我国广西人群CRYAB基因rs3212227与rs6894567遗传多态性研究

目的研究α-B晶状体蛋白(CRYAB)基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs3212227、rs6894567的各基因型和等位基因在广西人群中的分布频率,对比其在不同地区人群间的分布差异。方法采用单碱基延伸的聚合酶链反应(PCR)技术和DNA测序法检测199名我国广西人的CRYAB基因rs3212227、rs6894567位点的多态性,对比国际人类基因组单倍型图谱计划(Hapmap)上欧洲人群、非洲人群、日本人群及我国北京人群的SNP分型数据,分析5个人群的CRYAB基因SNP位点rs3212227、rs6894567的基因型和等位基因频率。结果在我国广西人群中存在CRYAB基因rs3212227、rs6894567多态性,与欧洲和非洲人群相比,CRYAB基因多态性的分布频率差异有统计学意义(P<0.05);与日本人群和北京人群比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CRYAB基因SNP位点rs3212227、rs6894567基因型和等位基因在广西人群中的分布频率与其他地区人群的比较结果存在差异,这种差异可能是导致一些疾病在不同地区间的发病率和临床表现存在差异的因素之一。

猪CRYAB基因原核表达载体的构建及表达条件的优化

将猪CRYAB基因cDNA连接到原核表达载体pRSET A中,构建重组表达质粒pRSET A-CRYAB,经酶切和测序鉴定后,转入表达宿主大肠杆菌BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表明,如期获得了重组蛋白的表达,其主要以包涵体的形式存在,且最佳条件为诱导温度25℃,时间15 h,IPTG浓度为0.2 mmol/L。

αB-晶状体蛋白CRYAB基因重组表达载体的构建及分子生物学鉴定

目的:构建人晶状体蛋白CRYAB基因与真核表达载体pIRES2-DsRed-Express的重组体,为研究人晶状体蛋白CRYAB基因的功能奠定基础.方法:根据人晶状体蛋白CRYAB基因的核苷酸序列,设计并合成分别带有酶切位点的引物,从pMD 18T-CRYAB基因克隆载体中扩增出CRYAB基因外显子片段,与载体pIRES2-DsRed-Express连接构建人晶状体蛋白CRYAB基因的表达载体,转化入大肠杆菌DH5α中.经抗生素筛选阳性克隆,通过酶切图谱分析、菌落PCR和测序鉴定所构建的表达载体.结果:构建的载体经PCR、酶切鉴定和测序证实插入方向正确,表达阅读框正确,载体构建成功.结论:重组人晶状体蛋白CRYAB基因表达载体的构建为研究CRYAB基因的功能及进一步研究先天性白内障的发病机制奠定了基础.

致命性婴儿型肥大型肌原纤维肌病2例报告并文献复习

目的探讨CRYAB基因变异相关致命性婴儿型肥大型肌原纤维肌病的临床特点及预后。方法回顾分析2例致命性婴儿型肥大型肌原纤维肌病患儿的临床资料,并结合文献复习。结果 2例患儿均为男性,发病年龄分别为3个月和8个月,均表现为躯干肌肉僵硬,限制性呼吸困难。血肌酸激酶升高,血、尿筛查无显著异常。彩色多普勒超声心动图未见异常。MRI示腹壁肌肉、大腿肌肉等骨骼肌增厚。肌电图示肌强直电位。1例患儿行肌活检示肌源性损害。2例患儿基因检测均显示CRYAB基因c. 3 G>A的纯合核苷酸变异,受检者父母均为杂合子;DMPK型基因均未见异常。结论躯干肌肉强直引起限制性呼吸困难时应行基因检查和肌肉活检,需排除CRYAB基因变异相关致命性婴儿型肥大型肌原纤维肌病。

一汉族先天性核型白内障家系的基因突变研究

目的检测一汉族先天性核型白内障家系的基因突变位点。方法收集家系内患者及眼部表型正常成员外周静脉血标本并提取家系成员基因组DNA样本。采用白内障致病基因靶向捕获与高通量DNA测序技术在81个先天性白内障已定制候选致病基因panel中筛选可能致病突变。采用PCR技术扩增所有家系成员可疑突变基因外显子片段,并联合Sanger测序验证家系患者突变位点是否为该家系致病突变。结果与NCBI、HGMD专业版数据库比对,验证突变位点是否为致病突变或全新突变。结果临床表型分析表明,家系内所有患者在三岁之前均开始出现不同程度的视力下降,均呈现核型白内障表现。靶向捕获联合高通量测序检测到所有家系内患者均携带CRYAB基因的杂合错义突变(c.59C>G,p.P20R),即1号外显子第59位核苷酸碱基由胞嘧啶突变为鸟嘌呤,此突变导致第20位氨基酸残基由脯氨酸变为精氨酸,而家系内正常人不携带该突变。结论CRYAB基因杂合错义突变c.59C>G可导致先天性核型白内障的发生。

一例婴儿致死性型肥大型肌原纤维肌病病例报道

婴儿致死性肥大性肌原纤维肌病(Fatal infantile fattening myofibrillar myopathy)是肌原纤维肌病(Myofibrillar myopathy,MFM)的一种特殊亚型,是由于CRYAB基因突变引起的α-B-晶状体蛋白病。该病有其自身的临床特点,在儿童中极其罕见,复习国内外文献,迄今为止已被报道的文献资料共4篇,共计20例病例,笔者通过复习有关文献,旨在综合分析致命性婴儿型肥大型肌原纤维病例的临床特点,以提高儿科医生对该病的认识。

CRYAB基因与白内障的相关性研究

目的探讨CRYAB基因与先天性白内障的关系。方法本研究对一个先天性白内障家系进行调查和资料收集,抽取家系所有人和100名正常对照者外周静脉血,采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增疾病相关候选基因目的片段,对扩增产物进行双向测序,分析致病基因,预测基因改变对相应蛋白质是否影响。结果基因测序结果显示CRYAB基因第一外显子区域的第59位碱基发生了C>G的改变(c.59C>T),此突变为错义突变,致使翻译的脯氨酸变为精氨酸;该突变使突变位点和附件区域氨基酸疏水性增大,且突变较大可能为有害突变。结论本次研究发现一个先天性白内障家系中CRYAB c.59C>G突变,该突变为错义突变,进一步支持了CRYAB基因与先天性白内障的关系。

婴儿致死性僵直性肌原纤维肌病的临床、骨骼肌病理和遗传学特征

目的探讨婴儿致死性僵直性肌原纤维肌病的临床、骨骼肌病理和遗传学特征。方法回顾性分析2017年2月至2021年4月深圳市儿童医院诊治的10例确诊为婴儿致死性僵直性肌原纤维肌病患儿的临床表现、实验室检查和基因检测结果。对其中3例患儿实施头颅、骨骼肌磁共振成像(MRI)、肌电图检查,2例实施肌肉活检。结果患儿分布为东北和华东地区各1例,华南地区8例。10例患儿中,男8例,女2例。患儿之间无血缘关系,出生时均正常。患儿发病年龄为2~12个月。10例患儿主要临床表现为进行性腹直肌(8例)、颈部肌(7例)、后背肌(2例)和肋间肌(1例)僵硬,导致呼吸衰竭。血清肌酸激酶轻度至中度升高(436~5 804 IU/L)(参考范围:24~229 IU/L)。肌电图示复合重复放电,未见肌强直电位发放。股外侧肌和腹直肌活检示肌纤维变性、坏死和空泡变性,未见明显炎症细胞浸润。改良格莫瑞染色部分视野可见红色颗粒状异常沉积物。骨骼肌免疫组织化学染色可见desmin蛋白大量沉积。电镜下可见肌纤维的肌节结构严重紊乱,Z盘破坏及颗粒状沉积物。10例患儿全外显子基因测序均表现为分别来自于父母的CRYAB基因的c.3G>A,p.Met1?纯合变异,父母均为杂合变异。结论腹直肌僵硬等中轴肌受累是婴儿致死性僵直性肌原纤维肌病的临床特征。CRYAB基因c.3G>A,p.Met1?变异是中国患儿的热点突变。