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接合物蛋白Crk和CrkL在上皮性卵巢癌中的表达及意义 被引量:5
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作者 沈太敏 赵纯全 +1 位作者 赵涌 令狐华 《中国全科医学》 CAS CSCD 2008年第11期940-942,共3页
目的探讨接合物蛋白Crk和CrkL在上皮性卵巢癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法,观察Crk和CrkL蛋白在上皮性卵巢癌不同临床病理指标内的表达,并与卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织进行比较。结果上皮性卵巢癌中Crk和CrkL蛋白的表... 目的探讨接合物蛋白Crk和CrkL在上皮性卵巢癌中的表达及意义。方法采用免疫组化SP法,观察Crk和CrkL蛋白在上皮性卵巢癌不同临床病理指标内的表达,并与卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织进行比较。结果上皮性卵巢癌中Crk和CrkL蛋白的表达与卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织比较差异有统计学意义(P<0.05)。不同分化程度、临床分期的上皮性卵巢癌Crk蛋白的表达间差异有统计学意义(P<0.05)。不同分化程度、临床分期的上皮性卵巢癌CrkL蛋白的表达情况间差异无统计学意义(P>0.05)。不同组织病理类型的上皮性卵巢癌Crk和CrkL蛋白的表达间差异无统计学意义(P>0.05)。结论Crk和CrkL蛋白可能在上皮性卵巢癌的发生、发展中发挥某种作用,与CrkL蛋白相比,Crk蛋白的过度表达可能更直接影响着卵巢癌浸润、转移等恶性生物学行为。 展开更多
关键词 CRK crkl 上皮性卵巢癌 接合物蛋白
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过表达CrkL对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其机制 被引量:4
2
作者 张蕾 李刚 +2 位作者 张志升 杨东艳 扶艳波 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期433-438,共6页
目的探讨过表达接合物蛋白CrkL对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其可能机制。方法将H9C2心肌细胞分为空白组、空质粒组、CrkL过表达组、空白+H/R组、空质粒+H/R组、CrkL过表达+H/R组。空质粒组瞬时转染pCXN2-Flag质... 目的探讨过表达接合物蛋白CrkL对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其可能机制。方法将H9C2心肌细胞分为空白组、空质粒组、CrkL过表达组、空白+H/R组、空质粒+H/R组、CrkL过表达+H/R组。空质粒组瞬时转染pCXN2-Flag质粒(空质粒),CrkL过表达组瞬时转染pCXN2-Flag-hCrkL(过表达人CrkL mRNA)质粒,空质粒+H/R组和CrkL过表达+H/R组分别瞬时转染pCXN2-Flag质粒(空质粒)、pCXN2-Flag-hCrkL(过表达人CrkL mRNA)质粒后与空白+H/R组一起进行H/R干预。细胞经分组处理后继续培养48h,采用RT-PCR法检测心肌细胞CrkL mRNA表达,Western blotting检测心肌细胞CrkL蛋白和p-ERK1/2蛋白表达,MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果与空白组、空质粒组比较,CrkL过表达组人CrkL mRNA、CrkL蛋白、p-ERK1蛋白、p-ERK2蛋白表达水平及细胞增殖率均明显增加(P<0.05,P<0.01),凋亡率均明显降低(P<0.05);与空白+H/R组和空质粒+H/R组比较,CrkL过表达+H/R组人CrkL mRNA、CrkL蛋白、p-ERK1蛋白、p-ERK2蛋白表达水平及细胞增殖率均明显增加(P<0.05,P<0.01),凋亡率均明显降低(P<0.01)。结论过表达CrkL可抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,增加细胞存活率,该过程可能是通过p-ERK1/2蛋白介导的。 展开更多
关键词 接合物蛋白crkl 肌细胞 心脏 细胞凋亡 缺氧 复氧
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Stathmin和CrkL蛋白在耐阿霉素的K562白血病细胞中表达上调 被引量:2
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作者 徐建萍 胡建达 +2 位作者 林敏辉 李静 刘庭波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期1383-1387,共5页
本研究应用蛋白质组学方法比较白血病K562细胞及其耐阿霉素的K562/A02细胞中蛋白质表达谱的差异,筛选新的耐药相关蛋白。利用荧光差异双向电泳(2D-DIGE)技术分离K562细胞及K562/A02细胞的总蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MAL... 本研究应用蛋白质组学方法比较白血病K562细胞及其耐阿霉素的K562/A02细胞中蛋白质表达谱的差异,筛选新的耐药相关蛋白。利用荧光差异双向电泳(2D-DIGE)技术分离K562细胞及K562/A02细胞的总蛋白,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)对差异表达蛋白质点进行鉴定,搜索蛋白质数据库,获得差异蛋白质的信息,并用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量PCR法在蛋白质水平和mRNA水平对差异蛋白质进行验证。结果显示,经过DIGE技术和质谱分析,鉴定出8个蛋白质在耐阿霉素的K562细胞中表达有差异,其中2个表达下调,6个表达上调,它们分别参与细胞能量代谢、细胞增殖、细胞凋亡、细胞信号转导和基因转录等。在表达上调的蛋白中挑选Stathmin和CrkL蛋白,在K562及其耐药细胞株中进行了蛋白免疫印迹实验,结果与双向电泳结果一致;实时荧光定量PCR显示,CrkL在mRNA水平变化与在蛋白质水平变化一致,而Stathmin在mRNA水平变化与蛋白质水平变化不完全一致。结论:白血病K562细胞及其耐阿霉素K562/A02细胞蛋白质表达谱有差异,Stathmin和CrkL蛋白可能与耐药有关,值得进一步探讨。 展开更多
关键词 STATHMIN蛋白 crkl蛋白 阿霉素 多药耐药 K562细胞 K562/A02细胞
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沉默CrkL对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其机制 被引量:2
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作者 张志升 杨东艳 +2 位作者 张蕾 李刚 扶艳波 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1272-1276,共5页
目的探讨沉默CrkL对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其机制。方法分别用空白试剂、阴性慢病毒和CrkL RNAi慢病毒(沉默CrkL mRNA)感染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)干预。实验分为空白组、阴性病毒组、CrkL沉默组、空... 目的探讨沉默CrkL对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力的影响及其机制。方法分别用空白试剂、阴性慢病毒和CrkL RNAi慢病毒(沉默CrkL mRNA)感染H9C2心肌细胞,并进行缺氧/复氧(H/R)干预。实验分为空白组、阴性病毒组、CrkL沉默组、空白+H/R组、阴性病毒+H/R组、CrkL沉默+H/R组。用RT-PCR法检测心肌细胞CrkL mRNA的表达,蛋白印迹分析法检测心肌细胞CrkL蛋白、p-ERK1/2蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果 CrkL沉默组较空白组和阴性病毒组,CrkL沉默+H/R组较空白+H/R组和阴性病毒+H/R组CrkL mRNA、CrkL蛋白、p-ERK1/2蛋白、细胞增殖率均降低(P<0.05或P<0.01),细胞凋亡率均增加(P<0.01)。结论沉默CrkL能加重缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和生存力降低。该过程可能是由p-ERK1/2蛋白表达降低介导的。 展开更多
关键词 crkl 心肌细胞 细胞凋亡 细胞存活 缺氧/复氧
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CRKL基因反义寡核苷酸诱导K562细胞的凋亡 被引量:1
5
作者 王莎 孙秉中 +3 位作者 于文强 张涛 冯琦 尚振川 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第9期934-938,共5页
背景与目的:近几年研究发现,CRKL(CT10regulatorofkinaselike)基因编码的蛋白在慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)发病中起重要作用。本实验研究CRKL基因反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。方法:以... 背景与目的:近几年研究发现,CRKL(CT10regulatorofkinaselike)基因编码的蛋白在慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)发病中起重要作用。本实验研究CRKL基因反义寡核苷酸对慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞凋亡的影响。方法:以脂质体为载体,用CRKL基因反义寡核苷酸转染K562细胞,通过活细胞计数、透射电镜、流式细胞术、DNALadder测定观察K562细胞形态学、细胞周期、基因表达等的变化。结果:在CRKL基因反义寡核苷酸作用下,K562细胞的生长明显出现抑制;流式细胞仪检测见二倍体峰前出现凋亡峰;在电镜下可见处于凋亡各期的K562细胞;提取其基因组DNA进行琼脂糖凝胶电泳,可见明显的细胞凋亡梯状条带。而对照组K562细胞未观察到上述变化。结论:CRKL基因是Ph染色体阳性CML发病的重要因素。 展开更多
关键词 crkl基因 反义寡核苷酸 凋亡 慢性粒细胞白血病
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miR-126对Hela细胞增殖的影响及其与CRKL的靶向关系 被引量:1
6
作者 邱刚 房保栓 +3 位作者 魏强 苑晓烨 吴大勇 辛国宏 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2014年第5期715-719,共5页
目的:探讨miR-126对宫颈癌Hela细胞增殖活性的影响及其与CRKL的靶向关系。方法:构建miR-126、CRKL野生型(CRKL-WT)和突变型(CRKL-MT)真核表达载体pcDNATM6.2-GW-pre-miR-126、pmirGLO-CRKLWT和pmirGLO-CRKL-MT。采用实时荧光定量PCR法... 目的:探讨miR-126对宫颈癌Hela细胞增殖活性的影响及其与CRKL的靶向关系。方法:构建miR-126、CRKL野生型(CRKL-WT)和突变型(CRKL-MT)真核表达载体pcDNATM6.2-GW-pre-miR-126、pmirGLO-CRKLWT和pmirGLO-CRKL-MT。采用实时荧光定量PCR法检测未转染、pcDNATM6.2-GW转染和pcDNATM6.2-GWpre-miR-126转染Hela细胞miR-126和CRKL mRNA的表达水平,应用MTT法检测细胞的增殖活性,Western blot法检测细胞CRKL蛋白的表达水平。将细胞分别共转染pcDNATM6.2-GW和pmirGLO-CRKL-WT、pcDNATM6.2-GW和pmirGLO-CRKL-MT、pcDNATM6.2-GW-pre-miR-126和pmirGLO-CRKL-WT、pcDNATM6.2-GW-pre-miR-126和pmirGLO-CRKL-MT,采用双荧光素酶报告系统检测细胞荧光素酶活性。结果:与pcDNATM6.2-GW转染组细胞比较,pcDNATM6.2-GW-pre-miR-126组细胞miR-126 mRNA过表达(t=545.891,P<0.05),CRKL mRNA和蛋白表达水平均降低(t=135.755、180.661,P<0.05),同时细胞的增殖活性亦降低(P<0.05);共转染pcDNATM6.2-GWpre-miR-126和pmirGLO-CRKL-WT的Hela细胞荧光素酶活性下调(Fpre-miR-126=55.627,FCRKL=61.843,F交互=76.203,P均<0.001)。结论:miR-126的过表达能够显著抑制Hela细胞的增殖,并且与CRKL具有良好的靶向关系。 展开更多
关键词 宫颈癌 MIR-126 crkl 增殖
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接合物蛋白Crk与CrkL在卵巢癌细胞株MCAS细胞增殖中的不同作用 被引量:1
7
作者 李文燕 高一萌 +3 位作者 张瑜 王瑾 车亚玲 令狐华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1185-1188,共4页
目的探讨接合物蛋白Crk和CrkL在卵巢癌细胞株MCAS细胞增殖中的不同作用。方法采用免疫共沉淀法检测上皮性卵巢癌细胞株MACS中Crk和CrkL蛋白与已知的与肿瘤增殖相关的上下游结合蛋白的内源性结合;用可调节性siRNA敲低MACS细胞中内源性的... 目的探讨接合物蛋白Crk和CrkL在卵巢癌细胞株MCAS细胞增殖中的不同作用。方法采用免疫共沉淀法检测上皮性卵巢癌细胞株MACS中Crk和CrkL蛋白与已知的与肿瘤增殖相关的上下游结合蛋白的内源性结合;用可调节性siRNA敲低MACS细胞中内源性的Crk及CrkL,观察二者对细胞生长及存活能力的影响。结果免疫共沉淀显示卵巢癌细胞株MACS中,Crk与影响细胞生长增殖的上游蛋白p130Cas及下游蛋白Sos的结合明显强于CrkL,尽管Crk与CrkL表现出部分相同的免疫原性。免疫印迹显示在加入Dox后即Crk或CrkL表达沉默被启动。Crki/CrkLi细胞中加入Dox后Crk与CrkL表达明显降低[Dox+:Crk(0.021±0.001),CrkL(0.676±0.005);Dox-:Crk(0.544±0.003),CrkL(1.282±0.007),P<0.05]。对可调节性siRNA构建之可控性Crki/CrkLi细胞的连续动态观察发现,Crki细胞表现出细胞增殖力受限仍保存生存活力,而CrkLi细胞则表现出逐渐脱壁至死亡。结论 Crk及CrkL在卵巢癌细胞MCAS的恶性增殖中扮演着不同的作用,Crk蛋白的过度表达可能直接影响着卵巢癌细胞恶性增殖,而CrkL则可能更多地参与了细胞基本生存相关的生物行为。 展开更多
关键词 CRK crkl 接合物蛋白 卵巢癌细胞株MCAS
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左旋卡尼汀联合CrkL降低缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤 被引量:1
8
作者 蔡婵娟 徐章伦 汪莲开 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2021年第3期232-239,共8页
目的研究左旋卡尼汀联合CT10激酶调节子样蛋白(CrkL)降低缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的作用。方法利用H/R损伤心肌细胞H9c2,使用左旋卡尼汀处理。细胞计数试剂盒8(CCK-8)、流式细胞术、Western blot分别检测细胞的增殖、凋亡和细... 目的研究左旋卡尼汀联合CT10激酶调节子样蛋白(CrkL)降低缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的作用。方法利用H/R损伤心肌细胞H9c2,使用左旋卡尼汀处理。细胞计数试剂盒8(CCK-8)、流式细胞术、Western blot分别检测细胞的增殖、凋亡和细胞核相关抗原Ki-67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、核因子κB(NF-κB)、CrkL水平。在细胞H9c2中转染pcDNA-CrkL,使用H/R处理或H/R+左旋卡尼汀处理。采用上述方法检测细胞增殖、凋亡等。结果与对照组比较,H/R组H9c2细胞的活力、Ki-67、PCNA、Bcl-2、CrkL蛋白表达量明显降低,细胞凋亡率、Bax蛋白水平及炎症因子TNF-α、IL-1β、NF-κB的蛋白水平显著升高(P<0.05)。与H/R组比较,左旋卡尼汀明显增加H/R诱导的H9c2细胞活力及Ki-67、PCNA、Bcl-2、CrkL蛋白表达量,显著降低细胞凋亡率、Bax蛋白水平及TNF-α、IL-1β、NF-κB蛋白水平(P<0.05)。CrkL过表达明显提高H/R诱导的H9c2细胞活力和Ki-67、PCNA、Bcl-2蛋白表达量,显著降低细胞凋亡率、Bax蛋白水平及TNF-α、IL-1β、NF-κB蛋白水平(P<0.05)。与单独使用左旋卡尼汀或CrkL过表达比较,左旋卡尼汀联合CrkL过表达明显提高H9c2细胞的活力和Ki-67、PCNA、Bcl-2蛋白表达量,显著降低细胞凋亡率、Bax蛋白水平及TNF-α、IL-1β、NF-κB蛋白水平(P<0.05)。结论左旋卡尼汀联合CrkL可以促进缺氧复氧诱导的心肌细胞增殖,降低细胞凋亡和炎症反应,从而保护心肌细胞。 展开更多
关键词 左旋卡尼汀 crkl 心肌细胞 缺氧复氧 细胞凋亡 炎性因子
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CRKL基因反义寡核苷酸对K562细胞增殖的影响
9
作者 王莎 孙秉中 +2 位作者 黄高昇 于文强 柴玉波 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第10期878-880,共3页
目的 通过研究 CRKL基因反义寡核苷酸对 K5 6 2细胞增殖活性的影响 ,探讨 CRKL基因在 Ph+ 慢性粒细胞性白血病 (CML)发病中的作用 .方法 脂质体为载体 ,CRKL基因反义寡核苷酸转染 K5 6 2细胞 ,通过活细胞记数、H3- Td R掺入、RT- PCR... 目的 通过研究 CRKL基因反义寡核苷酸对 K5 6 2细胞增殖活性的影响 ,探讨 CRKL基因在 Ph+ 慢性粒细胞性白血病 (CML)发病中的作用 .方法 脂质体为载体 ,CRKL基因反义寡核苷酸转染 K5 6 2细胞 ,通过活细胞记数、H3- Td R掺入、RT- PCR等方法观察 K5 6 2细胞的增殖活性及基因表达的变化 .结果  CRKL反义寡核苷酸对 K5 6 2细胞的增殖有抑制作用 .结论  CRKL基因在 Ph+ CML的发病中可能有重要作用 ,可作为 CML 治疗的新靶点 . 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 crkl基因 慢性粒细胞白血病 K562细胞 细胞增殖
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CRKL基因对K562细胞的作用研究
10
作者 王莎 孙秉中 于文强 《临床血液学杂志》 CAS 2002年第4期168-170,共3页
目的 :通过研究CRKL基因反义寡核苷酸 (ASODN)对K 5 6 2细胞增殖及凋亡的作用 ,探讨CRKL基因对慢性粒细胞性白血病 (CML)发病的影响。方法 :应用CRKL基因反义寡核苷酸作用于K 5 6 2细胞 ,通过3 H TdR掺入、流式细胞术、Rt PCR等方法观察... 目的 :通过研究CRKL基因反义寡核苷酸 (ASODN)对K 5 6 2细胞增殖及凋亡的作用 ,探讨CRKL基因对慢性粒细胞性白血病 (CML)发病的影响。方法 :应用CRKL基因反义寡核苷酸作用于K 5 6 2细胞 ,通过3 H TdR掺入、流式细胞术、Rt PCR等方法观察K 5 6 2细胞形态学、细胞周期、细胞动力学及基因表达等变化。结果 :CRKL基因ASODN对K 5 6 2细胞的增殖有抑制作用 ,并可诱导K 5 6 2细胞的凋亡。结论 :CRKL基因在CML的发病中可能有重要作用。 展开更多
关键词 反义寡核苷酸 crkl基因 K562细胞 慢性粒细胞性白血病
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连接蛋白CRKL及其相关蛋白与造血调控信号传导
11
作者 刘兵城 阎洪敏 《国外医学(输血及血液学分册)》 1999年第5期311-314,共4页
CRKL为具有SH2及SH3结构的连接蛋白,可与细胞内不同蛋白结合参与造血调控所涉及的广泛的信号传导。在BCR/ABL^+的细胞,CRKL持续而显著地酪氨酸磷酸化,对BCR/ABL的恶性转化有重要作用。本文就CRKL来源、结构及功能,CRKL所识别并结合的蛋... CRKL为具有SH2及SH3结构的连接蛋白,可与细胞内不同蛋白结合参与造血调控所涉及的广泛的信号传导。在BCR/ABL^+的细胞,CRKL持续而显著地酪氨酸磷酸化,对BCR/ABL的恶性转化有重要作用。本文就CRKL来源、结构及功能,CRKL所识别并结合的蛋白以及CRKL在慢性髓细胞白血病中的作用进行了综述。 展开更多
关键词 crkl 连接蛋白 白血病 BCR/ABL CML 造血调控
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CrkL在β受体过度激动促进心肌梗死后心室间质重塑中的作用 被引量:2
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作者 朱雪锋 李刚 张灿晶 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1083-1085,共3页
目的探讨CrkL在β肾上腺素能受体(β-AR)过度激动促进心肌梗死后心室间质重塑中的作用。方法40只SD大鼠分为心肌梗死给药组(n=15);心肌梗死对照组(n=10);假手术给药组(n=9)以及假手术对照组(n=6),采用左冠状动脉前降支结扎术建立心肌梗... 目的探讨CrkL在β肾上腺素能受体(β-AR)过度激动促进心肌梗死后心室间质重塑中的作用。方法40只SD大鼠分为心肌梗死给药组(n=15);心肌梗死对照组(n=10);假手术给药组(n=9)以及假手术对照组(n=6),采用左冠状动脉前降支结扎术建立心肌梗死模型,心肌梗死给药组和假手术给药组给予异丙肾上腺素,心肌梗死对照组和假手术对照组给予生理盐水处理,采用彩色多普勒超声测定射血分数(EF)及左室短轴缩短率(FS),12w后处死大鼠,取心脏,Masson胶原特殊染色法测定胶原容积分数(CVF),Western印迹检测心肌梗死周围濒死组织CrkL的表达。结果心肌梗死给药组较心肌梗死对照组EF及FS降低、CVF增高、梗死灶周围濒死组织中CrkL蛋白表达显著升高并与CVF呈正相关(P<0.05)。结论β-AR过度激动可明显增强心肌梗死后心室间质重塑,CrkL的表达增强可能是其机制之一。 展开更多
关键词 心肌梗死 心室间质重塑 异丙肾上腺素 Β肾上腺素能受体 crkl
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靶向CrkL基因的siRNA真核表达载体的构建及对H9C2心肌细胞凋亡的作用 被引量:1
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作者 朱炳豹 李刚 《生命科学研究》 CAS CSCD 2011年第2期119-124,共6页
为研究CrkL基因在心肌细胞中的作用机制提供实验基础,首先体外合成6个针对大鼠CrkL基因的特异反义脱氧寡核苷酸序列,定向克隆至pSR-GFP/neo siRNA真核表达质粒中,经双酶切和测序证实重组载体pSR-GFP/neo-CrkLi构建成功.然后将其转染入大... 为研究CrkL基因在心肌细胞中的作用机制提供实验基础,首先体外合成6个针对大鼠CrkL基因的特异反义脱氧寡核苷酸序列,定向克隆至pSR-GFP/neo siRNA真核表达质粒中,经双酶切和测序证实重组载体pSR-GFP/neo-CrkLi构建成功.然后将其转染入大鼠H9C2心肌细胞内,用荧光显微镜观察其转染率,RT-PCR法鉴定其对CrkL mRNA表达的抑制作用.流式细胞仪检测转染前后H9C2细胞凋亡率.所有pSR-GFP/neo-CrkLi载体均能高效率的转染H9C2细胞,但只有3个载体能显著抑制CrkL mRNA的表达.其中pSR-GFP/neo-CrkLi3效果最佳,其转染H9C2细胞后,该组H9C2细胞凋亡率明显高于其他两组(P=0.001). 展开更多
关键词 crkl基因 RNA干扰 心肌细胞 H9C2细胞株
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miR-15b-5p靶向CRKL基因对缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡和增殖的作用机制 被引量:1
14
作者 黄粮 吴瑞霞 +2 位作者 王岚 肖杰 成忠 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2021年第11期2393-2398,共6页
目的探讨微小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)靶向CRKL基因对缺氧/复氧(H/R)诱导心肌细胞凋亡及增殖的作用机制。方法构建miR-15b-5p低表达及CRKL高表达的H9C2心肌细胞系并进行H/R处理,qRT-PCR检测miR-15b-5p及CRKL mRNA表达,Western印迹检测CRK... 目的探讨微小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)靶向CRKL基因对缺氧/复氧(H/R)诱导心肌细胞凋亡及增殖的作用机制。方法构建miR-15b-5p低表达及CRKL高表达的H9C2心肌细胞系并进行H/R处理,qRT-PCR检测miR-15b-5p及CRKL mRNA表达,Western印迹检测CRKL蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡变化,MTT实验检测细胞增殖,双荧光素酶报告基因验证miR-15b-5p与CRKL的靶向关系。结果与Con组相比,H/R组H9C2心肌细胞中miR-15b-5p表达显著升高,CRKL mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);与H/R+anti-miR-NC组相比,抑制miR-15b-5p表达可抑制心肌细胞凋亡,促进细胞增殖;与H/R+pcDNA组相比,CRKL过表达可诱导心肌细胞增殖,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告基因显示,转染miR-15b-5p+野生型CRKL-3′UTR报告基因载体组荧光素酶活性明显下降;转染miR-15b-5p inhibitor+野生型CRKL-3′UTR和转染miR-15b-5p mimic+突变型CRKL-3′UTR报告基因载体组荧光素酶活性没有变化;抑制CRKL表达可逆转抑制miR-15b-5p表达对H/R诱导的心肌细胞凋亡和增殖的作用。结论miR-15b-5p可负向调控CRKL基因表达进而促进H/R诱导的心肌细胞凋亡并抑制心肌细胞增殖。 展开更多
关键词 微小RNA-15b-5p 缺氧/复氧 crkl 心肌细胞 凋亡 增殖
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Crk1/2与CrkL缺失导致足细胞损伤的蛋白质组学分析 被引量:1
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作者 杜佳琳 段楠 +3 位作者 逄璐 黄海明 黄辰炜 李海霞 《国际检验医学杂志》 CAS 2020年第21期2580-2585,共6页
目的探讨Crk1/2与CrkL缺失导致足细胞损伤过程中胞内蛋白表达变化情况。方法利用小干扰RNA转染方法对足细胞内Crk1/2与CrkL进行单敲降及双敲降;通过非标记液相色谱串联质谱方法对Crk1/2与CrkL单敲降及双敲降的足细胞进行蛋白质组学分析... 目的探讨Crk1/2与CrkL缺失导致足细胞损伤过程中胞内蛋白表达变化情况。方法利用小干扰RNA转染方法对足细胞内Crk1/2与CrkL进行单敲降及双敲降;通过非标记液相色谱串联质谱方法对Crk1/2与CrkL单敲降及双敲降的足细胞进行蛋白质组学分析;对得到的差异蛋白进行基因本体(GO)分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析;采用Western blot试验对差异蛋白进行验证。结果Crk1/2与CrkL单敲降及双敲降的足细胞与正常足细胞比较,共发现98个差异蛋白,GO分析和KEGG分析提示多数上调蛋白富集在代谢途径,多数下调蛋白富集在信号转导途径,如抑制和激活蛋白1、磷脂酰肌醇三激酶-丝氨酸/苏氨酸激酶和环磷酸腺苷信号途径。经Western blot试验验证,细胞代谢相关蛋白超氧化物歧化酶2(SOD2)表达上调,信号转导相关蛋白LRP1表达上调、c-Jun表达下调,细胞骨架损伤相关蛋白TPM4表达上调、Cdc42EP1表达下调。结论Crk1/2与CrkL缺失可通过调节代谢途径及相关信号转导途径导致足细胞损伤,TPM4、SOD2、LRP1、c-Jun和Cdc42EP1参与损伤过程,具体分子机制值得进一步探讨。 展开更多
关键词 Crk1/2 crkl 足细胞损伤 蛋白质组学
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HDAC抑制剂通过miR-200c调控靶向CRKL抑制乳腺癌细胞增殖和侵袭的研究
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作者 谭洁 李婧婷 边学海 《中国实验诊断学》 2019年第9期1624-1628,共5页
目的探讨HDAC-miR200c-CRKL信号轴在HDAC抑制剂抗乳腺癌的作用机制。方法 RT-PCR和Western-blotting印迹分析,验证miR-200c、HDAC IIa成员及CRKL在乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞中的表达;miR-200c模拟物转染到MDA-MB-231中以过表达miR-2... 目的探讨HDAC-miR200c-CRKL信号轴在HDAC抑制剂抗乳腺癌的作用机制。方法 RT-PCR和Western-blotting印迹分析,验证miR-200c、HDAC IIa成员及CRKL在乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞中的表达;miR-200c模拟物转染到MDA-MB-231中以过表达miR-200c,观察miR-200c对乳腺癌增殖,侵袭和迁移所起作用及CRKL的蛋白表达;miR-200c抑制剂转染MDA-MB-231细胞,再用HDAC抑制剂处理,观察miR-200c和CRKL表达,及乳腺癌细胞的增殖和侵袭能力。结果 miR-200c在乳腺癌细胞中呈低表达,与CRKL和HDAC IIa成员的表达水平呈反比。用miR-200c模拟物转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后,过表达miR-200c使CRKL表达下调了约68%;显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭和迁移。用miR-200c抑制剂转染MDA-MB-231细胞,再用HDAC抑制剂处理后miR-200c表达上升,CRKL表达下降;降低乳腺癌细胞的增殖和侵袭;用100nM miR-200c抑制剂转染下调miR-200c可部分削弱HDAC抑制剂对乳腺癌细胞增殖和侵袭的抑制。结论 HDAC抑制剂的抗乳腺癌作用部分是通过调节miR-200c直接靶向CRKL来实现的。HDAC-miR200c-CRKL信号轴可能成为乳腺癌新的诊断标志物和潜在的治疗靶点。。 展开更多
关键词 乳腺癌 HDAC抑制剂 MIR-200C crkl
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miR-200b通过靶向CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖
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作者 陈亮宇 杨旸 刘云会 《解剖学研究》 CAS 2017年第4期259-263,276,共6页
目的研究hsa-miR-200b对人U251胶质瘤细胞增殖的影响及相关作用机制。方法将miR-200b过表达和表达沉默质粒分别稳定转染至胶质瘤U251细胞,qRT-PCR验证转染效率,CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化,qRTPCR以及Western blot方法检测的CRKL的... 目的研究hsa-miR-200b对人U251胶质瘤细胞增殖的影响及相关作用机制。方法将miR-200b过表达和表达沉默质粒分别稳定转染至胶质瘤U251细胞,qRT-PCR验证转染效率,CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化,qRTPCR以及Western blot方法检测的CRKL的m RNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点。将CRKL过表达和表达沉默质粒载体分别稳定转染至U251胶质瘤细胞,使用CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化。分别建立miR-200b和CRKL的稳定双转染U251细胞系,使用CCK-8法检测对各组细胞增殖水平的变化。结果与对照组相比,miR-200b过表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖并且抑制CRKL在U251胶质瘤细胞的m RNA和蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证了miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点;CRKL过表达显著增强胶质瘤U251细胞增殖能力;CRKL过表达有效阻断了miR-200b抑制胶质瘤U251细胞增殖的作用。结论 miR-200b能够通过靶向下调CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖。 展开更多
关键词 人胶质瘤U251细胞 miR-200b 接合蛋白家族 增殖
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连接蛋白CRKL在正常血细胞和表达BCR/ABL细胞中的研究进展
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作者 朱海燕 《国外医学(输血及血液学分册)》 2000年第5期345-348,共4页
CRKL是由22号染色体q11的crkl基因编码的含SH2、SH3结构域的39kDa的连接蛋白。CRKL羧基端SH3结构域与C3G、SOS、PI3-K、HPK1、c-ABL或BCR/ABL结合,CRKL氨基端SH2结构域与酪氨酸磷酸化的蛋白如CBL、HEF1、CAS、STAT5或paxillin结合,在正... CRKL是由22号染色体q11的crkl基因编码的含SH2、SH3结构域的39kDa的连接蛋白。CRKL羧基端SH3结构域与C3G、SOS、PI3-K、HPK1、c-ABL或BCR/ABL结合,CRKL氨基端SH2结构域与酪氨酸磷酸化的蛋白如CBL、HEF1、CAS、STAT5或paxillin结合,在正常造血细胞和白血病细胞信号传导中起重要的连接作用,并参与形成白血病。CRKL是慢性粒细胞白血病中BCR/ABL的主要底物,与BCR/ABL和c-ABL形成连接复合物,在TPO、EPO、STEEL因子等造血生长因子及β整合素、B细胞、T细胞受体的信号传导系统中酪氨酸被磷酸化,与相应的信号传导分子连接而发挥作用。 展开更多
关键词 连接蛋白 造血生长因子 慢性粒细胞白血病 crkl
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CRKL and CK2 <i>β</i>over Expression Are Independent Predictors of Patients Survival in Endometrioid Endometrial Carcinoma
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作者 Randa Mohamed Kaf Wafaa El-Beshbishi +6 位作者 Ahmed A. Obaya Rham Z. Ahmed Khaled Fathy Helal Mohamed SH. Ramadan Abdelwahab S. Almoregy Ibrahim A. Heggy Ola A. Harb 《Open Journal of Obstetrics and Gynecology》 2019年第4期479-493,共15页
Context: The prognostic significance of expression of V-Crk avian sarcoma virus CT10 oncogene homolog-like (CRKL) and Protein kinase CK2 β in endometroid carcinoma is not fully clarified. Aim: To assess the prognosti... Context: The prognostic significance of expression of V-Crk avian sarcoma virus CT10 oncogene homolog-like (CRKL) and Protein kinase CK2 β in endometroid carcinoma is not fully clarified. Aim: To assess the prognostic values and clinicopathological roles of CRKL and CK2 β expression in endometroid carcinoma by correlation their expression levels with clinicopathological parameters, response to therapy, and recurrence of the tumor and patients survival. Settings: Faculty of Medicine, Zagazig University, and Mansoura University. Methods: CRKL and CK2 β expressions were evaluated in 50 paraffin blocks EC patients that were followed up for 5 years. The relationship between their level of expressions, clinicopathological criteria and prognosis of patients was analyzed. Statistical analysis used: SPSS 22.0 for windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) and MedCalc windows (Software bvba 13, Ostend, Belgium). Results: High expression of CRKL and CK was positively correlated with higher grade of the tumor (p = 0.004 and 0.006 respectively), presence of L.N metastases (p = 0.009 and 0.003 respectively), presence of distant metastases (p = 0.029 and 0.003 respectively) and advanced FIGO stage (p 0.001), poor response to therapy (p = 0.046 and 0.005 respectively), higher incidence of recurrence of the tumor after therapy (p = 0.004 and 0.048 respectively), higher incidence of cancer progression p = 0.018 and 0.044 respectively), poor PFS (p = 0.008 and 0.013 respectively), and OS rates 展开更多
关键词 crkl CK2 β Endometroid Carcinoma IMMUNOHISTOCHEMISTRY Prognosis
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Hsa_circ_0000392靶向miR-145-5p/CRKL轴调控细胞外调节蛋白激酶通路影响宫颈癌的辐射敏感性
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作者 田君 王宁 +4 位作者 王琛 吴大鹏 王晨辉 丁肖杰 王玙珂 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期879-891,共13页
目的探讨hsa_circ_0000392(circ_0000392)对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响及其潜在作用机制。方法收集2016—2019年于河南大学淮河医院首次经病理诊断明确的42例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织,根据患者对放射治疗的反应,将癌组织... 目的探讨hsa_circ_0000392(circ_0000392)对宫颈癌细胞放疗敏感性的影响及其潜在作用机制。方法收集2016—2019年于河南大学淮河医院首次经病理诊断明确的42例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织,根据患者对放射治疗的反应,将癌组织分为放疗敏感和放疗耐受。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测宫颈癌放疗敏感和放疗耐受肿瘤组织及宫颈癌Hela、SiHa细胞中circ_0000392、miR-145-5p、CT10激酶调节子样蛋白(CRKL)的表达。将siRNA circ_0000392、miR-145-5p mimic、miR-145-5p inhibitor、pcDNA 3.1-CRKL及其阴性对照分别转染至Hela和SiHa细胞,细胞经辐射诱导后,采用克隆形成实验检测细胞存活能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Bcl-2、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)1/2和细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2的表达。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000392、miR-145-5p和CRKL之间的靶向关系。裸鼠成瘤实验观察circ_0000392对宫颈癌体内放疗敏感性的影响。结果circ_0000392和CRKL在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中均呈高表达,miR-145-5p在宫颈癌放疗耐受组织和癌细胞中呈低表达(均P<0.05)。si-circ_0000392#1+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(78.67±10.97)个和(71.00±9.54)个,均低于si-Ctrl+6 Gy组[分别为(176.00±22.27)个和(158.33±17.56)个,均P<0.05],细胞凋亡率分别为(41.55±3.40)%和(31.41±3.29)%,均高于si-Ctrl+6 Gy组[分别为(15.91±1.37)%和(13.70±1.89)%,均P<0.05],si-circ_0000392#1+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于si-Ctrl+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平低于si-Ctrl+6 Gy组(均P<0.05)。si-circ_0000392#1+miR-145-5p inhibitor+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(171.33±25.01)个和(137.00±21.66)个,均高于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(84.67±17.79)个和(71.00±11.00)个,均P<0.05],细胞凋亡率分别为(17.41±2.58)%和(15.96±1.25)%,均低于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组[分别为(40.29±2.92)%和(30.82±2.34)%,均P<0.05],si-circ_0000392#1+miR-145-5p inhibitor+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平低于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平高于si-circ_0000392#1+inhibitor NC+6 Gy组(均P<0.05)。circ_0000392能够与miR-145-5p靶向结合,而CRKL是miR-145-5p的下游靶基因。miR-145-5p mimic+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(74.33±10.02)个和(66.00±12.17)个,均低于mimic NC+6 Gy组[分别为(197.67±17.21)个和(157.67±11.59)个,均P<0.05],细胞凋亡率分别为(45.58±2.16)%和(32.10±3.55)%,均高于mimic NC+6 Gy组[分别为(15.85±2.45)%和(13.99±1.69)%,均P<0.05],miR-145-5p mimic+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平高于mimic NC+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平低于mimic NC+6 Gy组(均P<0.05)。miR-145-5p mimic+pcDNA-CRKL+6 Gy组Hela和SiHa细胞的克隆形成数分别为(158.00±15.88)个和(122.33±13.65)个,均高于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(71.33±8.02)个和(65.67±12.22)个,均P<0.05],细胞凋亡率分别为(19.50±3.45)%和(17.04±0.94)%,均低于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组[分别为(44.33±2.36)%和(32.05±2.76)%,均P<0.05],miR-145-5p mimic+pcDNA-CRKL+6 Gy组细胞中Bax蛋白表达水平低于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组,Bcl2蛋白表达水平高于miR-145-5p mimic+pcDNA组+6 Gy组(均P<0.05)。sh-circ_0000392组小鼠肿瘤体积较小,肿瘤重量降低(均P<0.05)。小鼠移植瘤组织中circ_0000392、miR-145-5p、CRKL mRNA相对表达水平降低减少,CRKL、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白相对表达水平降低,Bax蛋白相对表达水平升高(均P<0.05)。结论circ_0000392可增强宫颈癌细胞的放疗敏感性,其作用机制可能与靶向miR-145-5p调控CRKL/ERK信号通路有关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 hsa_circ_0000392 miR-145-5p CT10激酶调节子样蛋白 细胞外调节蛋白激酶信号通路 放疗敏感性
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