CT抗原KM-HN-1 HLA-A*0201限制性表位预测及其与HLA-A*0201结合强度分析

目的通过对CT抗原（cancer-testis antigen）KM-HN-1进行HLA-A＊0201限制性表位预测，并对候选表位肽与HLA-A＊0201分子结合亲和力及复合物稳定性进行分析，为探索基于KM-HN-1的免疫治疗奠定基础。方法利用基于蛋白酶体剪切位点特异性的算法PAProc及基于肽MHC-I结合的算法BIMAS和SYFPEITHI对KM-HN-1进行HLA-A＊0201限制性表位预测．合成KM-HN-1相关候选表位肽KM-HN-I321-329（KLLPFRETV），KM-HN-I303-211，（FLPTAPPNV），KM-HN-I629-637。（TLLQIIETV），KM-HN-I87-95（ILNKSIIEV），KM-HN-I538-596。（QMMEALDQL）及阳性对照肽HBVcAg18-27（FLPSDFFPSV）；对这些合成肽与HIA-A＊0201分子结合亲和力及其复合物稳定性根据文献报道的方法进行分析。结果KM-HN-I321-329（KLLPERETV）结合亲和力最低，KM-HN—I203-211（FLPTAPPNV）结合亲和力最高，其余3条肽结合亲和力介于2者之间；稳定性实验（DC50）结果显示：KM-HN-I538—546（QMMEALDQL）DC50小于2h，KM—HN-I321-329（KLLPERETV）的DC50介于2～4h之间，KM-HN-I87-95。（ILNKSIIEV）的DC50介于6～8h之间，KM-HN-I233-211（HLPTAPPNV）及KM-HN-I629—633（TLLQIIETV）的DC50均大于8h。结论基于蛋白酶体剪切位点特异性的算法及基于肽MHC-I结合的算法对KM-HN-1进行HLA-A＊0201限制性表位预测，结合候选表位肽与HLA-A＊0201分子结合的亲和力与复合物稳定性实验分析，为该抗原HLA-A＊0201限制性表位的鉴定奠定了基础。

CT抗原与肝癌

人们发现肿瘤细胞和正常细胞不仅在增殖能力方面有所不同，而且在肿瘤细胞表面有一些很特殊的抗原。人类自身的免疫系统之所以有时候奈何不了肿瘤细胞。其重要原因之一就是这些肿瘤抗原的免疫原性较弱，免疫系统无法将肿瘤细胞与正常细胞准确区分出来并杀灭。于是研究者们期待着能够准确地找到这些肿瘤特异抗原，进而采取各种方法，帮助人体自身的免疫细胞识别表达这些肿瘤抗原的肿瘤细胞并消灭它们。

肿瘤睾丸抗原CT45-5基因小干扰RNA表达载体的构建及干扰效果鉴定

目的:构建肿瘤睾丸抗原CT45家族中5号成员基因(CT45-5)的小干扰RNA(siRNA),并检测其对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5基因及外源脆性组氨酸三联体(Fhit)基因表达的干扰效果。方法:根据CT45-5基因序列,通过生物信息学方法对靶向CT45-5基因的siRNA进行预测,从中筛选出2对合理的CT45-5-siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSilencer 2.1-U6 Hygro中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆进行测序鉴定;将构建的CT45-5-siRNA重组载体转染人宫颈癌细胞HeLa及HeLa/Fhit细胞,Western印迹检测siRNA对HeLa及HeLa/Fhit细胞内源性CT45-5及外源Fhit基因表达的干扰效果。结果:构建了2个CT45-5-siRNA重组质粒,其中一条对CT45-5基因具有明显的干扰作用,并且Fhit基因表达也被抑制。结论:构建的CT45-5-siRNA为与CT45-5功能相关的基因研究奠定了基础。

肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用

目的:用建立的CT45-5-siRNA研究肿瘤睾丸抗原CT45-5在DNA损伤应答中的作用。方法:通过靶向CT45-5基因小干扰RNA(siRNA)下调CT45-5的表达,用MTT比色法检测经喜树碱和依托泊苷处理后细胞对DNA损伤诱导剂的敏感性,用流式细胞技术检测电离辐射后细胞周期的变化。结果:在DNA损伤诱导剂处理后,在脆性组氨酸三联体(Fhit)高表达细胞中下调CT45-5的表达可以使细胞表现出更强的G2期阻滞及对DNA损伤诱导剂更耐受,而在Fhit缺失表达的细胞中却没有此现象。结论:CT45-5可能是以Fhit依赖的途径参与了DNA损伤应答。

癌—睾丸抗原与结直肠癌关系的研究

结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,国内发病率在0.01％-0.02％,欧美发达国家发病率更高。目前结直肠癌的治疗主要采用手术治疗、放射治疗和化学治疗3种传统的治疗方法,但未能明显改善病人的生活质量和远期生存率。因此,急需研发新的辅助治疗方法,与传统治疗方法结合对患者进行综合性治疗。免疫治疗是其中的一种新的且更具有针对性的治疗方法,而寻找理想的特异性靶抗原是肿瘤免疫治疗的关键。

胃癌中肿瘤/睾丸抗原的表达研究及NY-ESO-1蛋白的自身抗体检测

目的: 分析胃癌中11种CT抗原(cancer/testisantigen)基因的表达分布及NY ESO 1蛋白引发的自身体液免疫应答,为胃癌的特异性肿瘤疫苗治疗提供依据。方法: 利用RT-PCR方法,检测101例胃癌患者肿瘤标本和对应正常胃黏膜中11种CT抗原基因的表达。ELISA方法检测抗NY ESO 1抗体。利用NY ESO 1的单抗E978,应用免疫组化方法检测组织切片中NY ESO 1抗原物质。结果: 101例胃癌患者中, 74. 3%的患者至少表达1种检测的CT抗原基因。12例患者表达NY ESO 1mRNA, 5例可以检测到NY ESO 1抗原蛋白以及针对NY ESO 1抗原的体液免疫反应。结论: 胃癌中表达多种CT抗原基因,表达率较高的MAGE 3,SSX 4和NY ESO 1 /LAGE 1蛋白等可作为肿瘤疫苗的备选抗原,其中NY ESO 1蛋白的免疫原性得到验证。CT抗原的多价肿瘤疫苗在胃癌治疗中具有一定的可行性。

SPAG9在子宫腺肌病中的表达及临床意义

精子相关抗原9（sperm associated antigen 9,SPAG9）是新近发现的睾丸癌抗原（cancer testis antigens,CT抗原）,属于C-Jun-NH2termina kinase（JNK）相互作用蛋白家族（JIP）的新成员。SPAG9高度表达于多种肿瘤,如子宫内膜癌、粒细胞白血病、外阴癌、肾癌等。子宫腺肌病（adenomyosis,AM）是一类具有生长功能的子宫内膜腺体和间质向子宫肌层＂恶性＂进行性浸润,并在其中弥漫性生长的疾病,因此作者推测SPAG9可能在子宫腺肌病中存在异常表达，相关研究国内外未见报道。本研究将检测子宫腺肌病中SPAG9的表达情况，以期为子宫腺肌病的诊断及防治提供新的靶点。

抗人SSX2分子单克隆抗体的制备及初步应用

目的 制备抗滑膜肉瘤X断点 2 (Synovialsarcoma,Xbreakpoint2 ,SSX2 )分子的单克隆抗体 ,探讨SSX2的组织分布及其与肿瘤的关系。方法 应用淋巴细胞杂交瘤技术制备小鼠源性抗人SSX2mAb。应用间接ELISA测定腹水效价 ,间接免疫荧光胞内染色检测抗体与肿瘤细胞系的反应性。用酶免疫组织化学技术 ,对SSX2分子在人正常睾丸组织和直肠癌组织的分布进行了鉴定。结果 获得 1株分泌抗SSX2mAb的杂交瘤细胞株LX SSX2 ,间接ELISA测定腹水效价达 1× 10 - 5,为IgG1(κ)亚类 ,能识别K5 6 2胞内天然及变性SSX2分子。在酶免疫组织化学技术应用中获得较满意效果 ,SSX2分子表达于睾丸精原细胞的细胞核内 ,并在直肠癌标本中检出到SSX2的表达。结论 LX SSX2mAb有很好的特异性 。

FATE/BJ-HCC-2基因转染对肿瘤细胞生物学行为的影响

目的:观察FATE/BJ-HCC-2基因对肿瘤细胞生物学行为的影响,探讨FATE/BJ-HCC-2与肿瘤进展之间的关系。方法:将FATE/BJ-HCC-2基因转染肝癌细胞系Bel-7402细胞,3H-TdR掺入法和Transwell实验对转染细胞的增殖和侵袭能力进行检测;PCR方法检测细胞内的骨桥蛋白(OPN)和整合素连接激酶(ILK)基因的表达水平。结果:细胞增殖实验结果显示FATE/BJ-HCC-2转染肿瘤细胞的3H-TdR掺入值显著高于Mock细胞的掺入值,统计学分析二者差别有显著性意义(P<0.01)。FATE/BJ-HCC-2基因表达促进肝癌细胞系Bel-7402细胞的增殖,并且这种增殖效应可被特异性抗-FATE/BJ-HCC-2抗体所阻断。Transwell实验显示,转染FATE/BJ-HCC-2的细胞,其穿膜数量明显比对照组多,差别有显著的统计学意义(P<0.01)。对肿瘤细胞转移相关的细胞信号分子进行检测发现,骨桥蛋白(OPN)和整合素连接激酶(ILK)基因的表达水平上调。结论:肿瘤细胞获得FATE/BJ-HCC-2基因表达后其增殖和侵袭能力增强,FATE/BJ-HCC-2基因表达可能与肿瘤细胞的转移有一定关系。提示CT抗原的表达不仅仅是肿瘤发生中的伴随产物,它可能在肿瘤的发生发展过程中起到一定作用。

PAGE-4单克隆抗体的制备及表达分布

目的 :制备抗PAGE 4mAb并鉴定其特异性及敏感性 ,应用该抗体在蛋白质水平上分析PAGE 4在正常与疾病组织中的表达 .方法 :以PAGE 4为抗原免疫BALB/c小鼠 ,利用杂交瘤技术建立稳定分泌抗PAGE 4mAb的杂交瘤细胞系 .采用WesternBlot及ELISA等方法鉴定抗体的特异性和敏感性 .应用正辛酸 饱和硫酸铵方法纯化抗体 .利用免疫组织化学方法对PAGE 4在正常与疾病组织中的表达进行分析 .结果 :获得 4株分泌特异性抗PAGE 4mAb的杂交瘤细胞株 ,mAb具有较高的特异性与敏感性 .在正常男女生殖系统组织如 :睾丸、前列腺、子宫中以及正常胰腺组织中有PAGE 4的表达 ,在前列腺癌、子宫内膜腺癌中PAGE 4高表达 .PAGE 4在蛋白质水平上的表达格局与以往有关PAGE 4在mRNA水平上的报道一致 .结论 :成功获得抗PAGE 4mAb ,为研究PAGE 4定位及功能提供了重要工具 .

敲减XAGE-1b基因表达降低ACCM和A673肿瘤细胞的增殖能力

XAGE是通过生物信息学方法发现的新一类肿瘤-睾丸抗原(cancer/testis antigen,CT抗原)基因,其主要表达亚型为XAGE-1b.已有的研究表明,该基因可能与肿瘤细胞的生长相关.本研究构建了针对XAGE-1b进行RNA干扰的重组腺病毒载体Adv-Sh1和Adv-Sh2.半定量和定量RT-PCR显示,Adv-Sh1比Adv-Sh2对XAGE-1b的干扰效率更高.细胞荧光干扰实验显示,Adv-Sh1对XAGE-1b有显著的干扰作用.在细胞增殖和集落形成实验中,感染Adv-Sh1后的细胞增殖能力显著降低(P<0.01),形成的单克隆集落数也显著减少.研究结果表明,下调XAGE-1b基因表达使ACCM和A673肿瘤细胞的增殖能力均有降低,提示XAGE-1b在肿瘤生长过程中可能发挥重要作用.本研究为进一步深入研究XAGE-1b的功能和致癌机制打下了良好基础.

XAGE-1基因在肺癌组织中的表达及其与临床特点的关系

背景与目的研究证实XAGE-1作为一种癌胚抗原在多种肿瘤中高表达。本研究旨在探讨XAGE-1基因在肺癌组织中的表达水平及其与临床特点的关系。方法肺癌患者85例,提取肺癌组织和癌旁组织总RNA,巢式PCR反应扩增XAGE-1四种剪接体基因,分析基因表达情况及其与临床特点的关系。结果 32.94%(28/85)肺癌患者癌组织阳性表达XAGE-1基因,在各种类型肺癌中,59.46%(22/37)的腺癌与21.74%(5/23)鳞癌患者癌组织阳性表达XAGE-1基因;XAGE-1b基因的表达与肺癌病理类型有相关性(P<0.05),腺癌阳性表达率明显高于鳞癌,而与肺癌的性别、年龄及临床分期无相关性(P>0.05)。结论 XAGE-1基因在肺癌尤其腺癌组织中高表达,该基因可以作为免疫治疗的靶基因。

肿瘤-睾丸抗原CT45-5的表达纯化及多克隆抗体的制备

目的:原核表达、纯化肿瘤-睾丸抗原CT45-5基因,并制备多克隆抗体,以研究其在Fhit特异的信号通路中的作用。方法:设计出特异针对CT45-5的引物,通过RT-PCR扩增出CT45-5的编码基因,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,经ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性。结果:原核表达和纯化了CT45-5,并获得了其多克隆抗体,抗体效价达到1∶12800,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的CT45-5蛋白。结论:肿瘤-睾丸抗原CT45-5能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究CT45-5的功能奠定了基础。

XAGE-1基因在胃癌组织中的表达及其临床意义分析

目的探讨XAGE-1四种不同剪接体基因在胃癌组织中的表达水平及与临床特点的关系.方法胃癌患者85例提取胃癌组织及癌旁组织总RNA,RT-PCR检测XAGE-1四种剪接体的表达,并分析其表达与临床特点的关系.结果 49.41%(42/85)的胃癌组织阳性表达XAGE-1 mRNA,其中41.18%(35/85)癌组织表达XAGE-1b,8.23%(7/85)胃癌组织表达XAGE-1d mRNA.XAGE-1b mRNA的表达与肺癌性别、年龄、组织分型、TNM分期、肿瘤大小、浸润程度及淋巴结转移无相关性(P>0.05).结论 XAGE-1b基因在胃癌组织中高表达可以作为肿瘤疫苗的靶位点.

取材部位对男性疑慢性尿道炎传播性病原检测结果的影响

对110例男性疑有慢性尿道炎患者,取早晨排尿前尿道口分泌物、前列腺液、精液,分别作淋球菌(NG),解脲支原体(Uu)培养,沙眼衣原体(CT)抗原直接检测.尿道口分泌物阳性率最高,59.1%(65例),其中Uu阳性35例(31.8 %),CT抗原阳性20例(18.2%),NG10例阳性(9.1%),霉菌5例阳性(4.5%).前列腺液阳性率34. 5%,其中Uu阳性25例(22.7%),CT抗原阳性10例(9.0%),NG阳性3例(2.7%).精液阳性率8.2%,其中Uu阳性7例(6.4%),CT抗原阳性2例(1.8%),NG阴性.在阳性病例中4例梅毒血浆反质素快速试验阳性.两种病原以上混合感染13例.取材于早晨排尿前尿道口分泌物阳性率明显高于前列腺液和精液(x^2= 13.32,P<0.001 ,且要作多种病原检测和药物敏感试验,以指导治疗.