGC-1α抑制剂SR-18292后,BCF对OGD损伤的HT22细胞各项检测指标均无显著影响(P>0.05)。结论:BCF通过激活PGC-1α-Sirt3信号通路发挥对OGD诱导损伤的HT22细胞的保护作用。

滋肾疏肝方对围绝经期抑郁模型小鼠的作用及机制

目的探讨滋肾疏肝方对围绝经期抑郁(PDD)模型小鼠的作用及其机制。方法采用卵巢切除法和慢性不可预见性刺激建立PDD小鼠模型。48只小鼠随机分为假手术组,模型组,滋肾疏肝方低、中、高浓度组和阳性对照组,每组8只;低、中、高浓度组分别给予0.38、0.76、1.52 g/mL滋肾疏肝方灌胃,阳性对照组给予0.21 g/mL盐酸氟西汀合戊酸雌二醇混悬液灌胃。通过强迫游泳实验、悬尾实验和旷场实验检测PDD小鼠行为学变化;Nissl染色观察PDD小鼠海马神经元的组织学变化;分别采用qRT-PCR及Western blot实验检测各组小鼠海马神经元脑源性神经营养因子(BDNF)、钙调神经磷酸酶(Calcineurin)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和CREB调节的转录共激活因子1(CRTC1)基因及蛋白表达;ELISA检测各组小鼠海马组织5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)水平。结果PDD模型小鼠增加强迫游泳实验(FST)和悬尾实验(TST)的不动时间,损伤小鼠海马神经元,抑制BDNF、Calcineurin、CREB和CRTC1的表达,增强盐诱导激酶2(SIK2)和p-TRTC1的表达,降低5-HT、DA和NE的水平;而滋肾疏肝方可逆转PDD建模的影响,尤其以中、高浓度组效果显著。结论滋肾疏肝方可通过CRTC1/CREB/BDNF信号通路,增加单胺类神经递质5-HT、DA、NE的表达,从而修复PDD小鼠海马神经元损伤,发挥抗抑郁作用,为滋肾疏肝方在PDD临床治疗中的应用提供了科学依据,为中医药治疗PDD提供新思路。

马凡综合征患者胸主动脉夹层发病机制研究进展

马凡综合征(MFS)是一种常染色体遗传性结缔组织疾病,可以发生胸主动脉夹层等严重的心血管系统病变,发生胸主动脉夹层后需行胸主动脉人工血管置换术,但围手术期病死率高,深入研究MFS患者胸主动脉夹层发病机制具有重要意义。MFS患者发生胸主动脉夹层与原纤维蛋白-1(FBN1)、转化生长因子β受体1(TGFBR1)、转化生长因子β受体2(TGFBR2)基因突变及整合素α9(ITGA9)、肌动蛋白结合蛋白(SM22α)基因低表达和转化生长因子β(TGF-β)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)信号转导通路调节异常有关。FBN1基因突变是MFS(1型)患者发生胸主动脉夹层主要的机制之一,当FBN1基因突变时,蛋白质结构异常导致微纤维功能障碍,无法维持胸主动脉壁中膜弹力蛋白的稳定,胸主动脉血管壁中膜的弹性纤维断裂,胸主动脉壁中膜回弹能力下降,在受到异常的血流冲击后,出现局部血管管腔持续膨出,形成胸主动脉瘤,当胸主动脉内膜出现撕裂口,血液从撕裂口处流入内膜和中膜之间,形成胸主动脉夹层。TGFBR1和TGFBR2是TGF-β的信息传递分子,该基因突变诱导血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡,数量减少,促进MFS发生胸主动脉夹层。ITGA9基因低表达,诱导VSMC从收缩表型转化为合成表型,胶原纤维降解,导致细胞与细胞之间的黏附能力下降,也导致细胞与胞外基质之间的黏附能为下降,胸主动脉壁中膜无法抵抗异常血流的切应力。SM22α基因是一种VSMC表型标志基因,其甲基化修饰导致低表达,诱导VSMC发生表型转化,参与细胞外基质重塑,血管壁中膜弹性下降,促进胸主动脉壁中膜退行性病变。TGF-β、AngⅡ信号转导通路参与VSMC的增殖、分化、调亡生理功能的调节,也参与血管性疾病的发生;在小鼠胚胎期阻断此信号转导通路,可以引起小鼠主动脉壁中膜层弹力纤维合成受损,最终形成胸主动脉瘤/胸主动脉夹层。

化合物DXL-A-22抗神经病理性疼痛作用及机制研究

目的研究螺环哌嗪季铵盐化合物DXL-A-22抗神经病理性疼痛作用及机制。方法以坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)模型评价DXL-A-22的抗神经病理性疼痛作用;Westernblot和qPCR技术研究DXL-A-22的作用机制;极限实验评价DXL-A-22的急性毒性。结果与溶媒组比较,DXL-A-22(2、1、0.5mg·kg^-1,i.g.)剂量依赖性提高CCI大鼠机械刺激缩足反应阈值和热刺激缩足潜伏期(P<0.05,P<0.01),术后d7痛阈提高率分别为108%、86%和71%,最大镇痛百分率分别为77%、56%和43%;DXL-A-22(2mg·kg^-1)明显降低背根神经节(DRG)p-CaMKⅡα、p-CREB,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达,以及TNF-α、c-FosmRNA表达(P<0.05,P<0.01),抑制率分别为37%、48%、35%、58%、39%和32%;明显降低脊髓TNF-α、c-FosmRNA表达(P<0.01),抑制率分别为47%和72%;无明显毒性反应。结论螺环哌嗪季铵盐化合物DXL-A-22能明显抑制大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤引起的神经病理性疼痛,无明显毒性,其机制可能与抑制DRGCaMKⅡα/CREB和JAK2/STAT3信号通路,降低DRG及脊髓TNF-α、c-FosmRNA表达相关。

归脾汤对慢性睡眠剥夺大鼠海马PP1/CREB信号通路的影响

目的:观察归脾汤(GPD)对慢性睡眠剥夺模型大鼠多巴胺D2受体(D2R)及蛋白磷酸酶1(PP1)/环磷腺苷应答元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法:48只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,艾司唑仑(0.009 mg/mL)组,GPD高、中、低剂量(1.86、0.93、0.47 g/mL)组,每组8只。除正常组外均采用改良多平台水环境法建立慢性睡眠剥夺模型,周期21 d。造模第15天开始,各治疗组连续灌胃给药7 d,观察大鼠一般状态,采用RT-PCR、Western Blot法检测各组D2R及PP1、CREB mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组比较,大鼠造模后出现昼夜节律紊乱,精神倦怠,毛发枯燥,反应迟钝,海马D2R mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),PP1、CREB mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,艾司唑仑组与GPD各剂量组大鼠昼夜节律紊乱和精神状况相对改善,毛发相对润泽,反应相对灵敏;GPD中剂量组D2R mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),GPD中、低剂量组PP1 mRNA和蛋白显著升高(P<0.05,P<0.01),GPD中剂量组CREB蛋白表达升高(P<0.01)。结论:GPD具有较好改善慢性睡眠剥夺模型大鼠睡眠的作用,其机制可能与下调海马D2R表达,调控PP1/CREB信号通路有关。

氟中毒对大鼠脑组织Ras-Erk1/2通路及转录因子CREB的影响

目的研究慢性氟中毒大鼠脑组织中细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular signal regulated kinases,Ras-Erk1/2)通路主要激酶表达变化及其对转录因子环一磷酸腺苷反应单元结合蛋白(cAMP Responsive Element Binding Protein,CREB)的影响。方法 SD(Sprague dawley)大鼠随机分为3组,即正常组、饮水中小剂量加氟(5 mg/L)组、大剂量加氟(50 mg/L)组,实验期为6个月。实验结束时,用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及血氟含量,尼氏染色检查神经细胞尼氏小体改变,蛋白印迹(Western-blotting)方法检测脑组织中小鸟苷三磷酸结合蛋白(small GTP-binding protein,Ras)、Erk1/2、CREB信号转导激酶的蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time Polymerase Chain Reaction,Re-al-time PCR)方法检测c-fos基因mRNA表达水平。结果与对照组相比,染氟组大鼠有不同程度的氟斑牙及血氟尿氟升高;大脑皮质和海马部位神经细胞尼氏小体减少;脑组织中Ras、phospho-Erk1/2t、otal-Erk1/2及phospho-CREB蛋白表达水平上升(F值分别为19.9、114.59、4.6 9、7.6,P<0.05),以大剂量染氟组尤为明显t,otal-CREB在各组间未见明显改变;大剂量染氟组c-fos基因mRNA表达明显升高,而小剂量染氟组该基因mRNA表达降低。结论过多的氟可引起大鼠脑组织神经细胞损伤,脑组织中Ras-Erk1/2信号激酶通路过度激活可刺激转录因子CREB磷酸化,从而影响c-fos基因的表达,该过程可能参与慢性氟中毒脑损伤机制。