期刊文献+
共找到387篇文章
< 1 2 20 >
每页显示 20 50 100
靶向RNA的CRISPR-Cas13系统及其研究进展 被引量:3
1
作者 陈静 赵燕波 +1 位作者 赵兰 欧阳松应 《福建师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2021年第2期10-17,共8页
CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated proteins)系统是细菌和古菌抵御外源核酸物质入侵的适应性免疫系统,发挥作用时经过3个阶段:适应阶段、表达阶段和干扰阶段.其中,靶向DNA的CRISPR-Cas... CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-associated proteins)系统是细菌和古菌抵御外源核酸物质入侵的适应性免疫系统,发挥作用时经过3个阶段:适应阶段、表达阶段和干扰阶段.其中,靶向DNA的CRISPR-Cas9研究较为深入,在基因组编辑领域具有广泛应用.而靶向RNA的CRISPR-Cas技术仍处于初步研究阶段.CRISPR-Cas13系统(Cas13a-d)的发现为RNA编辑等领域提供了新思路.Cas13家族蛋白是RNA介导的具有RNase活性的效应蛋白,结构上有保守的HEPN结构域(higher eukaryotes and prokaryotes nucleotide-binding domain),能自我加工precursor crRNA和切割靶RNA.从Cas13家族蛋白的发现与基本功能、结构基础,以及在病毒核酸检测、RNA编辑、疾病治疗等方面的应用进行综述,旨在为CRISPR-Cas13系统的合理改造和应用奠定基础. 展开更多
关键词 crispr-cas13系统 type VI-A/B/D 核酸检测 RNA编辑
下载PDF
CRISPR-Cas13a系统在病原体检测应用中的最新研究进展
2
作者 李青松 赵聪平 +3 位作者 刘静 杨均 燕思羽 张银河 《现代检验医学杂志》 CAS 2024年第3期199-204,共6页
规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白(CRISPR-Cas)系统已作为近年来兴起的新一代分子诊断工具,被广泛应用于基因编辑、核酸检测等领域,其中Cas13a亚型因其在核酸检测中高特异度、高灵敏度、无需昂贵设备、操作简单、费用低廉等特点... 规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白(CRISPR-Cas)系统已作为近年来兴起的新一代分子诊断工具,被广泛应用于基因编辑、核酸检测等领域,其中Cas13a亚型因其在核酸检测中高特异度、高灵敏度、无需昂贵设备、操作简单、费用低廉等特点,在病原体检测领域展现出巨大的潜力。该文综述了CRISPR-Cas13a的作用机制、在病原体检测中的应用以及相关检测方法,并对Cas13a应用前景进行了展望。以期为CRISPR-Cas13a系统的进一步研究及其在病原体检测中的应用提供借鉴和参考。 展开更多
关键词 规律成簇的间隔短回文重复序列及相关蛋白13a 系统 病原体 核酸检测
下载PDF
CRISPR-Cas系统在病原核酸检测中的研究进展 被引量:1
3
作者 杜瑶 高宏丹 +4 位作者 刘家坤 刘孝荣 邢志浩 张涛 马东礼 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第1期202-216,共15页
CRISPR-Cas系统作为原核生物获得性免疫系统,由簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)构成,因其识别和切割特定DNA或RNA序... CRISPR-Cas系统作为原核生物获得性免疫系统,由簇状规则间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)构成,因其识别和切割特定DNA或RNA序列,而成为分子诊断领域研究的热点。研究人员利用Cas蛋白(Cas12、Cas13、Cas14、Cas3等)结合信号放大和转化技术(荧光法、电位法、比色法、侧向流动技术等),开发了许多高灵敏度、高特异性、低成本的诊断平台,为病原核酸检测提供了新途径。本文介绍了CRISPR-Cas系统的生物学机制及分类,总结现有的基于Cas蛋白反式切割活性开发的病原核酸检测技术,描述其特点、功能和应用场景,并对该系统的未来应用前景进行展望,期望CRISPR-Cas系统成为包括核酸检测在内的多靶标的理想检测平台。 展开更多
关键词 crispr-cas系统 Cas12和Cas13 病原体 核酸检测 生物传感
下载PDF
CRISPR-Cas12a系统及其在家禽病原检测中的应用研究进展
4
作者 陈舒瑜 张文钰 +3 位作者 付环茹 李家玉 黄瑜 万春和 《中国动物检疫》 CAS 2024年第11期86-91,共6页
病原微生物是影响家禽健康的重要因素之一,严重阻碍了家禽养殖业的快速发展,因而开发快速高效的病原检测方法对于家禽疫病的有效预防和控制具有十分重要的意义。CRISPR-Cas12a是一门新兴的基因编辑工具,具有高度的特异性、敏感性以及操... 病原微生物是影响家禽健康的重要因素之一,严重阻碍了家禽养殖业的快速发展,因而开发快速高效的病原检测方法对于家禽疫病的有效预防和控制具有十分重要的意义。CRISPR-Cas12a是一门新兴的基因编辑工具,具有高度的特异性、敏感性以及操作简便等优点,通过与聚合酶链式反应(PCR)、等温核酸扩增(LAMP)、重组酶聚合酶扩增(RPA)、重组酶介导等温扩增(RAA)等方法相结合,可大大提高检测效率及准确性,通过使用荧光信号、侧向层析试纸条等技术,还可使检测结果可视化,在病原检测中发挥了重大作用。本文综述了CRISPR-Cas12a系统作用机制及其结合多种核酸扩增技术在家禽病原检测中的应用研究进展,以期为家禽疫病的诊断和防控提供参考,为未来开发更有效的检测平台奠定基础。 展开更多
关键词 crispr-cas系统 Cas12a 病原检测 基因编辑
下载PDF
CRISPR-Cas系统检测病原菌的研究进展
5
作者 林冬媛 谢龙飞 +2 位作者 梁玮珩 李芙蓉 熊文广 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期202-212,共11页
环境和食品中的病原菌威胁着人类和动物的生命健康,影响社会安定与经济发展。早期准确并快速检测病原菌,对监测和治疗人类与动物疾病起至关重要的作用。目前的病原菌检测技术主要包括分离培养鉴定法、免疫诊断方法以及基于核酸的分子生... 环境和食品中的病原菌威胁着人类和动物的生命健康,影响社会安定与经济发展。早期准确并快速检测病原菌,对监测和治疗人类与动物疾病起至关重要的作用。目前的病原菌检测技术主要包括分离培养鉴定法、免疫诊断方法以及基于核酸的分子生物学诊断技术。以上检测方法的特异性和准确性高,但存在检测周期长、对检测人员和设备的要求高等问题,亟待开发更加快速稳定、价廉简便的高灵敏度与高特异性的新型快速检测技术。近年来,以成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白系统(CRISPR-Cas)系统为代表的新型基因编辑技术发展迅速。CRISPR-Cas系统不仅能够作为基因编辑工具,也在不同生物学领域中广泛应用,其中基于CRISPR-Cas系统开发的病原菌检测平台具有灵敏度高、特异性强、灵活性高、成本低廉、快速稳定等优势,在病原菌的快速检测方面具有较大潜力。本文旨在对近几年基于CRISPR-Cas系统开发的多种病原菌检测平台进行综述,包括CRISPR-Cas系统的基本作用原理及相关系统在各种病原菌检测中的应用,并展望其未来所面临的技术挑战与发展前景。 展开更多
关键词 crispr-cas系统 基因编辑 病原菌检测 诊断
下载PDF
小白链霉菌中CRISPR-Cas9基因敲除系统的构建与优化
6
作者 开朗 杨昊 +1 位作者 朱道君 陈旭升 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期10-17,共8页
小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为... 小白链霉菌(Streptomyces albulus)是工业上生产ε-聚赖氨酸的主要菌株。为提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,基于诱变和抗性筛选的传统育种方法被普遍应用。然而,由于传统育种存在“疲劳效应”,当前S.albulus的育种陷入了瓶颈。为利用代谢工程方法进一步提高S.albulus的ε-聚赖氨酸合成能力,亟需建立基于CRISPR-Cas9的基因编辑方法。为此,该文以S.albulus GS114为研究对象,以ε-聚赖氨酸合成酶基因pls为靶基因,构建了CRISPR-Cas9基因敲除系统,成功敲除了pls,编辑效率为100%。为进一步提高获得的敲除株数量,对S.albulus GS114结合转移条件进行了系统优化,获得的最优结合转移条件为:供受体比例1∶1,镁离子浓度30 mmol/L,55℃热激孢子10 min,培养20 h后覆盖抗生素。在最优转移条件下,结合转移效率达到2.5×10^(-8),较优化前提高了78%。该研究结果一方面为后续S.albulus的代谢工程改造提供了重要工具,另一方面为其他工业链霉菌构建CRISPR-Cas系统提供了重要参考。 展开更多
关键词 放线菌 小白链霉菌 crispr-cas9系统 基因敲除
下载PDF
利用CRISPR-Cas系统研究食源性致病菌的基因编辑与调控 被引量:2
7
作者 张昕哲 甄珍 《科技通报》 2024年第5期27-33,共7页
本文基于CRISPR-Cas系统,构建了食源性致病菌基因检测模型。利用基因编码测度技术对Cas蛋白基因中的向导RNA序列进行识别,提取其中的主要基因特征并进行分类。在此基础上,分别使用基因表达与分子诊断技术,根据序列特征,对基因表达数据... 本文基于CRISPR-Cas系统,构建了食源性致病菌基因检测模型。利用基因编码测度技术对Cas蛋白基因中的向导RNA序列进行识别,提取其中的主要基因特征并进行分类。在此基础上,分别使用基因表达与分子诊断技术,根据序列特征,对基因表达数据的差异性与菌属分布概率进行分析。结果表明:通过设计特异性识别的向导RNA和基因差异表达的分析,实现对目标基因和致病菌的检测。这种方法为食源性致病菌的基因检测提供了一种精确、可靠且高效的工具。 展开更多
关键词 crispr-cas系统 食源性致病菌 基因编辑
下载PDF
基于CRISPR-Cas13家族的RNA编辑系统及其最新进展 被引量:6
8
作者 陈敏洁 唐桂月 +3 位作者 洪香娜 郝沛 江静 李轩 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1-8,共8页
存在于细菌和古菌中的获得性免疫系统CRISPR-Cas目前已被广泛应用到生物技术领域,尤其是靶向DNA的CRISPR-Cas9技术。然而CRISPR-Cas系统靶向RNA的技术还处于初步应用阶段。Ⅵ型CRISPR-Cas系统(CRISPR-Cas13)的发现,揭示了RNA引导的RNA... 存在于细菌和古菌中的获得性免疫系统CRISPR-Cas目前已被广泛应用到生物技术领域,尤其是靶向DNA的CRISPR-Cas9技术。然而CRISPR-Cas系统靶向RNA的技术还处于初步应用阶段。Ⅵ型CRISPR-Cas系统(CRISPR-Cas13)的发现,揭示了RNA引导的RNA靶向性。CRISPR-Cas13是目前CRISPR-Cas家族中唯一只靶向ssRNA的系统,为RNA靶向和RNA编辑奠定了基础。根据Cas13系统发育已证明将Ⅵ型CRISPR-Cas系统分为4种亚型(A-D)。主要对目前最新的靶向RNA技术的CRISPR-Cas13家族的分类以及防御机制进行了综述,介绍了CRISPR-Cas13技术的应用以及基于CRISPR-Cas13家族的RNA编辑系统的最新研究进展。最后,对目前CRISPR-Cas13 RNA编辑技术体系存在的问题进行了分析和对未来的发展进行展望。 展开更多
关键词 crispr-cas13 RNA编辑 RNA技术 A>I C>U
下载PDF
PCR扩增技术联合CRISPR-Cas13a系统对MTB DNA检测方法的初步研究 被引量:4
9
作者 于佳佳 张旭霞 +5 位作者 张雨晴 任卫聪 姚丛 李传友 刘毅 唐神结 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2020年第12期1280-1288,共9页
目的建立一种聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)联合CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a识别靶基因核酸序列对结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(Mycobacterium tuberculosis deoxyribonuc... 目的建立一种聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)联合CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a识别靶基因核酸序列对结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(Mycobacterium tuberculosis deoxyribonucleic acid,MTB DNA)进行检测的方法。方法将MTB保守序列IS6110片段插入pMDTM19-Tsimple Vector克隆载体,构建含待检测靶序列的模拟MTB质粒。同时针对待检测靶序列MTB保守序列IS6110设计可以检测MTB DNA的3条不同的特异性规律成簇间隔短回文重复序列RNA(CRISPR RNA,crRNA)探针(IS6110-1crRNA、IS6110-2crRNA、IS6110-3crRNA),引导CRISPR-Cas13a识别转录产物。将筛选出的特异性crRNA、不同待检测标本的PCR扩增转录产物、Cas13a、crRNA和Background RNA等按比例混合构建PCR-CRISPR反应体系。利用荧光定量PCR仪对含有MTB DNA不同稀释浓度的质粒模板、标准菌株H37Rv及6种非结核分枝杆菌进行检测。通过测定的相对荧光强度值分析检测的敏感度及特异度,最终建立基于MTB CRISPR-Cas13a系统的PCR-CRISPR检测方法。结果选择相对荧光强度值最大的IS6110-1crRNA[相对荧光强度值为197680.64(98364.94,304271.25)]作为后续MTB DNA检测的crRNA探针。PCR-CRISPR检测最低拷贝数为101拷贝/μl的质粒和100拷贝/μl的H37Rv扩增产物的相对荧光强度值[分别为38655.34(31975.51,45410.32)和17691.50(17612.36,17793.29)]明显高于阴性对照[29989.48(29435.72,30263.20)和13725.83(13652.43,13804.95)](Z=-6.713、-9.448;P值均<0.001),显示敏感度较好;阴性对照[37635.57(37168.74,38199.20)]和戈登分枝杆菌[39351.83(38903.70,39769.53)]、胞内分枝杆菌[39191.30(39018.51,39434.95)]、堪萨斯分枝杆菌[25172.20(24586.95,26046.45)]、脓肿分枝杆菌[37328.03(36959.01,37546.78)]、鸟分枝杆菌[37942.29(37455.63,38401.13)]、偶发分枝杆菌[29491.19(29148.63,30058.62)]等6种非结核分枝杆菌的相对荧光强度值均明显低于106拷贝/μl的MTB DNA质粒的相对荧光强度值[89204.07(66253.60,108819.13)](Z值均=-9.448,P值均<0.001),显示特异度良好。结论首次成功建立并验证了针对MTB的PCR-CRISPR检测技术,具有敏感度及特异度高、稳定性好、成本低等特点,有望进一步用于临床样本的检测。 展开更多
关键词 结核 分枝杆菌 聚合酶链反应 DNA探针 微阵列分析 crispr-cas13a
下载PDF
基于CRISPR-Cas生物传感系统的食源性病原微生物检测研究进展
10
作者 王熙函 薛姝蓉 +3 位作者 陈曦 张芷菊 邓冉冉 殷利眷 《微生物前沿》 2024年第3期133-145,共13页
食源性病原微生物是涉及食品安全的重要因素,传统检测方法中存在诸多局限性问题,如预处理复杂、周转时间长、灵敏度低、依赖大型仪器设备等。新发现的CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)技术在现阶段... 食源性病原微生物是涉及食品安全的重要因素,传统检测方法中存在诸多局限性问题,如预处理复杂、周转时间长、灵敏度低、依赖大型仪器设备等。新发现的CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats)技术在现阶段微生物检测领域出现许多新的研究进展。利用现代生物学方法基于CRISPR-Cas生物传感系统的开发,可以解决传统检测方式中的诸多问题。文章综述了依托三类Cas蛋白(Cas9、Cas12、Cas13)构建的生物传感器,并将这些生物传感器应用于食源性病原微生物的检测。这些基于CRISPR-Cas系统的传感技术有效克服了传统检测方法存在的限制,具有特异性强、灵敏度高、检测成本低的特点。文章还概述了该技术在目前研究和应用阶段遇到的问题,并对CRISPR-Cas生物传感器未来的发展方向进行了前瞻,同时提出了新的观点和可能的应用,以进一步探寻其在微生物检测领域的未来潜力。随着CRISPR-Cas系统的发展与完善,其必将在食源性微生物检测方面得到越发广泛的应用。Foodborne pathogenic microorganisms are important factors related to food safety, and traditional detection methods have many limitations. The newly discovered clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) technology has made many new advances in microbial detection. The use of modern biological methods based on the development of CRISPR-Cas biosensor system can provide new ideas for traditional detection methods, and solve the problems of traditional detection methods, such as complex pretreatment and long turnaround time. This article mainly reviews studies on the detection of foodborne pathogenic microorganisms based on the biosensing system with three Cas proteins (Cas9, Cas12, Cas13), which has many advantages, such as high sensitivity, high specificity, low cost and so on, breaking the limitations faced by traditional foodborne pathogenic microorganisms detection. The challenges in the current development and application of this method are summarized, and the future development prospect of the new biosensor CRISPR-Cas system is prospected and new thinking is provided for future applications to explore its potential application in microbial detection. As the CRISPR-Cas system continues to evolve and enhance, its application in identifying foodborne microbes is expected to expand significantly. 展开更多
关键词 食源性病原微生物 食源性疾病 crispr-cas系统 Cas蛋白 微生物检测
下载PDF
基于CRISPR-Cas12a系统的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法的建立
11
作者 林冬媛 谢龙飞 +2 位作者 李芙蓉 梁玮珩 熊文广 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第8期68-76,共9页
为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-... 为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-Cas)系统相结合,首先根据鼠伤寒沙门氏菌的spy基因序列3′末端的保守区设计crRNA及靶标序列扩增引物,根据可视化检测原理设计单链DNA(single-stranded DNA, ssDNA)荧光报告探针;然后对靶标序列进行PCR扩增,将扩增产物加入CRISPR-Cas12a系统,在蓝光下通过肉眼观察是否产生绿色荧光实现对靶标的检测;最后进行特异性试验和灵敏度试验。结果表明:建立的方法仅能检测到鼠伤寒沙门氏菌,检测不到除鼠伤寒沙门氏菌外其他血清型的沙门氏菌及大肠杆菌、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌,能检测到循环数为14个的PCR产物和0.53 copies/μL的重组质粒,灵敏度优于常规PCR方法和实时荧光定量PCR方法。说明本试验建立的方法可以实现鼠伤寒沙门氏菌的可视化检测,具有特异性强、灵敏度高的特点。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门氏菌 成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白12a(crispr-cas12a)系统 可视化 检测方法 聚合酶链式反应(PCR)
下载PDF
PCR扩增技术联合CRISPR-Cas13a系统对MTB DNA检测方法的初步研究
12
作者 于佳佳 张旭霞 +5 位作者 张雨晴 任卫聪 姚丛 李传友 刘毅 唐神结 《结核病与胸部肿瘤》 2021年第1期6-14,共9页
目的建立一种聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)联合CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a识别靶基因核酸序列对结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(Mycobacterium tuberculosis deoxyribonuc... 目的建立一种聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)联合CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)-Cas13a识别靶基因核酸序列对结核分枝杆菌脱氧核糖核酸(Mycobacterium tuberculosis deoxyribonucleic acid,MTB DNA)进行检测的方法。方法将MTB保守序列IS6110片段插入pMD^(TM)19-Tsimple Vector克隆载体,构建含待检测靶序列的模拟MTB质粒。同时针对待检测靶序列MTB保守序列IS6110设计可以检测MTB DNA的3条不同的特异性规律成簇间隔短回文重复序列RNA(CRISPR RNA,crRNA)探针(IS6110-lcrRNA、IS6110-2crRNA、IS6110-3crRNA),引导CRISPR-Cas13a识别转录产物。将筛选出的特异性crRNA、不同待检测标本的PCR扩增转录产物、Cas13a、crRNA和Background RNA等按比例混合构建PCR-CRISPR反应体系。利用荧光定量PCR仪对含有MTB DNA不同稀释浓度的质粒模板、标准菌株H37Rv及6种非结核分枝杆菌进行检测。通过测定的相对荧光强度值分析检测的敏感度及特异度,最终建立基于MTB CRISPR-Cas13a系统的PCR-CRISPR检测方法。结果选择相对荧光强度值最大的IS6110-lcrRNA[相对荧光强度值为197680.64(98364.94,304271.25)]作为后续MTB DNA检测的crRNA探针。PCR-CRISPR检测最低拷贝数为10^(1)拷贝/μl的质粒和10^(0)拷贝/μl的H37Rv扩增产物的相对荧光强度值[分别为38655.34(31975.51,45410.32)和17691.50(17612.36,17793.29)]明显高于阴性对照[29989.48(29435.72,30263.20)和13725.83(13652.43,13804.95)](Z=-6.713、-9.448;P值均<0.001),显示敏感度较好;阴性对照[37635.57(37168.74,38199.20)]和戈登分枝杆菌[39351.83(38903.70,39769.53)]、胞内分枝杆菌[39191.30(39018.51,39434.95)]、堪萨斯分枝杆菌[25172.20(24586.95,26046.45)]、脓肿分枝杆菌[37328.03(36959.01,37546.78)]、鸟分枝杆菌[37942.29(37455.63,38401.13)]、偶发分枝杆菌[29491.19(29148.63,30058.62)]等6种非结核分枝杆菌的相对荧光强度值均明显低于10^(6)拷贝/μl的MTE DNA质粒的相对荧光强度值[89204.07(66253.60,108819.13)](Z值均9.448,P值均<0.001),显示特异度良好。结论首次成功建立并验证了针对MTB的PCR-CRISPR检测技术,具有敏感度及特异度高、稳定性好、成本低等特点,有望进一步用于临床样本的检测。 展开更多
关键词 结核 分枝杆菌 聚合酶链反应 DNA探针 微阵列分析 crispr-cas13a
下载PDF
CRISPR-Cas13a系统在基因编辑和分子诊断领域中的研究进展 被引量:3
13
作者 陈佳灵 黄颖而 +5 位作者 邓昊 吴鸿峰 张婧 赵奕君 罗佳豪 郝文波 《检验医学》 CAS 2022年第1期97-100,共4页
成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-CRISPR相关蛋白(Cas)系统是一个强大的基因编辑工具。相对于Cas9,Cas13a可靶向多基因转录产物,从而调控基因功能表达,填补了Cas9仅限于DNA水平的编辑及脱靶效应等缺陷。不仅如此,利用Cas13a靶向... 成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-CRISPR相关蛋白(Cas)系统是一个强大的基因编辑工具。相对于Cas9,Cas13a可靶向多基因转录产物,从而调控基因功能表达,填补了Cas9仅限于DNA水平的编辑及脱靶效应等缺陷。不仅如此,利用Cas13a靶向RNA的特性,该系统被成功地改造成下一代核酸诊断工具。文章概述了CRISPR-Cas13系统在基因编辑及分子诊断领域的最新研究进展,并对该系统的应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 成簇的规律间隔的短回文重复序列 成簇的规律间隔的短回文重复序列相关蛋白13a 附带切割 基因编辑 特异性高灵敏度酶报告系统
下载PDF
利用CRISPR-Cas9系统定点突变猪MSTN基因的研究 被引量:12
14
作者 张冬杰 刘娣 +2 位作者 张旭 汪亮 杨国伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期207-212,共6页
为了今后能够有效的利用CRISPR-Cas9系统进行基因功能研究及转基因动物的培育,本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细... 为了今后能够有效的利用CRISPR-Cas9系统进行基因功能研究及转基因动物的培育,本研究将带有绿色荧光蛋白(GFP)和肌肉生长抑制素基因(Myostatin,MSTN)靶序列的CRISPR-Cas9系统转染入PK15细胞系,利用流式细胞仪分离并收集转染成功的阳性细胞,使用PCR扩增结合克隆测序的方法检测和分析CRISPR-Cas9系统的定点突变情况,以评价CRISPR-Cas9系统的作用效果。结果发现,随机挑选的100个阳性克隆中,38个发生了变异,突变效率为38%,其中32个为插入突变,6个为缺失突变。插入突变中突变1(Mutation1)所占比例最高,为47.4%。本研究中CRISPR-Cas9系统的突变效率达到了38%,是目前进行基因组编辑的一个有效工具,推测其突变类型具有一定的偏好性。 展开更多
关键词 crispr-cas9系统 基因组编辑 突变率
下载PDF
CRISPR-Cas系统与细菌和噬菌体的共进化 被引量:33
15
作者 李铁民 杜波 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期213-218,共6页
细菌在适应噬菌体攻击的过程中,进化了多种防御系统,噬菌体在细菌的选择压力下,也在不断进化反防御策略,双方的这种进化关系与发生机制一直尚不完全清楚。近年在细菌和古细菌中发现一种新的免疫防御系统,即CRISPR-Cas(clustered regular... 细菌在适应噬菌体攻击的过程中,进化了多种防御系统,噬菌体在细菌的选择压力下,也在不断进化反防御策略,双方的这种进化关系与发生机制一直尚不完全清楚。近年在细菌和古细菌中发现一种新的免疫防御系统,即CRISPR-Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated system)系统。在对其功能和作用机制深入研究的同时,也不断地揭示了细菌和噬菌体之间的共进化关系。为此,文章在介绍原核细胞中CRISPR-Cas系统介导的免疫机制基础上,重点综述了CRISPR系统在细菌和噬菌体进化中的作用。 展开更多
关键词 CRISPR crispr-cas系统 噬菌体 共进化 免疫防御
下载PDF
基于CRISPR-Cas系统的基因组定点修饰新技术 被引量:13
16
作者 王梦瑶 杨亦农 边红武 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期426-433,共8页
CRISPR(clustered regulatory interspersed short palindromic repeat)序列源于原核生物的一种获得性免疫系统,协同Cas(CRISPR-associated)蛋白家族参与抵抗噬菌体或其它病毒的二次感染,广泛存在于细菌(60%)和古菌(90%)中.病菌和宿主... CRISPR(clustered regulatory interspersed short palindromic repeat)序列源于原核生物的一种获得性免疫系统,协同Cas(CRISPR-associated)蛋白家族参与抵抗噬菌体或其它病毒的二次感染,广泛存在于细菌(60%)和古菌(90%)中.病菌和宿主的共同进化导致了CRISPR-Cas系统具有多样性,可分为3大类(Ⅰ-Ⅲ),又分为10亚类.在Ⅱ型CRISPR-Cas系统基础上建立了RNA介导的CRISPR-Cas系统来修饰(删除、添加、激活、抑制)靶细胞中特定的基因序列,现已在人类细胞、小鼠、斑马鱼、酵母、细菌、果蝇、线虫、拟南芥中得以应用.本文主要介绍了Ⅱ型CRISPR-Cas系统的结构特点、作用机理及作为新型基因组定点修饰技术的研究进展,分析该技术优势,并展望CRISPRCas系统的应用前景. 展开更多
关键词 crispr-cas系统 获得性免疫 基因组编辑
下载PDF
乳酸菌CRISPR-Cas系统研究进展 被引量:3
17
作者 李婉 边鑫 +2 位作者 王娜娜 李柏良 霍贵成 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期22-25,35,共5页
对乳酸菌CRISPR-Cas系统(即:成簇的、规律间隔的短回文重复序列及相关Cas蛋白系统)抗噬菌体机制以及噬菌体进化出的相应免疫逃逸机制进行综述,旨为进一步研究噬菌体抗性乳酸菌发酵剂奠定基础。
关键词 乳酸菌 crispr-cas系统 噬菌体
下载PDF
空肠弯曲菌CRISPR-Cas系统生物信息学分析 被引量:2
18
作者 张博 姚学萍 +2 位作者 曹随忠 王印 杨泽晓 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期960-964,共5页
为分析GenBank中登录的国内外空肠弯曲菌及其亚种中所含CRISPR-Cas系统的结构特征及同源关系,本研究利用生物信息学方法预测GenBank中已登录的空肠弯曲菌所含的CRISPR-Cas系统的基因序列,对其进行比对、保守性分析、RNA二级结构预测、... 为分析GenBank中登录的国内外空肠弯曲菌及其亚种中所含CRISPR-Cas系统的结构特征及同源关系,本研究利用生物信息学方法预测GenBank中已登录的空肠弯曲菌所含的CRISPR-Cas系统的基因序列,对其进行比对、保守性分析、RNA二级结构预测、重复序列的GC含量分析及其遗传进化分析。结果显示,空肠弯曲菌及其亚种中所含CRISPR-Cas系统的重复序列高度保守、GC含量较低(28.57%以下),差异性主要呈现于两端游离部分;CRISPR中的间隔序列差异性较大致使CRISPR具有多态性;Cas蛋白序列同源性较高(96.8%以上),遗传动态变化较低,与基因水平转移产生的趋同进化有潜在相关性。空肠弯曲菌CRISPR-Cas系统中的间隔序列具有多态性与该菌的遗传进化差异有关,重复序列及cas基因保守性较强,与其共同进化有潜在相关性。通过对不同空肠弯曲菌CRISPR-Cas系统生物信息学分析,为进一步研究该菌CRISPR-Cas系统结构特征、基因进化关系奠定了基础。 展开更多
关键词 空肠弯曲菌 crispr-cas系统 重复序列 间隔序列 生物信息学
下载PDF
CRISPR-Cas系统在生物学研究中的应用 被引量:4
19
作者 康峰 卢胜明 张海峰 《实验动物科学》 2014年第4期54-58,共5页
成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,简称为CRISPR)系统是一种新的基因修饰技术,具有制作周期短、成本低和作用高效等优点。本文从结构、研究历史、分类和分布、作用机制和其... 成簇的规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,简称为CRISPR)系统是一种新的基因修饰技术,具有制作周期短、成本低和作用高效等优点。本文从结构、研究历史、分类和分布、作用机制和其在生物学研究中的应用等方面介绍CRISPR-Cas系统。 展开更多
关键词 CRISPR crispr-cas系统 生物学研究
下载PDF
CRISPR-Cas13a检测在肺结核诊断中的价值 被引量:1
20
作者 张治国 尚媛媛 +5 位作者 张旭霞 刘荣梅 马丽萍 秦林 孔忠顺 任卫聪 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2023年第6期589-593,共5页
目的:评价应用CRISPR-Cas13a检测临床样本对肺结核的诊断价值。方法:采用回顾性研究方法,收集首都医科大学附属北京胸科医院2022年9月至2022年12月收治住院的102例经GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert检测”)确诊的肺结核患者的支气管... 目的:评价应用CRISPR-Cas13a检测临床样本对肺结核的诊断价值。方法:采用回顾性研究方法,收集首都医科大学附属北京胸科医院2022年9月至2022年12月收治住院的102例经GeneXpert MTB/RIF检测(简称“Xpert检测”)确诊的肺结核患者的支气管肺泡灌洗液标本,作为结核病组;收集同期收治入院的100例非结核病患者(包括肺癌,细菌性肺炎,支气管扩张,慢性阻塞性肺疾病)的支气管肺泡灌洗液标本,作为非结核病组。所有患者的支气管肺泡灌洗液标本均进行涂片抗酸杆菌染色镜检、培养、Xpert检测及CRISPR-Cas13a检测。以Xpert检测结果为参照,评价CRISPR-Cas13a检测支气管肺泡灌洗液对肺结核的诊断价值。结果:结核病组102份标本中,CRISPR-Cas13a检测阳性为99份(97.1%),涂片阳性40份(39.2%),培养阳性68份(66.7%)。CRISPR-Cas13a检测阳性率明显高于涂片和培养法,差异有统计学意义(涂片:χ^(2)=58.141,P<0.001;培养:χ^(2)=30.250,P<0.001)。与传统检测方法相比,CRISPR-Cas13a比涂片和培养法多检测出28份标本。Xpert检测结核病组阳性率为100.0%;Xpert检测非结核病组阴性率为100.0%。以Xpert检测结果作为参照,CRISPR-Cas13a检测肺结核的敏感度为97.1%(99/102)、特异度为96.0%(96/100),准确度为96.5%(195/202),阳性预测值为96.1%(99/103),阴性预测值为97.0%(96/99)。结论:CRISPR-Cas13a检测与传统方法相比简单、快捷,检测支气管肺泡灌洗液对肺结核的诊断具有较高敏感度及特异度,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 重复序列 核酸 结核 支气管肺泡灌洗液 crispr-cas系统
下载PDF
上一页 1 2 20 下一页 到第
使用帮助 返回顶部