大鼠CRIP2蛋白的表达和分离纯化

目的:获得大鼠crip2基因片段,并在大肠杆菌中表达、纯化大鼠CRIP2(cysteine-rich intestinal protein 2)蛋白。方法:从大鼠主动脉组织中提取总DNA,RT-PCR扩增出相应大小的crip2 DNA片段,与pGEM-T-easy载体连接后测序;将测序正确的crip2按照BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆入原核表达载体pRSET A,将连接产物转化大肠杆菌BL21,挑出阳性克隆,IPTG诱导表达重组的6×His融合蛋白,通过镍柱进行纯化。结果:PCR获得的crip2序列与GenBank报道的一致(为707 bp);重组融合蛋白在大肠杆菌BL21中以可溶形式高效表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析,在相对分子质量为27×103处有特异的蛋白条带,经镍柱纯化后,得到了高纯度的CRIP2融合蛋白。结论:克隆了大鼠crip2基因片段,并在大肠杆菌BL21中高效表达,亲和层析纯化后获得高纯度的CRIP2融合蛋白。

多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖及缺氧耐受的影响

为了观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖和缺氧耐受的影响,体外培养H9C2心肌细胞后,将其分为对照组和多肽组,对照组只使用10%的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)和胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)处理,多肽组在对照组处理的基础上分别加入浓度为10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L的多肽K-YFAE,7 d后对各组细胞分别行CCK-8检测、细胞周期的流式细胞术检测、细胞周期相关基因的qPCR检测等,以观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖的影响;用三气培养箱对细胞行缺氧处理后分组,并分别行细胞凋亡的TUNEL检测和流式细胞术检测,以及细胞凋亡相关基因的qPCR检测等,以观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞缺氧耐受的影响。结果显示:与对照组比较, K-YFAE的干预可促进H9C2心肌细胞进入增殖期,并且减少其凋亡。实验结果初步表明,多肽K-YFAE既可以促进H9C2心肌细胞增殖,又可以增加其缺氧耐受。