反义阻断CROC-1基因表达导致细胞生长变慢

目的 :建立CROC - 1基因表达被阻断的FL -CROC - 1-细胞系 ,研究CROC - 1基因在细胞生长中的作用。方法 :运用反义技术将新近发现的人泛素缀合酶样蛋白基因CROC - 1的适当长度cDNA片断克隆到本室改建的真核细胞表达载体pMAMneo -amp-中 ,经限制性内切酶图谱分析筛选出反向插入的表达CROC - 1反义RNA的重组质粒。将此反义表达重组质粒 (pMAM -antiCROC - 1)用改良的磷酸钙法转染人羊膜FL细胞并用含G418的培养基筛选 ,测定G418抗性的FL -CROC - 1-细胞系的生长速度。结果 :建立的FL-CROC - 1-细胞系在地塞米松诱导下CROC - 1基因表达被反义抑制后 ,其生长速度较对照FL细胞及转染了载体pMAMneo -amp-的FL细胞 (FL -MAMneo)的明显要慢 (P <0 0 5 )。结论 :本研究成功地建立了CROC -1基因表达被阻断的FL -CROC - 1-细胞系 ,并提示CROC - 1基因编码的泛素缀合酶样蛋白在细胞生长中起正调控作用。

UEV蛋白,一个保守的类泛素结合酶蛋白家族

泛素（Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ）是一个高度保守的蛋白。泛素结合酶参与各种真核生物的代谢过程。泛素结合过程中所必需的泛素结合酶在真核生物中是高度保守的。近几年来，人们发现了一组与泛素结合酶具有较高同源性的蛋白，包括ＭＭＳ２，ＣＲＯＣ－１等。但这组蛋白都不具有泛素结合酶与泛素结合的活性半胱氨酸残基，它们被命名为泛素结合酶变体蛋白（ＵｂｉｑｕｉｔｉｎｃｏｎｊｕｇａｔｉｎｇＥ２ｅｎｚｙｍｅＶａｒｉａｎｔＵＥＶ）。有实验表明，ＵＥＶ蛋白参与真核生物的细胞分化，细胞周期调节，ＤＮＡ修复等过程，而且与肿瘤发生有关。ＵＥＶ蛋白的发现提示，泛素结合过程可能存在着一种新的调节过程。