CRP构象与动脉粥样硬化作用机制研究进展

C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是经典的炎症标志物,近年研究发现CRP可能参与了动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发展过程中的各个环节,包括脂质沉积、补体激活、细胞因子的合成释放、炎性细胞的趋化和细胞信号传导等。最近的研究证实CRP可以在某些特殊的环境下由五聚体结构(pCRP)解聚成为单聚体结构(mCRP)。这种构象的转变可能有助于解释在动脉粥样斑块内发生的局部炎症反应。但是CRP的这两种结构具体的作用机制尚不完全清楚,因此CRP构象的差别可能是导致对CRP的许多研究结论相互矛盾的主要原因。目前对CRP基因多态性与CRP水平表达的关系已明确,但是对其与不同构象CRP表达水平关系的研究甚少。对CRP构象的研究,将有助于进一步正确认识AS的发生发展机制。

C反应蛋白单体的制备,鉴定及其初步应用研究

C反应蛋白单体参与了机体的炎性反应,在多种无菌性炎症及动脉粥样硬化形成过程中起着重要作用,因此获得高纯度具有免疫原性的C反应蛋白单体(Monomeric CRP,mCRP)对于mCRP的诊断及指导靶向mCRP的治疗具有重要的临床应用价值。研究将CRP五聚体(Pentameric CRP,pCRP)在解离缓冲液(40 mmol/L Tris+500 mmol/L NaCl+2 mmol/L EDTA+8 mol/L脲)中解离60 d后采用Superdex 200 Increase10/300G分子筛分离解离产物,利用SDS-PAGE电泳及免疫印迹(WB)鉴定mCRP蛋白的纯度及免疫原性,化学发光免疫分析法研究急性心肌梗死患者血清样品中mCRP与pCRP交叉反应性;SDS-PAGE及WB结果显示pCRP在解离缓冲液中解离60 d后可部分解离为mCRP,进一步采用分子筛分离后分段收集分离产物,SDS-PAGE及WB显示解离获得的mCRP在相对分子质量约23000位置见单一明显条带,提示采用解离+分子筛方法可获得高纯度具有免疫原性的mCRP,随后作者采用化学发光免疫分析法建立的检测体系提示获得的mCRP抗原与mCRP单克隆抗体具有良好的反应性,交叉反应试验提示mCRP与pCRP不具有交叉反应性。本研究提示采用解离法结合分子筛技术可以获得具有免疫原性高纯度的mCRP蛋白,并可用于临床mCRP的定量检测。