白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205菌株发酵条件优化及其次生代谢产物性质研究

[目的]为了获得白刺链霉菌（Streptomyces albospinus）CT205菌株摇瓶发酵最佳配方和适宜的发酵条件,并初步研究其次生代谢产物的性质。[方法]通过碳、氮源单因子试验、正交试验和主要发酵条件优化试验,以菌浓度和抑菌圈大小为指标确定其最佳发酵培养基配方和发酵条件。通过GF254薄板层析、生物测定、紫外检测、稳定性试验,研究菌株CT205发酵产生的次生代谢产物性质。[结果]菌株CT205发酵最佳培养基配方：蔗糖20.0g·L^-1,可溶性淀粉30.0g·L^-1,蛋白胨2.0g·L^-1,黄豆粉8.0g·L^-1,MgSO4·7H2O0.5g·L^-1,K2HPO4·7H2O0.5g·L^-1,NaCl2.0g·L^-1,CaCO33.0g·L^-1;最佳发酵温度为28～30℃,初始pH8.0;CT205发酵产生的抗菌活性成分的Rf值为0.68,其在λ=258nm处有1个强紫外吸收峰。在不同温度（60、80和100℃）、紫外光照射不同时间（5、10和30min）处理下,活性成分的抗菌活性与对照相比变化不大,在用酸碱处理后,其抗菌活性比对照略有下降。[结论]获得了菌株CT205优化的发酵培养基配方及适宜的发酵条件,其次生代谢产物对热和紫外光均表现出较强的稳定性,但偏酸、偏碱的环境对其活性有一定的影响。

白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205菌株固体发酵及防控草莓根腐病的研究

[目的]为了明确草莓根腐病的致病因子,降低其发病率,从草莓病株根部分离病原菌,并研究拮抗菌白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205固体制剂对草莓根腐病的防控效果。[方法]从草莓病株根部分离出了1株病原菌Y3,采用形态观察及r DNA-ITS序列分析对病原菌Y3进行鉴定,用平板对峙培养测定拮抗菌CT205对菌株Y3的抑制作用,利用最佳固体发酵培养基及发酵条件对拮抗菌CT205进行固体发酵,通过连作致病土盆栽试验评价菌株CT205固体制剂对草莓根腐病的防控作用。[结果]初步鉴定病原菌Y3为尖孢镰刀菌(Fusarium sp.)。试验发现拮抗菌CT205对病原菌Y3的抑制作用较强,CT205固体发酵6 d,其制剂中菌含量达到2.2×109CFU·g-1。盆栽试验表明,施用CT205固体菌剂对草莓生长有一定的促生作用,对草莓根腐病的防治效果为61.18%。[结论]采用拮抗菌CT205固体制剂防控草莓根腐病具有较高的潜在应用价值。

白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205次生代谢产生活性物质的分离纯化及结构鉴定

目的为了确定白刺链霉菌(S.albospinus)CT205次生代谢产生抗菌活性物质的结构。方法S.albospinus CT205进行液体摇瓶发酵,对发酵上清液进行溶媒萃取、减压浓缩、薄板检测Rf值,采用制备型薄板分离获得单体化合物。紫外扫描检测吸收峰的波长范围,以HPLC-TOF-HR-MS检测物质分子量,并检测其核磁共振波谱(1HNMR、13CNMR)及红外光谱。结果GF254薄板在氯仿:乙酸乙酯:甲醇:甲酸(16:1:2:0.04)的层析系统展层时,Rf值为0.68的组分具有抗菌活性。紫外扫描显示在λ=215nm处有最大吸收峰,HPLC-TOF-HR-MS检测分析一级质谱、二级质谱表明活性物质分子量为282.2,该物质与放线酮分子量相同,1HNMR、13CNMR检测其骨架结构,红外光谱佐证活性物质各功能基团(羰基,羟基,氨基等)的存在。结论确定活性物质成分为放线酮,又名环己酰亚胺(cycloheximide)。

白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205产环己酰亚胺含量测定方法的建立

建立白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)CT205代谢产环己酰亚胺含量的检测方法,为菌株CT205的开发利用提供技术支持。采用高效液相色谱法(HPLC)、生物活性法和分光光度法等三种检测手段分别测定菌株CT205发酵上清液及粗提物中活性物质环己酰亚胺(Cycloheximide)的含量。三种方法测定环己酰亚胺标准品均具有较好的线性关系,其中相关系数R_(HPLC)^(2)法(0.9992)>R_(生物活性法)^(2)(0.9937)≈R_(分光光度法)^(2)(0.9965)。HPLC法及生物活性法分别测定CT205发酵液及粗提物中活性物质含量分别为72.87、1555.70及66.15、1259.00μg/mL,HPLC法与生物活性法测定的发酵上清液中活性物质含量误差在+6.72μg/mL。HPLC检测方法的准确性及灵敏度均高于生物活性法,适用于样品含量的准确测定,生物活性法适用于菌株诱变筛选及条件优化实验产生的大批量样品的测定及比较,分光光度法不适用检测杂质含量较多的样品。

一株拮抗放线菌的鉴定及其对黄瓜枯萎病的生防效应研究

鉴定从土壤中分离的一株拮抗放线菌(编号CT205),探索其防治植物病害的潜能。通过形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析研究菌株CT205的分类地位,采用平板对峙法测定其抗菌活性,利用连作致病土盆栽试验评价其对黄瓜枯萎病的防治作用。初步鉴定菌株CT205为白刺链霉菌(Strep-tomyces albospinus),菌株CT205对供试的枯草杆菌、啤酒酵母、小麦纹枯、土豆青枯等植物病原菌均有不同程度的抑制作用,其中对黄瓜枯萎病、西瓜枯萎病、烟草疫霉3种供试病原真菌的抑制作用较强。盆栽试验表明,施用放线菌CT205对黄瓜生长有一定的促生作用,对黄瓜枯萎病防治效果为51.85%,放线菌CT205菌液和有机肥复合制作成生物有机肥,防治效果达81.85%。研究表明,放线菌CT205具有潜在的应用价值。