转录因子CSL-GST融合蛋白表达载体的构建及其表达纯化

目的构建转录因子CSL的GST原核表达载体pGEX-6p-1-CSL,并检测其在原核生物大肠杆菌中的表达。方法通过反转录及聚合酶链反应从人胰腺癌细胞系Hpac细胞中获得编码CSL的cDNA,定向克隆至C端带GST蛋白标签序列的原核表达载体pGEX-6p-1中,原核表达的GST-CSL蛋白经Gluta-thione-Sepharose 4B和PreScission蛋白酶纯化后用凝胶迁移实验分析其活性。结果 pGEX-6p-1-CSL经原核表达及纯化后得到了纯化的CSL蛋白。结论成功构建了转录因子CSL的GST原核表达载体PGEX-6p-1-CSL。

肺形侧耳变温结实相关基因Ppcsl-1的克隆及功能预测

CSL(CBF1/RBP-Jκ/suppressor of hairless/LAG-1)转录因子家族在真菌发育和细胞分化过程中扮演重要角色。前期研究已构建了肺形侧耳变温结实相关消减杂交文库,并从中筛选到一个代表csl基因部分序列的EST。通过TAIL PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)技术克隆了该基因(Pleurotus pulmonarius csl-1,简写为Ppcsl-1),并利用RACE(rapid-amplification of c DNA ends)技术获得该基因的c DNA全长。Ppcsl-1 c DNA全长2 991bp,编码一个996个氨基酸组成的蛋白(命名为Pp CSL-1)。进化分析显示在担子菌CSL中,Pp CSL-1与糙皮侧耳Pleurotus ostreatus CSL(PoC SL)亲缘关系最近。荧光定量检测结果表明Ppcsl-1在菌丝经过5℃12h冷处理之后的表达量最高,表明其有可能被冷刺激诱导表达并在开启子实体形成的过程中起重要作用。