别旁茶苷对LPS诱导CRL-1790细胞释放炎症因子的影响及作用机制

目的研究别旁茶苷对LPS诱导CRL-1790细胞释放炎症因子的影响,初步探讨其作用机制。方法应用MTT法检测别旁茶苷对细胞活性的影响,以别旁茶苷提前干预细胞后加入LPS诱导细胞发生炎症反应,采用ELISA法检测IL-1、IL-8和TNF-α的分泌,Western blot法检测NF-κB p65及PXR的蛋白表达水平,RT-PCR法检测代谢酶CYP3A4和CYP1A2的mRNA相对表达水平。结果 10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L的别旁茶苷对细胞活性无显著影响,确定为实验浓度;与正常对照组比较,LPS可显著刺激细胞分泌IL-8,但对IL-1和TNF-α的分泌无显著影响;与LPS诱导组比较,别旁茶苷显著抑制IL-8的分泌和NF-κB p65的蛋白表达水平,显著提高PXR的蛋白表达水平及CYP3A4和CYP1A2的mRNA表达水平。结论别旁茶苷对CRL-1790细胞具有显著的抗炎作用,其可能机制是通过上调PXR的表达,抑制NF-κB p65的表达从而减少IL-8的分泌,并上调代谢酶CYP3A4、CYP1A2的表达从而保护肠黏膜。

丹参酮ⅡA对过氧化氢损伤人血管内皮细胞的保护作用

目的:研究丹参酮ⅡA对过氧化氢(H2O2)损伤人脐静脉血管内皮细胞株(CRL-1730)的保护作用。方法:H2O2诱导人血管内皮细胞损伤,用四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活数量,用比色法测细胞培养液中过氧化物丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)的活性,并对细胞进行流式细胞仪测定,观察丹参酮ⅡA对细胞周期的影响。结果:丹参酮ⅡA对H2O2损伤的CRL-1730具有保护作用,它能抑制H2O2引起的血管内皮细胞减少,其作用主要是使S期和G2M期细胞比率剂量依赖性增加,G0/G1期细胞比率剂量依赖性减少,还能抑制过氧化氢损伤的CRL-1730释放MDA和LDH。结论:丹参酮ⅡA具有减轻H2O2损伤,保护血管内皮细胞的作用。

BET抑制剂对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞生长及外周血Th17细胞数量和相关细胞因子表达的影响

目的:探讨溴结构域和超末端结构域(bromodomain and extra terminal domain, BET)抑制剂对弥漫性大B细胞淋巴瘤CRL-2630细胞生长的影响,以及对弥漫性大B细胞淋巴瘤BALB/c-nu裸鼠外周血中辅助性T细胞17(helper T cells, Th17)数量和相关细胞因子表达的影响。方法:培养弥漫性大B细胞淋巴瘤株CRL-2630,使用不同浓度BET抑制剂(2、4、8、16、32 nmol/L)处理48 h, 32 nmol/L BET抑制剂处理不同时间(12、24、36、48 h),CCK-8法检测各处理细胞活性;集落形成实验检测不同BET抑制剂浓度处理后细胞集落形成能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测不同BET抑制剂浓度处理后细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR与Western blot检测32 nmol/L BET抑制剂处理CRL-2630细胞48 h后HMGA1 mRNA与蛋白的表达水平;构建HMGA1过表达载体并通过脂质体介导法转染CRL-2630细胞,并用32 nmol/L BET抑制剂处理48 h,检测细胞活性与凋亡情况;构建裸鼠弥漫性大B细胞淋巴瘤模型并采集外周血,流式细胞术检测Th17细胞比例,ELISA法检测相关细胞因子的含量。结果:在一定范围内,BET抑制剂呈剂量依赖性地抑制CRL-2630细胞的活性,32 nmol/L BET抑制剂以时间依赖性地抑制CRL-2630细胞的活性。随着BET抑制剂处理浓度的增高,CRL-2630细胞集落形成能力逐渐下降,凋亡率逐渐升高。32 nmol/L BET抑制剂处理CRL-2630细胞48 h后,细胞中HMGA1的mRNA和蛋白水平均明显下降。pc DNA3.4-HMGA1转染CRL-2630细胞再使用BET抑制剂处理后,细胞的活性升高而凋亡率明显下降。弥漫性大B细胞淋巴瘤裸鼠经BET抑制剂作用后,外周血Th17细胞比例和IL-6、IL-17、IL-23含量较生理盐水组明显下降。结论:BET抑制剂能有效抑制CRL-2630细胞活性,并诱导其凋亡,在一定范围内呈时效和量效关系。BET抑制剂还可以抑制弥漫性大B细胞淋巴瘤裸鼠外周血Th17细胞数量和相关细胞炎性因子的分泌,其作用机制可能与HMGA1的表达下调有关。

白细胞介素13对瘢痕成纤维细胞增生及转录因子c-fos表达的影响

目的研究白细胞介素13(interleukin 13,IL-13)对瘢痕成纤维细胞增生和转录因子c-fos表达的影响。方法 MTT比色法检测IL-13不同质量浓度(50、100、150、200μg.L-1)下CRL-1762细胞的增殖水平,对照组不加IL-13;RT-PCR检测100μg.L-1 IL-13在不同培养时间(15、30、60min)CRL-1762细胞表达c-fos mRNA的水平,对照组不加任何试剂;Western Blotting检测100μg.L-1 IL-13在不同培养时间(30、60、120min)对CRL-1762细胞表达c-fos蛋白质的水平,对照组不加任何试剂。结果 IL-13组CRL-1762细胞吸光度较对照组明显增强,且细胞增殖率与IL-13浓度有关;IL-13诱导CRL-1762细胞30min后,c-fos mRNA的表达较其余各组均明显增强(P<0.05);IL-13诱导CRL-1762细胞60min后,c-fos蛋白质的表达较其余各组均有显著升高(P<0.05)。结论IL-13对CRL-1762细胞的生长有明显的促进作用,并在一定范围内呈浓度依赖性;IL-13能够诱导CRL-1762细胞c-fos mRNA和蛋白质的表达瞬时增强。

BRCC3/NLRP3促进子宫内膜异位症炎癌转化中的机制

目的:探讨NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体的活化在子宫内膜异位症(EMT)进展为EMT相关性卵巢癌(EAOC)过程中的作用及其机制。方法:选取2018年4月至2019年6月上海市长宁区幼保健院收治的EAOC、EMT、正常子宫内膜(CON组)组织标本各15例及患者的临床资料,利用免疫组织化学染色法、WB法检测EAOC、EMT和CON组织中NLRP3、caspase-1和IL-1β及含BRCA1/BRCA2的复杂亚基3(BRCC3)的表达水平。构建过表达BRCC3质粒和si-NLRP3质粒并转染EMT细胞CRL-7566,通过WB法检测转染后细胞中BRCC3蛋白的表达水平,利用MTT法、流式细胞术及Transwell实验分别检测转染后细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭能力的变化。对过表达BRCC3组细胞进行干扰NLRP3实验,通过WB法检测干扰后BRCC3和NLRP3蛋白的表达水平,检测干扰后细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭能力的变化。结果:EAOC和EMT组织中NLRP3、caspase-1、IL-1β和BRCC3的表达水平较CON组均呈明显升高(均P<0.01),且EAOC组织中NLRP3与BRCC3的表达呈正相关(r=0.65,P<0.01)。在CRL-7566细胞中过表达BRCC3显著促进细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制细胞凋亡(均P<0.01),敲减NLRP3则抑制CRL-7566细胞的上述表型(均P<0.01),过表达BRCC3增强NLRP3的表达水平(P<0.01),而干扰BRCC3则抑制NLRP3表达(P<0.01);干扰NLRP3可以部分逆转BRCC3对细胞凋亡的抑制作用(P<0.01)、对细胞迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.01)的促进作用。结论:EAOC和EMT组织中NLRP3和BRCC3均呈高表达,过表达BRCC3可促进CRL-7566细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制细胞凋亡,与EMT向EAOC转化有关,BRCC3/NLRP3是潜在的EAOC炎癌转化预测标志物及治疗靶点。

异鼠李素对H_2O_2损伤内皮细胞的保护作用

目的:观察异鼠李素对H2O2损伤的CRL-1730细胞的活性、凋亡率以及细胞周期的影响。方法:用55,27.5,13.75 mg.L-13种质量浓度的异鼠李素与培养的CRL-1730细胞置于37℃,5%CO2饱和湿度培养箱中共同孵育24 h,再用H2 O2氧化损伤4 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测异鼠李素对H2 O2损伤的细胞活性的影响,流式细胞仪测定异鼠李素对H2O2损伤的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:异鼠李素能够剂量依赖性增强CRL-1730细胞活性,与模型组吸光度(A)0.459比较,高剂量组A 0.503,升高了0.044,有显著性差异(P<0.01),中剂量组A 0.48,升高了0.027,差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组无明显影响。异鼠李素能够剂量依赖性减少受损细胞的凋亡,降低早期凋亡率,与模型组凋亡率77.78%相比,高剂量组69.28%和中剂量组72.50%差异均有统计学意义(P<0.05)。异鼠李素能抑制H2 O2引起的CRL-1730细胞减少,表现在使G0/G1期细胞比例减少,模型组G0/G1期细胞比例为82.23%,异鼠李素高,中,低剂量组该值分别为69.43%,67.05%,69.56%,均有显著性差异;S期和C2/M期细胞比率增加,模型组S期和C2/M期细胞比率为11.77%和1.91%,异鼠李素高剂量组为23.39%和7.18%,中剂量组为29.73%和3.23%,低剂量组为27.42%和3.01%。差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:异鼠李素对H2O2损伤的CRL-1730细胞具有保护作用。