CRELD1基因在汉族先天性房室隔缺损患儿中的突变分析

目的探讨CRELD1基因突变在房室间隔缺损(AVSD)发病机制中的作用。方法收集67例汉族AVSD患儿(包括合并21三体综合征10例)血液标本,PCR方法扩增CRELD1基因全部11个外显子编码序列后,对扩增产物进行测序,然后与GenBank人CRELD1基因编码序列进行比对,并以100名健康汉族人群为对照。结果在67例患儿中检出1例错义突变(碱基变化为G973A,氨基酸改变为E325K),为部分型AVSD伴21三体综合征的男性患儿;7例患儿发现基因多态性(rs 2302787,碱基变化C383G,氨基酸改变P128R);24例患儿发现基因多态性(rs 3774207,碱基变化C1119T,氨基酸编码H373H)。结论合并21三体综合征的AVSD患儿中,CRELD1基因突变的检出率(1/10例,10%)高于非综合征、散发的AVSD人群(0/57例,0%),但这一结论尚有待于更多的病例数证实;AVSD患儿中,CRELD1基因突变的检出率不高,提示AVSD可能是一个多基因的遗传性疾病。

CRELD1基因在汉族完全型房室间隔缺损患儿心肌组织表达情况的初步分析

目的探讨CRELD1基因在完全型房室间隔缺损(CAVSD)患儿心肌组织中的表达情况。方法实验组选取CAVSD患儿5例,平均年龄1.2岁;对照组选取室间隔缺损(VSD)患儿5例,平均年龄1.9岁。患儿手术过程中剪取右心房适量心肌组织,应用基因芯片技术对两组标本CRELD1基因表达进行检测,比较两者差异。结果 CRELD1基因在两组病例的表达差异无统计学意义。结论 CRELD1基因在CAVSD与VSD患儿心肌组织中表达情况近似,提示CRELD1基因可能与多种先心病相关,或者CAVSD可能是一种多基因的遗传性疾病。

CRELD1基因过表达对心脏瓣膜相关基质蛋白的影响

目的探讨CRELD1基因过表达对心脏瓣膜相关基质蛋白的影响。方法采用PCR技术获得CRELD1基因,利用质粒pcDNA3.1(-)构建目的基因的真核表达载体,酶切及DNA测序鉴定。利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染人胚肺成纤维细胞株(HFL-I)(重组质粒组),以空载体转染细胞和未转染细胞分别作为转染对照组和空白对照组。采用Real-TimePCR技术和Western blotting方法检测细胞中心脏瓣膜基质蛋白Tenascin-C和Aggrecan的mRNA和蛋白相对表达量。结果重组质粒测序鉴定结果与GenBank数据库比对序列一致。重组质粒组HFL-I中Aggrecan的mRNA和蛋白相对表达量均显著低于转染对照组和空白对照组(P<0.05);各组HFL-I中Tenascin-C的mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CRELD1基因过表达时可以下调人胚肺成纤维细胞中心脏瓣膜基质蛋白Aggrecan的表达量,为阐明CRELD1基因在房室间隔缺损中的作用提供了一定的理论基础。

CRELD1基因多态性与新疆维吾尔族先天性心脏病相关性研究

目的研究CRELD1基因单核苷酸多态性与新疆维吾尔族先天性心脏病的关系。方法选择112例新疆维吾尔族先天性心脏病患者和112例年龄、性别匹配的对照者。选择CRELD1基因的6个SNPs(rs3894571、rs3846167、rs2302785、rs279552、rs17050660、rs279551),应用TaqMan SNP基因分型的方法进行基因分型,分析CRELD1基因单核苷酸多态性与新疆维吾尔族先天性心脏病的相关性。结果患者年龄和性别在入选样本时进行了匹配,所以在分析时进行了剔除。对先心病患者母亲的年龄、文化程度、忧虑情绪、饮食状况等基本情况进行单因素分析,结果显示年龄、文化程度、忧虑情绪、饮食状况等因素与先心病发生有关联。病例组与对照组CC、CT及TT基因型频率分别为74.35%、22.28%、3.37%和83.03%、16.07%、0.90%,两组比较无统计学差异(χ2=5.488,P>0.05)。两组均以CC型为主,等位基因以C占优势,病例组TT基因型频率高于对照组,但是差异无统计学意义(P>0.05),而CT、CT+TT基因型频率和携带T等位基因频率高于对照组,有统计学意义(P<0.05)。应用Logistic回归分析先心病主要相关因素:母亲年龄、文化程度、忧虑情绪、饮食状况对结果的影响,rs3894571 CT、CT+TT、CT、等位基因T因素进入回归方程。结论 CRELD1基因核苷酸多态性与新疆维吾尔族先天性心脏病有相关性。

CRELD1基因在房室间隔缺损发病机制中的作用

目的探讨先天性房室间隔缺损患者CRELD1基因的突变及其功能意义。方法应用PCR法扩增66例房室间隔缺损患者CRELD1基因的全部11个外显子及两侧各50个碱基以上的序列并进行DNA测序。构建含有突变位点的真核表达载体peDNA3．1-CRELD1。采用Western印迹及实时荧光定量逆转录一PCR检测CRELD1、Tenascin-C和Aggrecan的蛋白及mRNA表达水平。结果1例部分性房室间隔缺损患者C857G碱基变化，使位于第8外显子上第一钙结合EGF区域286位点精氨酸被脯氨酸替代（P286R）。Western印迹和实时荧光定量逆转录-PCR检测结果显示，CRELD1基因P286R突变后表达增强。与空载对照相比，野生型和突变型Aggrecan的mRNA表达均下调（t值分别为140．27，26．36，P〈0．01），但突变型与野生型之间的Aggrecan表达差异存在统计学意义，突变型下调更为明显（t=-25．69，P=0．002）。Tenascin-C在野生型和空载组的表达差异无统计学意义（t=1．167，P〉0．05），但突变型的Tenascin-C表达明显增强（t=6．66，P=0．022）。结论CRELD1基因错义突变是房室间隔缺损发病的高风险易感因素。P286R突变可使基因功能增强，并影响细胞外基质蛋白Aggrecan和Tenascin-C的表达水平，与房室间隔缺陷发病有密切关系。

CRELD1基因在房室间隔缺损中的研究进展

先天性心脏病是一系列对心功能产生实际或潜在影响的先天性畸形,其发病率在活产婴儿.中可达4‰～12‰.房室间隔缺损（AVSD）是一种累及房室瓣和间隔的常见先天性心脏病,包括完全性AVSD到二尖瓣裂缺等一系列类型.AVSD常见于21-三体综合征.遗传和环境因素共同作用于心脏发育的不同环节导致心内膜垫的发育缺陷从而出现不同类型的AVSD.CRELD1是第一个明确的、与AVSD发病相关的基因,关于它的研究对揭示AVSD发病机制及防治有重要意义.

CRELD1基因表达量对心内膜垫发育中相关基因的影响

目的探讨CRELD1基因表达量的改变对心内膜垫发育中相关基因的影响。方法通过慢病毒载体的构建实现CRELD1基因的过表达及沉默，然后用慢病毒载体感染人胚胎肺成纤维细胞（HFL-I），实验分为5组：空白对照组、干扰阴性对照（NC）组、干扰组、过表达NC组及过表达组。感染成功后，分别用实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot检测CRELD1、Sox9、Aggrecan和Scleraxis、Tenascin-C的mRNA和蛋白表达。结果通过测序表明干扰载体pLV3-shRNA-CRELD1和过表达载体pLV4-CRELD1构建成功。感染慢病毒的HFL-I在荧光倒置显微镜下观察，满视野呈现明显的绿色荧光，表明感染成功。qPCR和Western blot的检测结果一致：Sox9和Aggrecan的表达量在干扰组明显高于干扰NC组，在过表达组低于过表达NC组。而Scleraxis干扰组和过表达组均高于各自的NC组。Tenascin-C的表达量在干扰组明显低于干扰NC组，在过表达组高于过表达NC组。结论CRELD1基因对心内膜垫发育中的相关基因Sox9和Aggrecan的表达量有负调节作用，对Tenascin-C的表达量有正调节作用。这对于阐明其在房室间隔缺损中的作用提供一定的理论基础。

基因突变在先天性心脏病发病中的作用研究进展

先天性心脏病是我国最常见的出生缺陷,其发病机制与多种因素有关,与遗传机制密切相关。越来越多的研究证实单个或多个基因突变可导致先天性心脏病的发生,涉及的基因包括NKX2.5、GATA4、TBX5、TBX1、NOTCH1、CRELD1、TFAP2B基因,这些基因的突变导致房间隔缺损、室间隔缺损、法洛四联症、大动脉转位、三尖瓣闭锁、三尖瓣下移畸形、右室双出口、动脉导管未闭、房室间隔缺损、单心室等先天性心脏病发生。

先天性房室间隔缺损的遗传学进展

先天性房室间隔缺损（atrioventricular septal defect，AVSD）是一种常见的心血管畸形，由于存在房室间隔（房间隔下部、窒间隔上部）以及中央心内膜垫组织的缺损，造成左右心腔之间的异常交通。虽然AVSD的胚胎学、病理生理学以及诊断和治疗目前都已基本阐明，但其确切的发病机制仍无突破性进展。随着分子生物学技术的广泛应用以及分子遗传学研究的深入开展，AVSD在遗传学的研究中取得一系列新进展，一些基因被证实与AVSD的发生发展存在一定的相关性。