基于转录组学分析驴油生酮饮食下CT26^(+)结肠癌肿瘤的变化

该研究旨在通过转录组测序技术筛选出驴油生酮饮食(DonkeyOilKetogeniDiet,DOKD)影响CT26^(+)结肠癌肿瘤生长的相关基因,挖掘对DOKD响应的基因及其代谢通路,为解析驴油生酮饮食抑制肿瘤生长的机制提供依据。该研究选取一致性较好的CT26^(+)结肠癌BALB/c模型小鼠,随机分为2组,每组3个重复,分别饲喂驴油生酮饮食(DOKD)与正常饮食(ND)。饲喂10d后处死摘取肿瘤组织,测量肿瘤的质量及体积,并利用RNA-Seq技术和生物信息分析方法进行转录组测序及结果分析。DOKD组与ND组小鼠体质量无显著差异,肿瘤明显小于ND组。与ND组相比,DOKD组共18个基因差异表达,其中12个DEGs上调,6个DEGs下调。这些DEGs注释到170条GO条目,其中生物过程(BP)类别124条,细胞组成(CC)类别2条,分子功能(MF)类别44条;涉及18条KEGG通路,主要富集在IL-17信号通路、趋化因子信号通路、细胞因子受体相互作用信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等重要通路。此外,该研究通过Western blot进一步研究了TLR4/NF-κB信号通路在在肿瘤中的作用。综上,DOKD对CT26^(+)结肠癌肿瘤有明显抑制作用,该作用可能与IL-17信号通路、趋化因子信号通路、细胞因子受体相互作用信号通路、TNF信号通路等通路密切相关。

大黄素对CT26结肠癌小鼠调节性T细胞功能的影响

目的:探讨大黄素对CT26结肠癌小鼠调节性T细胞免疫抑制功能的影响。方法:CT26结肠癌小鼠分为阴性对照组、大黄素治疗组和荷瘤模型组,给药14 d,分别检测以下指标:小鼠不同组织T细胞IFN-γ的分泌、效应细胞CD8+CD3+T细胞的比例、血清细胞因子IFN-γ、TNF-β1、IL-10的水平、不同组织CD4+CD25+Tregs IL-10的分泌。结果:大黄素明显升高CD8+CD3+T细胞在肿瘤局部的比例(P<0.05);大黄素显著提高外周血和淋巴结中T细胞分泌IFN-γ的能力(P<0.05);大黄素显著降低IFN-γ、TNF-β1、IL-10在血清中的水平(P<0.01);大黄素有抑制CD4+CD25+Tregs分泌IL-10的作用(P<0.01)。结论:大黄素可能通过影响Tregs的免疫抑制功能发挥抗肿瘤的作用。

白及多糖通过调节免疫作用抑制结肠癌CT26荷瘤小鼠肿瘤生长

目的:研究白及多糖(BSP)对结肠癌CT26荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用。方法:从30只BALB/c小鼠中随机选取6只作为对照组(Control),剩余24只小鼠右前肢皮下接种CT26细胞构建CT26结肠癌小鼠模型,建模成功后将模型裸鼠分为荷瘤模型组(Model)、白及多糖低剂量组[BSP-L,100 mg/(kg·d)]、白及多糖高剂量组[BSP-H,400 mg/(kg·d)]和阳性药物香菇多糖组[LNT,150 mg/(kg·d)],每组6只。所有小鼠连续灌胃给药3周,其中对照组和模型组每天给予与药物组等量生理盐水灌胃。比较各组肿瘤体积、肿瘤抑制率及免疫器官指数。MTT法检测脾脏淋巴细胞增殖活性,ELISA法检测血清免疫因子IL-2和IFN-γ水平;流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群;Western blot检测各组小鼠脾脏组织中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与Model组相比,BSP-H组和LNT组移植瘤体积显著缩小,肿瘤重量显著降低,抑瘤率显著增加(P<0.01)。与Control组相比,Model组小鼠脾脏指数、胸腺指数、脾脏淋巴细胞活性、血清中免疫因子IL-2和IFN-γ水平、外周血CD4^(+)/CD8^(+)及脾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与Model组相比,BSP-H组小鼠脾脏指数、胸腺指数、脾脏淋巴细胞活性、血清中免疫因子IL-2和IFN-γ水平、外周血CD4^(+)/CD8^(+)及脾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平显著上升(P<0.05);而BSP-L组与Model组相比,以上各指标变化均无显著性差异(P>0.05)。结论:白及多糖对结肠癌CT26荷瘤小鼠肿瘤生长有抑制作用,可能与增强荷瘤小鼠抗肿瘤免疫、激活TLR4/NF-κB信号通路有关。

消癌解毒方对CT26荷瘤小鼠抗结肠癌药效及机制研究

目的：观察消癌解毒方对小鼠CT26结肠癌细胞皮下移植瘤的抑制作用及其作用机制。方法：将以插块法接种结肠癌细胞皮下移植瘤成功的CT26荷瘤小鼠随机分为模型组（Veh）、阳性药物奥沙利铂组（OXA）、和消癌解毒方组（XJD）,观察各组小鼠体质量、肿瘤体积、肿瘤质量、计算抑瘤率。采用Western-Blot、免疫组化法检测肿瘤组织样品中F4/80,TGF-β1,IL-6和IL-1β的表达,并与模型组和奥沙利铂组进行比较,研究消癌解毒方对结肠癌细胞皮下移植瘤的抑制作用及其作用机制。结果：消癌解毒方能够比较明显地抑制瘤体生长,改善结肠癌小鼠生存质量,该组小鼠肿瘤组织中F4/80,TGF-β1,IL-6和IL-1β表达量均高于模型组（P〈0.01,P〈0.05）。结论：消癌解毒方能够通过增强肿瘤部位巨噬细胞的活性,增加细胞因子IL-1β,IL-6的表达;同时增加荷瘤小鼠肿瘤部位TGF-β1的表达来达到杀伤和诱导肿瘤细胞的凋亡,两种途径提高机体对肿瘤的免疫抑制,来延缓结肠癌的发生发展。

刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌细胞ct26体外增殖和细胞周期的影响

目的研究刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌ct26细胞体外增殖和细胞周期的影响,并探讨其作用的分子机制。方法取对数生长期的小鼠结肠癌ct26细胞,建立弓形虫与ct26复合感染度(moi)分别为1∶1、2∶1、4∶1、8∶1、16∶1的共培养试验模型,台盼兰排斥试验连续7d绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测8∶1共培养模型组6h、12h、24h、48h细胞周期改变;采用半定量RT-PCR方法分别检测ct26细胞cyclinB1、cdc2基因转录水平变化;Westernblot方法检测细胞周期蛋白cyclinB1蛋白水平变化。结果台盼兰排斥试验发现各比例组弓形虫均能有效抑制小鼠ct26细胞的体外增殖,且呈现前4d缓慢抑制,4d后细胞大量死亡的现象,以8∶1模型组的增殖抑制作用最明显,感染7d后细胞抑制率达80.77%(P<0.01);流式细胞仪检测发现8∶1模型组弓形虫可在各作用时间明显改变ct26细胞周期分布,使G0/G1期细胞百分比下降,G2/M期百分比显著升高(P<0.01),24h达到作用高峰,使G2/M期百分比升高12.77%,48h则细胞G2/M期百分比下降;弓形虫感染ct26细胞3～24h,细胞cdc2转录水平在各个时间点未见明显变化,细胞cyclinB1从转录水平和蛋白水平均呈现为感染3h时表达增强,随后各时间点均明显降低的现象,cyclinB1基因转录水平在感染后24h只达到对照组的16.55%。结论弓形虫RH株速殖子可明显抑制小鼠结肠癌ct26细胞体外增殖,感染前期以诱导细胞发生G2/M期阻滞为主要机制,细胞周期蛋白cyclinB1活性下降在G2/M期阻滞中起主要作用。

大黄[庶虫]虫丸抑制趋化因子配体17表达对CT26小鼠结肠癌的影响

目的观察大黄[庶虫]虫丸对趋化因子配体17(CCL17)在CT26结肠癌小鼠模型中表达的影响,研究其可能的抗肿瘤作用机制。方法复制CT26结肠癌小鼠模型,将模型小鼠随机分为模型组,大黄[庶虫]虫丸高、中、低剂量组(48、24、12 g·kg^-1·d-1),另设正常组。计算各组小鼠结肠癌的抑瘤率;用流式细胞术和免疫荧光法分别检测外周血、肿瘤归巢淋巴结和肿瘤组织细胞中调节性T细胞(Tregs)百分比,肿瘤组织中CCL17的表达,趋化因子受体4(CCR4)在外周血和肿瘤组织细胞表面的表达百分比和肿瘤组织细胞核转录因子κB(NF-κB)p65的表达。结果大黄[庶虫]虫丸能明显抑制小鼠结肠癌的生长,且呈剂量依赖性;大黄[庶虫]虫丸各剂量组肿瘤组织中Tregs明显减少(P<0.05),肿瘤组织中CCL17的荧光强度明显下降(P<0.05);模型组的CCR4+Tregs百分比和CCL17荧光强度最高,大黄[庶虫]虫丸各剂量组随着用药浓度增加,CCR4+Tregs百分比和CCL17荧光强度均表现为依次降低(P<0.05);大黄[庶虫]虫丸能显著抑制结肠癌细胞NF-κB的活化(P<0.05),NF-κB p65的荧光比例显著降低。结论大黄[庶虫]虫丸可通过减少肿瘤组织中Tregs的聚集,降低肿瘤组织中CCL17的表达,下调CCR4在Treg细胞表面的表达比率,降低结肠癌细胞NF-κB p65在细胞内的表达,从而抑制CT26小鼠结肠癌细胞的生长。

刚地弓形虫RH株速殖子协同VP-16体外杀伤小鼠结肠癌细胞ct26的作用

目的探讨刚地弓形虫RH株速殖子对小鼠结肠癌ct26细胞周期的影响及其协同细胞周期特异性抗癌药依托泊甙(VP-16)对ct26细胞的杀伤作用。方法建立弓形虫RH株速殖子与小鼠结肠癌ct26细胞不同比例的共培养模型(虫/细胞比例分别为2:1、4:1、8:1、16:1),流式细胞仪检测24h细胞周期改变;以虫细胞比例2:1预先感染ct26细胞24h,CCK-8比色法观察不同浓度VP-16对细胞增殖抑制的改变;荧光显微镜观察VP-16(40μg/mL)对感染虫体细胞的形态学改变。台盼蓝染色观察不同浓度VP-16分别作用弓形虫RH株速殖子悬液(1×106/mL)2h、4h、12h、24h的虫体存活度改变。琼脂糖凝胶电泳观察VP-16(20μg/mL)对虫体DNA影响。结果流式细胞仪检测发现各浓度弓形虫速殖子均可明显改变ct26细胞24h周期分布,使G0/G1期细胞百分比下降,G2/M期百分比显著升高(P<0.01)。2×106个速殖子感染细胞24h可使S期和G2期细胞百分比共同增长14.92%。CCK-8比色法检测结果显示虫细胞比例2:1预先感染ct26细胞24h可有效增强各浓度VP-16对ct26细胞的杀伤作用;Hochest33258染色结合荧光显微镜观察到虫体胞质寄生形态及VP-16诱导感染细胞凋亡典型形态;10μg/mL及更高浓度VP-16作用弓形虫4h以上均可使虫体全部死亡;琼脂糖凝胶电泳发现VP-16(20μg/mL)可使弓形虫速殖子DNA呈现典型的云梯状条带。结论弓形虫RH株速殖子可使小鼠结肠癌ct26细胞发生G2/M期,可有效增强细胞周期特异性抗癌药VP-16的抗癌作用,且弓形虫增殖亦明显受抑并发生凋亡。

芬戈莫德对CT26结肠癌细胞表达Foxp3的影响

目的探讨芬戈莫德(FTY720)抑制小鼠结肠癌发展及影响CT26细胞Foxp3表达的机制。方法体内体外检测CT26细胞Foxp3表达率,ELISA检测小鼠血清的转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平,流式细胞仪检测小鼠外周血、肿瘤回流淋巴结和肿瘤组织Foxp3+调节性T细胞(Tregs)的比例,计算抑瘤率,观察不同浓度FTY720对上述指标的影响。结果 FTY720明显抑制肿瘤生长,抑制CT26细胞Foxp3的表达,降低血清TGF-β1的水平,且剂量越大抑制效果越好(P<0.05);降低结肠癌小鼠外周血、肿瘤回流淋巴结,尤其是肿瘤组织Foxp3+Tregs的比例(P<0.05)。结论 FTY720抑制小鼠结肠癌的发展与肿瘤局部Foxp3+Tregs减少相关,而CT26结肠癌细胞Foxp3表达下调可能是FTY720抑制Tregs的重要原因。

复方肠泰方通过抑制Akt/mTOR/p70S6K通路诱导CT26细胞自噬的研究

目的:研究复方肠泰方对结肠癌CT26细胞增殖和自噬的影响及其可能的作用机制。方法:采用MTT法检测不同浓度复方肠泰方对CT26细胞增殖的影响,MDC染色法和透射电镜观察复方肠泰方干预CT26细胞后是否形成自噬体。蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的蛋白表达。采用自噬诱导剂雷帕霉素研究复方肠泰方是否诱导CT26细胞自噬性死亡。采用蛋白质印迹法检测Akt/mTOR/p70S6K通路相关蛋白表达水平。结果:复方肠泰方可以抑制CT26细胞的增殖;透射电镜观察到复方肠泰方干预的细胞中有类似自噬溶酶体结构;MDC结果显示,与空白对照组相比,复方肠泰方组细胞荧光强度增强;复方肠泰方能增加LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1的表达水平(P<0.05);与复方肠泰方组相比,复方肠泰方和雷帕霉素共同处理使CT26细胞的病死率显著增加(P<0.05);此外,复方肠泰方干预后,CT26细胞Akt、mTOR和p70S6K的蛋白表达基本不变,p-Akt、p-mTOR和p-p70S6K的蛋白表达较空白对照组显著降低(P<0.05)。结论:复方肠泰方可能通过抑制Akt/mTOR/p70S6K通路诱导结肠癌CT26细胞自噬,从而发挥抗肿瘤作用。

盐酸芬戈莫德对结肠癌小鼠肿瘤免疫相关因子的影响

目的通过盐酸芬戈莫德对CT26荷瘤小鼠肿瘤免疫相关因子功能的影响,探讨盐酸芬戈莫德的抗肿瘤作用机制。方法实验小鼠分为阴性对照组,盐酸芬戈莫德高、中、低剂量治疗组和荷瘤模型组,给药14d,分别检测以下指标:肿瘤生长抑制率、胸腺指数、脾脏指数、小鼠不同组织T细胞干扰素γ(IFN-γ)的分泌、效应T细胞(CD8^+CD3^+T细胞)的比例、不同组织调节性T细胞(CD4^+CD25^+Tregs)白细胞介素10(IL-10)的分泌。结果盐酸芬戈莫德明显升高CD8^+CD3^+T细胞在肿瘤局部的比例(P <0.05);盐酸芬戈莫德显著提高外周血和淋巴结中T细胞分泌IFN-γ的能力(P <0.05);盐酸芬戈莫德有抑制CD4^+CD25^+Tregs分泌IL-10的作用(P <0.05)。结论盐酸芬戈莫德可能通过影响Tregs的免疫抑制功能发挥抗肿瘤的作用。

结直肠癌肝转移动物模型的建立

目的比较几种结直肠癌肝转移动物模型的建立方法,确定一种比较适合的结直肠癌肝转移动物模型。方法以BALB/c鼠为研究对象,随机分组,分别经脾脏、直肠、腹腔按不同剂量(0.1mL、0.2mL、0.3mL、1.0mL)(浓度为1×106个/mL)注入小鼠结肠腺癌细胞(CT26)悬液,其中腹腔组无1.0mL剂量,卡方检验比较三组动物模型组内及组间肝转移率。结果三种方法均能复制出结直肠癌肝转移动物模型,脾脏组0.1mL、0.2mL、0.3mL、1.0mL肝转移率分别为50.0%、77.2%、50.0%、27.0%;直肠注射组0.1mL、0.2mL、0.3mL、1.0mL肝转移率为50.0%、53.1%、16.7%、6.7%;腹腔注射组0.1mL、0.2mL、0.3mL肝转移率为10.0%、22.2%、10.0%。结论经脾脏注射0.2mL(1×106个/mL)BALB/c鼠结肠腺癌细胞株(CT26)是一种建立结直肠癌肝转移动物模型成功率较高的方法。而经肛门直肠注射0.1mL或0.2mL(1×106个/mL)BALB/c鼠结肠腺癌细胞株(CT26)是一种建立结直肠癌肝转移动物模型简便及符合结直肠癌肝转移规律的方法。

西达本胺通过调控肿瘤相关巨噬细胞功能增强对结肠癌细胞的抑制作用

目的:探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAM)对西达本胺(chidamide)抑瘤效果的影响及其作用机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞系Ana1和Raw264.7,用肿瘤上清诱导成为TAM。用西达本胺处理TAM后,用比色法检测HDAC酶活性,用q PCR检测TAM中IL-6、IL-12、TNF、IL-1β等细胞因子的m RNA表达水平,用Wb实验检测西达本胺处理后TAM中NF-κB和STAT3蛋白的表达水平。将TAM和结肠癌CT26细胞混合后,接种到裸鼠体内构建皮下移植瘤模型,灌喂西达本胺(3.87 mg/kg),观察西达本胺对皮下移植瘤生长的影响,并通过免疫组化检测移植瘤组织中PCNA、F4/80、Arg1、i Nos蛋白的表达水平。结果:西达本胺抑制CT26细胞的增殖活性,在裸鼠体内西达本胺单独处理CT26细胞皮下移植瘤的抑制率约为18.7%;当TAM存在时,西达本胺处理可以将移植瘤抑制率提高到57.2%。西达本胺可以抑制TAM的HDAC酶活性,进而使得组蛋白乙酰化水平升高;西达本胺能影响核内转录因子NF-κB水平,并且降低Arg1、IL-6、IL-12表达,提高iNos、Tnf、IL-1β表达。结论:西达本胺通过抑制TAM中HDAC活性和调控细胞因子表达,增强其对于结肠癌CT26细胞的抑制作用。

不同途径注射肿瘤RNA纳米脂质体疫苗对结肠癌生长的影响

目的本研究旨在比较CT26肿瘤细胞RNA负载于纳米脂质体后,使用不同途径注射所引起的生物体抗肿瘤生长的作用差异。方法将提取的肿瘤RNA载入到纳米脂质体制备成肿瘤RNA纳米脂质体疫苗,然后进行脂质体疫苗表征。肿瘤RNA纳米脂质体疫苗粒径为(120.0±12.1)nm,电位为(3.39±0.56)mV。最后在小鼠不同部位注射肿瘤RNA纳米脂质体疫苗,检测分析不同部位注射对小鼠结肠癌移植瘤生长的影响。结果通过肿瘤RNA纳米脂质体疫苗对移植瘤小鼠进行不同途径注射治疗,结果显示,相比皮下注射,腹腔注射能够更加有效地增强生物体抗肿瘤免疫反应,抑制移植瘤生长。最后,比较小鼠重要脏器的H&E染色,均未见脏器有明显的器质性病变。结论通过腹腔注射肿瘤RNA纳米脂质体疫苗比皮下注射能够更加有效地增强机体抗肿瘤免疫反应。

绿原酸抗小鼠CT26结肠癌作用的研究

目的考察绿原酸对小鼠CT26结肠癌移植瘤生长的抑制作用。方法以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率及对脾脏、胸腺指数的影响为指标,并结合肿瘤细胞的病理切片,评价绿原酸对CT26结肠癌的抑制作用。结果与阴性组比较,从抑瘤率及组织病理切片,可知绿原酸对CT26结肠癌移植瘤有明显的抑制作用。结论绿原酸具有一定的抗CT26结肠癌作用。

苦豆子多糖SAP的结构表征及其对CT26抗肿瘤活性研究

目的研究苦豆子多糖SAP的一级结构及其抗肿瘤活性。方法采用高效凝胶渗透色谱法、红外广谱、GC-MS结合NMR法解析SAP的结构;考察SAP对CT26荷瘤小鼠的抗肿瘤活性。结果 SAP为半乳甘露聚糖,其相对分子质量为9.6×105,以1,4-β-D-Man为主链,在其某些C-6的位置上连接1,6-α-D-Gal片段,末端为半乳糖。体内抗肿瘤实验结果表明,SAP高、中、低剂量组对CT26荷瘤小鼠肿瘤生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系,对CT26荷瘤小鼠的抑瘤率可达44.03%。结论 SAP的结构确定为其构效关系研究奠定理论基础,该多糖有望进一步开发成为高效低毒的抗结肠癌新药。

大黄素对CT26结肠癌小鼠的作用研究

目的研究大黄素对CT26结肠癌小鼠调节性T细胞(Treg cell)及对血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法从40只BALB/c小鼠中随机选取10只作为对照组,剩余30只小鼠右前肢腋窝皮下接种CT26细胞构建CT26结肠癌小鼠模型,28只建模成功,随机分为模型组10只、实验组9只及阳性对照组9只。实验组小鼠腹腔注射100mg·kg^(-1)大黄素,阳性对照组腹腔注射20 mg·kg^(-1)5-氟尿嘧啶(5-FU),模型组及对照组则腹腔注射等量生理盐水,每天1次,连续干预14 d。比较各组肿瘤体积及肿瘤抑制率;用流式细胞仪检测各组肿瘤局部Treg cell比例;用免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF-C及MMP-9蛋白表达情况。结果与模型组比较,实验组及阳性对照组肿瘤体积显著缩小,肿瘤质量显著降低(P<0.01),且实验组及阳性对照组肿瘤抑制率分别为(45.43±9.58)%及(69.61±8.79)%;模型组、实验组和阳性对照组淋巴组织混悬液中Treg cell比例分别为(53.26±8.42)%,(46.22±7.95)%,(48.12±7.93)%;肿瘤组织混悬液中Treg cell比例分别为(18.56±6.21)%,(3.78±1.41)%,(2.17±1.01)%;VEGF-C蛋白表达评分分别为(2.11±0.45),(0.68±0.36),(0.31±0.12)分;MMP-9蛋白表达评分分别为(2.31±0.39),(1.11±0.41),(0.45±0.24)分。与模型组比较,实验组及阳性对照组淋巴组织混悬液及肿瘤组织中Treg cell比例及肿瘤组织中VEGF-C、MMP-9蛋白表达评分均显著降低(P<0.01)。结论大黄素可有效抑制Treg cell向CT26结肠癌小鼠肿瘤局部迁移,并降低肿瘤组织中VEGF-C及MMP-9蛋白表达,抗癌效果显著。

黄芪莪术联合5-氟尿嘧啶对CT26.WT原位移植瘤小鼠CXCL10/CXCR3轴和CCL3/CCR5轴表达的影响

目的探讨黄芪莪术配伍联合5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗结肠癌的作用机制。方法采用1只BALB/c雄性小鼠作为种鼠,生成原位瘤体,80只BALB/c雄性小鼠采用移植种鼠瘤体的方法建立CT26.WT原位移植瘤小鼠模型。将80只BALB/c雄性小鼠随机分为模型组、5-FU组(25 mg/kg)、黄芪莪术高剂量组(12 g/kg)、黄芪莪术中剂量组(6 g/kg)、黄芪莪术低剂量组(3 g/kg)、联合高剂量组(12 g/kg+25 mg/kg)、联合中剂量组(6 g/kg+25 mg/kg)、联合低剂量组(3 g/kg+25 mg/kg),每组10只,连续给药3周。处死小鼠取肿瘤组织,计算抑瘤率。采用Western blot和Real-time PCR法分别检测各组小鼠肿瘤组织、淋巴组织和肝脏组织中CXC趋化因子配体10(CXCL10)、CXC趋化因子受体3(CXCR3)、C-C趋化因子配体3(CCL3)、C-C趋化因子受体5(CCR5)蛋白和mRNA表达。结果与模型组比较,各给药组的抑瘤率均升高(P<0.01)。与5-FU组比较,黄芪莪术高、中、低剂量组,联合高、中、低剂量组抑瘤率均降低(P<0.01)。与黄芪莪术高剂量组比较,联合高剂量组抑瘤率升高(P<0.01),黄芪莪术低剂量组抑瘤率降低(P<0.01)。与黄芪莪术中剂量组比较,黄芪莪术低剂量组抑瘤率降低(P<0.01),联合中剂量组抑瘤率升高(P<0.01)。与联合高剂量组比较,联合中剂量抑瘤率升高(P<0.01)。与联合中剂量组比较,联合低剂量组抑瘤率降低(P<0.01)。与联合低剂量组比较,黄芪莪术低剂量组抑瘤率降低(P<0.01)。与模型组比较,各给药组均能下调CXCL10、CXCR3、CCL3、CCR5的mRNA及蛋白的表达(P<0.01)。与5-FU组比较,黄芪莪术中、低剂量组CXCL10、CXCR3、CCL3、CCR5的mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01);联合高、中、低剂量组的CXCL10、CXCR3、CCL3、CCR5的mRNA及蛋白表达均降低(P<0.01);黄芪莪术高剂量组原位瘤、淋巴结、肝组织中CCL3及肝组织中CCR5的蛋白表达升高(P<0.01),黄芪莪术高剂量组CXCL10、CXCR3的mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01)。与黄芪莪术高剂量组比较,联合高剂量组趋化因子及受体的mRNA及蛋白的表达降低(P<0.05);黄芪莪术中、低剂量组原位瘤、淋巴结中趋化因子及受体的蛋白表达升高(P<0.05),肝组织中CXCL10、CXCR3、CCR5的蛋白表达升高(P<0.05);黄芪莪术低剂量组的趋化因子及受体的mRNA表达升高(P<0.05);黄芪莪术中剂量组CXCR3、CCL3、CCR5的mRNA表达升高(P<0.05)。与黄芪莪术中剂量组比较,联合中剂量组的趋化因子及受体的mRNA及蛋白的表达降低(P<0.05);黄芪莪术低剂量组原位瘤中趋化因子及受体的蛋白的表达升高(P<0.05),淋巴结中CXCL10、CCL3的蛋白表达升高(P<0.05),肝组织中CXCL10、CCR5的蛋白表达升高(P<0.05);黄芪莪术低剂量组CXCL10、CCL3 mRNA表达升高(P<0.05)。与联合高剂量组比较,联合低剂量组趋化因子及受体的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05),联合中剂量组原位瘤CCL3、CXCL10的蛋白表达升高(P<0.05),淋巴结CCR5、CXCL10、CXCR3的蛋白表达升高(P<0.05),肝组织中CXCL10、CXCR3的蛋白表达升高(P<0.05),联合中剂量组CXCR3 mRNA表达升高(P<0.05)。与联合中剂量组比较,联合低剂量组原位瘤CXCL10、CXCR3、CCR5的蛋白表达升高(P<0.05),淋巴结CXCL10、CXCR3的蛋白表达升高(P<0.05),肝组织CXCR3、CCR5的蛋白表达升高(P<0.05),联合低剂量组中CXCR3、CCL3的mRNA表达升高(P<0.05)。与联合低剂量组比较,黄芪莪术低剂量组趋化因子及受体的mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。结论黄芪、莪术配伍能够抑制CT26.WT原位移植瘤增殖,且联合5-FU具有增效之功,其治疗结肠癌机制可能与下调CXCL10/CXCR3轴、CCL3/CCR5轴mRNA及蛋白的表达有关。

黄芪配伍莪术对小鼠结肠癌细胞CT26黏附和迁移能力的影响

目的探讨黄芪配伍莪术在体外对小鼠结肠癌细胞CT26黏附和迁移能力的影响及作用机制。方法体外培养CT26细胞,设对照组,分别以0.00625、0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2g/ml的黄芪、莪术药物浓度处理24h和48h后,采用CCK-8法检测黄芪配伍莪术对CT26细胞存活率的影响以选择合适的给药浓度。采用划痕实验检测黄芪配伍莪术对CT26细胞迁移能力的影响,采用细胞黏附实验检测黄芪配伍莪术对CT26细胞与细胞及与细胞外基质间黏附能力的影响。药物处理24h后采用Western blot法和RT-PCR法检测CT26细胞中黏附相关因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、抗癌1号蛋白(KAI1)、抑癌基因张力蛋白同源10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)、基质蛋白酶诱导因子(CD147)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白和mRNA表达。结果选择0.0125、0.025、0.05g/ml浓度进行后续实验。与对照组比较,24h时黄芪配伍莪术组0.025、0.05g/ml浓度及48h时0.0125、0.025、0.05g/ml浓度CT26细胞的迁移率均明显降低;与黄芪配伍莪术组0.0125g/ml浓度比较,24、48h 0.025、0.05g/ml浓度CT26细胞迁移率均明显降低;与黄芪配伍莪术组0.025g/ml浓度比较,24、48h 0.05g/ml浓度CT26细胞迁移率均明显降低;除黄芪配伍莪术组0.05g/ml浓度外,各组48h CT26细胞迁移率较本组24h均明显增加(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,黄芪配伍莪术组0.0125、0.025、0.05g/ml浓度与细胞外基质黏附率均明显下降;与黄芪配伍莪术组0.0125g/ml浓度比较,0.025、0.05g/ml浓度与细胞黏附率明显升高,0.05g/ml浓度与细胞外基质黏附率明显下降;与黄芪配伍莪术组0.025g/ml浓度比较,0.05g/ml浓度与细胞黏附率明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,黄芪配伍莪术组0.025、0.05g/ml浓度CT26细胞的E-cadherin、KAI1、PTEN蛋白及mRNA表达水平显著升高,CD147蛋白表达显著降低;与黄芪配伍莪术组0.0125g/ml浓度比较,0.025g/ml浓度E-cadherin蛋白及mRNA表达明显升高,0.05g/ml浓度E-cadherin、KAI1、PTEN蛋白及mRNA表达显著升高,CD147蛋白及mRNA表达下降;与黄芪配伍莪术组0.025g/ml浓度比较,0.05g/ml浓度的KAI1、PTEN蛋白及mRNA表达明显升高,CD147蛋白及mRNA表达下降(P<0.05或P<0.01)。结论黄芪配伍莪术可以增强CT26细胞间黏附,减弱与细胞外基质黏附能力,并抑制其迁移能力,其作用机制可能与促进同源性黏附相关因子E-cadherin、PTEN、KAI1表达,抑制异源性黏附相关因子CD147、MMP-9、HIF-1α表达有关。

淫羊藿苷抑制小鼠结肠癌肝转移作用及机制研究

目的探讨淫羊藿苷(Icariin,Ica)对CT26小鼠结肠癌肝转移瘤生长的抑制及其机制。方法建立结肠癌肝转移小鼠模型,随机分为模型组,Ica高、中、低剂量组和希罗达组,每组7只,ig给药,3周后比较小鼠体重、肝重、瘤重及肺和腹膜转移情况。HE染色法分析Ica处理后各组转移瘤组织中的细胞生长情况,免疫组化SP法检测肿瘤组织中p53、Bax、Bcl-2的表达。结果Ica能够抑制结肠癌肝转移瘤鼠的肿瘤生长;HE染色结果显示Ica处理后的肿瘤细胞凋亡明显增多,且呈剂量依赖性。免疫组化结果表明,Ica作用后的转移瘤组织中p53和Bax蛋白上调,Bcl-2蛋白下调,且呈剂量依赖性。结论Ica可显著抑制小鼠CT26细胞结肠癌肝转移瘤的生长,其机制可能与上调p53和Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白有关。