大黄[庶虫]虫丸抑制趋化因子配体17表达对CT26小鼠结肠癌的影响

目的观察大黄[庶虫]虫丸对趋化因子配体17(CCL17)在CT26结肠癌小鼠模型中表达的影响,研究其可能的抗肿瘤作用机制。方法复制CT26结肠癌小鼠模型,将模型小鼠随机分为模型组,大黄[庶虫]虫丸高、中、低剂量组(48、24、12 g·kg^-1·d-1),另设正常组。计算各组小鼠结肠癌的抑瘤率;用流式细胞术和免疫荧光法分别检测外周血、肿瘤归巢淋巴结和肿瘤组织细胞中调节性T细胞(Tregs)百分比,肿瘤组织中CCL17的表达,趋化因子受体4(CCR4)在外周血和肿瘤组织细胞表面的表达百分比和肿瘤组织细胞核转录因子κB(NF-κB)p65的表达。结果大黄[庶虫]虫丸能明显抑制小鼠结肠癌的生长,且呈剂量依赖性;大黄[庶虫]虫丸各剂量组肿瘤组织中Tregs明显减少(P<0.05),肿瘤组织中CCL17的荧光强度明显下降(P<0.05);模型组的CCR4+Tregs百分比和CCL17荧光强度最高,大黄[庶虫]虫丸各剂量组随着用药浓度增加,CCR4+Tregs百分比和CCL17荧光强度均表现为依次降低(P<0.05);大黄[庶虫]虫丸能显著抑制结肠癌细胞NF-κB的活化(P<0.05),NF-κB p65的荧光比例显著降低。结论大黄[庶虫]虫丸可通过减少肿瘤组织中Tregs的聚集,降低肿瘤组织中CCL17的表达,下调CCR4在Treg细胞表面的表达比率,降低结肠癌细胞NF-κB p65在细胞内的表达,从而抑制CT26小鼠结肠癌细胞的生长。

高压氧联合化疗药物对结肠腺癌细胞CT26小鼠移植瘤生长的影响

目的:探讨高压氧联合化疗药物对结肠腺癌细胞CT26小鼠移植瘤生长的影响。方法:建立小鼠结肠腺癌移植瘤模型,观察0．2 Mpa HBO及联合化疗药物5-FU或紫杉醇对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,计算肿瘤抑制率;用流式细胞仪观察0．2 Mpa HBO对CT26细胞周期的影响。结果:动物实验结果显示:HBO组小鼠肿瘤体积抑制率为:22．39％,肿瘤质量抑制率为:25．77％;5-FU组分别为:42．38％,43．61％;5-FU+HBO组分别为:72．10％,71．47％;紫杉醇组分别为:26．31％,23．04％;紫杉醇+HBO分别为: 33．24％,30．96％。5-FU+HBO组与5-FU组及HBO组相比较有显著性差异(p<0．01);紫杉醇+HBO组与紫杉醇组及HBO组相比差异不明显。流式细胞仪检测结果显示:0．2 Mpa HBO诱导CT26细胞在S期积蓄(G0／G1期(55．89％)、S期(40．79％)、G2／M期(3．32％))。结论:0．2 Mpa HBO可抑制了CT26结肠腺癌小鼠移植瘤的生长,并能增强细胞周期特异性化疗药物的敏感性。

结直肠癌肝转移动物模型的建立

目的比较几种结直肠癌肝转移动物模型的建立方法,确定一种比较适合的结直肠癌肝转移动物模型。方法以BALB/c鼠为研究对象,随机分组,分别经脾脏、直肠、腹腔按不同剂量(0.1mL、0.2mL、0.3mL、1.0mL)(浓度为1×106个/mL)注入小鼠结肠腺癌细胞(CT26)悬液,其中腹腔组无1.0mL剂量,卡方检验比较三组动物模型组内及组间肝转移率。结果三种方法均能复制出结直肠癌肝转移动物模型,脾脏组0.1mL、0.2mL、0.3mL、1.0mL肝转移率分别为50.0%、77.2%、50.0%、27.0%;直肠注射组0.1mL、0.2mL、0.3mL、1.0mL肝转移率为50.0%、53.1%、16.7%、6.7%;腹腔注射组0.1mL、0.2mL、0.3mL肝转移率为10.0%、22.2%、10.0%。结论经脾脏注射0.2mL(1×106个/mL)BALB/c鼠结肠腺癌细胞株(CT26)是一种建立结直肠癌肝转移动物模型成功率较高的方法。而经肛门直肠注射0.1mL或0.2mL(1×106个/mL)BALB/c鼠结肠腺癌细胞株(CT26)是一种建立结直肠癌肝转移动物模型简便及符合结直肠癌肝转移规律的方法。

小鼠腹腔巨噬细胞与树突状细胞协同抗瘤效应

目的 :观察巨噬细胞 (Mφ)与树突状细胞 (dendriticcell,DC)对H2 2肝细胞瘤、CT2 6结肠腺癌小鼠协同抗肿瘤免疫作用。方法 :腹腔荷H2 2 (1× 10 6)昆明鼠随机均分成 :①H2 2组、②H2 2 +Mφ组、③H2 2 +DC组、④H2 2 +Mφ +DC组 ,按组别腹腔分别注入Mφ和 (或 )H2 2脉冲致敏DC ;腹腔荷CT2 6 (1× 10 4)BALB/C小鼠以双向有序二因素检测 (9格方格表 )设计 ,治疗鼠同时注射相应数量的Mφ和CT2 6脉冲致敏DC ,每鼠的Mφ和DC呈不同组合。 1周后均强化 1次 ,所注入数量同第 1次。结果 :H2 2组小鼠 38d内均死亡 ,死亡的中位时间为 2 9d ;而H2 2 +Mφ组和H2 2 +DC组均死亡 3只 ,死亡的中位时间分别为 37d ,36d ;H2 2 +Mφ +DC组在实验观察 6 0d内 ,未出现腹水 ,无一死亡 ;荷瘤一段时间后 ,前 3组小鼠静脉血粒细胞 /淋巴细胞比值进行性增大 ,免疫细胞数量减少。荷CT2 6小鼠生存时间行免疫治疗比未免疫治疗延长 ,单用DC或Mφ呈疗效 剂量依赖性 ,高剂量Mφ和DC合用与DC或Mφ单用疗效差异无显著性。结论 :DC、Mφ细胞均能提高机体抗瘤能力和生存期 ,有明确的量效关系 ;DC抗原递呈功能明显大于Mφ ;DC。

荧光素酶标记小鼠结肠癌细胞建立活体成像移植瘤模型

目的:建立稳定表达荧光素酶的小鼠结肠癌细胞株并构建适用于小动物活体成像系统观察的BALB/c鼠皮下移植瘤模型。方法:通过基因重组的方式,将外源基因插入到逆转录病毒载体上,以工具细胞293T包毒后得到病毒,将携带荧光素酶基因的质粒转染到小鼠结肠癌细胞株CT26中,Puromycin筛选出稳定表达荧光素酶的单克隆细胞株。扩增后接种于BALB/c鼠,建立BALB/c鼠皮下移植瘤模型,通过活体动物成像系统监测肿瘤的生长过程。结果:获得了高水平稳定表达荧光素酶的结肠癌单克隆细胞株,该单克隆细胞株与母细胞系CT26具有相似的生长特性。将稳定表达荧光素酶的克隆接种于BALB/c鼠皮下可成瘤,小动物活体成像系统能准确监测肿瘤细胞在体内的生长过程。结论:成功建立了稳定表达荧光素酶的结肠癌单克隆细胞株。采用活体动物成像系统构建的BALB/c鼠皮下结肠癌移植瘤模型是拓展肿瘤体内生长、转移及治疗相关研究的理想模型。

雷公藤甲素对正常及荷瘤小鼠肝毒性的比较研究

目的:根据中医“有故无殒”理论,探究正常生理状态及荷瘤病理状态小鼠暴露相同条件雷公藤甲素引发肝毒性反应的差异及初步机制。方法:BALB/c正常小鼠和CT26细胞皮下荷瘤小鼠为实验材料。雷公藤甲素(0.4 mg/kg)腹腔注射给药(连续给药25天)。检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)及肝组织匀浆上清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)水平;石蜡切片HE染色、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及核转录因子E2相关因子2(Nrf2)免疫组化显色比较观察正常生理状态及荷瘤病理状态小鼠肝组织病理的差异。结果:离体和在体实验均表明,雷公藤甲素具有显著抑瘤活性。与肿瘤组比较,正常小鼠暴露雷公藤甲素后,血清ALT水平显著增加(P<0.05),肝组织匀浆GSH-PX水平显著降低(P<0.05)。同样条件雷公藤甲素暴露后,正常组小鼠肝组织损伤程度明显高于荷瘤组小鼠,且肝组织iNOS、Nrf2的平均光密度值均显著增高(P<0.05)。结论:雷公藤甲素具有显著抑制CT26结肠癌的活性,且肝脏毒性反应较小;而正常生理状态小鼠暴露相同条件雷公藤甲素可诱发明显肝脏毒性,提示:雷公藤甲素对症/证给药,“毒-效”关系发生转化,为中医“有故无殒”理论增加了实证资料。

苦豆子多糖SAP的结构表征及其对CT26抗肿瘤活性研究

目的研究苦豆子多糖SAP的一级结构及其抗肿瘤活性。方法采用高效凝胶渗透色谱法、红外广谱、GC-MS结合NMR法解析SAP的结构;考察SAP对CT26荷瘤小鼠的抗肿瘤活性。结果 SAP为半乳甘露聚糖,其相对分子质量为9.6×105,以1,4-β-D-Man为主链,在其某些C-6的位置上连接1,6-α-D-Gal片段,末端为半乳糖。体内抗肿瘤实验结果表明,SAP高、中、低剂量组对CT26荷瘤小鼠肿瘤生长有抑制作用,且呈剂量依赖关系,对CT26荷瘤小鼠的抑瘤率可达44.03%。结论 SAP的结构确定为其构效关系研究奠定理论基础,该多糖有望进一步开发成为高效低毒的抗结肠癌新药。

绿原酸抗小鼠CT26结肠癌作用的研究

目的考察绿原酸对小鼠CT26结肠癌移植瘤生长的抑制作用。方法以荷瘤小鼠实体瘤重、抑瘤率及对脾脏、胸腺指数的影响为指标,并结合肿瘤细胞的病理切片,评价绿原酸对CT26结肠癌的抑制作用。结果与阴性组比较,从抑瘤率及组织病理切片,可知绿原酸对CT26结肠癌移植瘤有明显的抑制作用。结论绿原酸具有一定的抗CT26结肠癌作用。