8型肺炎球菌荚膜多糖分子大小对结合效果及结合物抗原性的影响

目的评价8型肺炎球菌荚膜多糖(capsular polysaccharide of Streptococcus pneumoniae type 8,CPS8)分子大小对多糖蛋白结合物物理化学(理化)性质的影响,并对结合效果最优的多糖蛋白结合物进行抗原一致性评价。方法采用高压均质法制备不同分子大小的CPS8;采用1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯活化法,制备以白喉类毒素无毒突变体CRM197为载体的CPS8蛋白结合物CPS8-CRM197,并检定其理化性质;采用核磁共振氢谱及核磁共振碳谱分析降解前后多糖糖链结构的变化情况,同时采用抑制ELISA评价CPS8-CRM197结合物的抗原一致性。结果高压均质法制备的CPS8相对分子质量在69000~268000;CPS8相对分子质量>200000时会过度交联,<100000时结合效果较差;CPS8在相对分子质量100000~200000之间的CPS8-CRM197结合物游离多糖含量均<10%,游离蛋白含量均<5%。核磁共振氢谱及核磁共振碳谱结果表明,降解前后多糖糖链结构未发生改变,特异基团得到完整的保留;抑制ELISA表明不同CPS8-CRM197结合物对8型肺炎球菌抗血清抑制的半数效应浓度在同一数量级内,分别为0.005、0.003、0.005μg/ml,抗原性具有一致性。结论多糖结合疫苗制备工艺中,应将CPS8分子大小控制在相对分子质量100000~200000之间,该范围内多糖所制备的多糖蛋白结合物理化性质较优、抗原一致性较好。