MYB类蛋白家族是所有真核生物中存在的庞大且功能丰富的一类转录因子,MYB蛋白主要参与形态建成、次生代谢等进而参与植物的非生物胁迫。文章通过比对美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据...MYB类蛋白家族是所有真核生物中存在的庞大且功能丰富的一类转录因子,MYB蛋白主要参与形态建成、次生代谢等进而参与植物的非生物胁迫。文章通过比对美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库,在番茄中发现了一个具有EAR转录抑制子的R1-MYB类转录因子,即SlMYBL,通过同源克隆获得SlMYBL基因的全长cDNA。SlMYBL基因在番茄的所有组织中均有表达,在果实中的表达量相对较高,其次是根和叶片。有研究表明R1-MYB类转录因子可参与植株的逆境应答,为了解SlMYBL是否响应逆境应答,文章定量分析了番茄在不同胁迫处理下SlMYBL基因的转录水平,发现其转录水平在盐胁迫下明显降低,而对甘露醇胁迫并没有明显的差异,表明SlMYBL基因可能参与了番茄植株响应盐胁迫的过程。为研究SlMYBL基因作用的分子机理,进一步构建了该基因的CRISPR表达载体,并获得SlMYBL基因的CRISPR敲除转基因番茄。该研究为发现SlMYBL基因在植物生长发育中的作用奠定了一定的理论基础。展开更多
成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)技术目前广泛应用于生命医学领域的基础研究及临床应用研究。由于载体在CRISPR/Cas9...成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)技术目前广泛应用于生命医学领域的基础研究及临床应用研究。由于载体在CRISPR/Cas9技术中发挥了重要的作用,如何进一步开发和优化载体系统具有重要的意义。传统的载体大多以病毒载体为主,其递送的效率高,但亦存在插入片段的大小有限、免疫反应、致癌、难以大规模生产甚至脱靶等缺陷;而非病毒纳米载体在一定程度上可解决基因编辑过程中由病毒载体所带来的潜在毒性和容量限制等问题,可能具有更广阔的应用前景。本文主要综述了目前用于CRISPR/Cas9系统递送的非病毒纳米载体,探讨了非病毒纳米载体在递送CRISPR/Cas9系统时可能遇到的主要困难,提出了相应的解决方案和策略,以期为基因治疗和药物研发提供新的参考依据。展开更多
我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因...我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因,然而目前在家猪BMP15基因中尚未发现类似绵羊多胎品系的天然突变。基于高等哺乳动物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因组编辑技术对动物基因组定点修饰的高效性,应用CRISPR/Cas9技术对家猪BMP15基因进行精确的遗传修饰,使家猪获得类似多胎绵羊的天然突变,对于研究该基因对家猪繁殖力的影响以及培育高繁殖力家猪新品系具有重要的意义。本研究通过CRISPR/Cas9对长白猪胎儿成纤维(porcine embryonic fibroblasts,PEF)细胞中BMP15基因进行打靶,T7E1分析显示打靶效率仅有5%。随后通过共转染RGS双荧光替代性报告载体(RFP-GFP surrogate reporter),并应用流式细胞术分选出双荧光细胞,富集到基因组被CRISPR/Cas9修饰的细胞,使基因打靶效率提高至18%。本研究结果表明,应用RGS双荧光替代性报告载体可以有效提高CRISPR/Cas9在PEF细胞中对BMP15基因的打靶效率,为今后通过体细胞核移植技术培育BMP15基因编辑猪进行了有效的探索。展开更多
文摘MYB类蛋白家族是所有真核生物中存在的庞大且功能丰富的一类转录因子,MYB蛋白主要参与形态建成、次生代谢等进而参与植物的非生物胁迫。文章通过比对美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)数据库,在番茄中发现了一个具有EAR转录抑制子的R1-MYB类转录因子,即SlMYBL,通过同源克隆获得SlMYBL基因的全长cDNA。SlMYBL基因在番茄的所有组织中均有表达,在果实中的表达量相对较高,其次是根和叶片。有研究表明R1-MYB类转录因子可参与植株的逆境应答,为了解SlMYBL是否响应逆境应答,文章定量分析了番茄在不同胁迫处理下SlMYBL基因的转录水平,发现其转录水平在盐胁迫下明显降低,而对甘露醇胁迫并没有明显的差异,表明SlMYBL基因可能参与了番茄植株响应盐胁迫的过程。为研究SlMYBL基因作用的分子机理,进一步构建了该基因的CRISPR表达载体,并获得SlMYBL基因的CRISPR敲除转基因番茄。该研究为发现SlMYBL基因在植物生长发育中的作用奠定了一定的理论基础。
文摘成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9)技术目前广泛应用于生命医学领域的基础研究及临床应用研究。由于载体在CRISPR/Cas9技术中发挥了重要的作用,如何进一步开发和优化载体系统具有重要的意义。传统的载体大多以病毒载体为主,其递送的效率高,但亦存在插入片段的大小有限、免疫反应、致癌、难以大规模生产甚至脱靶等缺陷;而非病毒纳米载体在一定程度上可解决基因编辑过程中由病毒载体所带来的潜在毒性和容量限制等问题,可能具有更广阔的应用前景。本文主要综述了目前用于CRISPR/Cas9系统递送的非病毒纳米载体,探讨了非病毒纳米载体在递送CRISPR/Cas9系统时可能遇到的主要困难,提出了相应的解决方案和策略,以期为基因治疗和药物研发提供新的参考依据。
文摘我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因,然而目前在家猪BMP15基因中尚未发现类似绵羊多胎品系的天然突变。基于高等哺乳动物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因组编辑技术对动物基因组定点修饰的高效性,应用CRISPR/Cas9技术对家猪BMP15基因进行精确的遗传修饰,使家猪获得类似多胎绵羊的天然突变,对于研究该基因对家猪繁殖力的影响以及培育高繁殖力家猪新品系具有重要的意义。本研究通过CRISPR/Cas9对长白猪胎儿成纤维(porcine embryonic fibroblasts,PEF)细胞中BMP15基因进行打靶,T7E1分析显示打靶效率仅有5%。随后通过共转染RGS双荧光替代性报告载体(RFP-GFP surrogate reporter),并应用流式细胞术分选出双荧光细胞,富集到基因组被CRISPR/Cas9修饰的细胞,使基因打靶效率提高至18%。本研究结果表明,应用RGS双荧光替代性报告载体可以有效提高CRISPR/Cas9在PEF细胞中对BMP15基因的打靶效率,为今后通过体细胞核移植技术培育BMP15基因编辑猪进行了有效的探索。
