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棉花纤维RNA提取方法的比较及酵母双杂交文库的构建
被引量:
2
1
作者
徐雯
邓宗汉
+2 位作者
陈婷婷
彭良才
夏涛
《中国农学通报》
CSCD
2012年第30期177-183,共7页
为了从棉花纤维中提取高质量的RNA用于构建酵母双杂交文库,采用4种不同的方法提取9天和19天棉花纤维的RNA。琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测结果表明:热硼酸法适用于初生幼嫩纤维和次生加厚纤维的RNA提取,CTAB-PVP法仅适用于初生幼...
为了从棉花纤维中提取高质量的RNA用于构建酵母双杂交文库,采用4种不同的方法提取9天和19天棉花纤维的RNA。琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测结果表明:热硼酸法适用于初生幼嫩纤维和次生加厚纤维的RNA提取,CTAB-PVP法仅适用于初生幼嫩纤维的RNA提取,异硫氰酸胍法和高盐高pH值法提取的RNA由于杂质含量较多而影响反转录效果。采用热硼酸法大量提取总RNA,纯化后的mRNA反转录为cDNA,通过重组将扩增的cDNA片段定向插入到pGADT7-RecAD克隆载体中,得到棉纤维9天和19天的酵母双杂交cDNA文库。2个文库的滴度分别是1.01×107cfu/mL和8×106cfu/mL,cDNA插入片段长度集中分布在250~2500bp之间。由此可以看出,构建的2个棉纤维文库质量较高,可用于棉花纤维素合成和调控途径的研究。
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关键词
棉花纤维
改良热硼酸
法
ctab—pvp法
酵母双杂交文库
下载PDF
职称材料
题名
棉花纤维RNA提取方法的比较及酵母双杂交文库的构建
被引量:
2
1
作者
徐雯
邓宗汉
陈婷婷
彭良才
夏涛
机构
华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室
华中农业大学生物质与生物能源研究中心
华中农业大学生命科学技术学院
华中农业大学植物科学技术学院
出处
《中国农学通报》
CSCD
2012年第30期177-183,共7页
基金
国家重点基础研究发展计划"新型能源作物细胞壁生物合成分子机理研究"(2010CB134401)
文摘
为了从棉花纤维中提取高质量的RNA用于构建酵母双杂交文库,采用4种不同的方法提取9天和19天棉花纤维的RNA。琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测结果表明:热硼酸法适用于初生幼嫩纤维和次生加厚纤维的RNA提取,CTAB-PVP法仅适用于初生幼嫩纤维的RNA提取,异硫氰酸胍法和高盐高pH值法提取的RNA由于杂质含量较多而影响反转录效果。采用热硼酸法大量提取总RNA,纯化后的mRNA反转录为cDNA,通过重组将扩增的cDNA片段定向插入到pGADT7-RecAD克隆载体中,得到棉纤维9天和19天的酵母双杂交cDNA文库。2个文库的滴度分别是1.01×107cfu/mL和8×106cfu/mL,cDNA插入片段长度集中分布在250~2500bp之间。由此可以看出,构建的2个棉纤维文库质量较高,可用于棉花纤维素合成和调控途径的研究。
关键词
棉花纤维
改良热硼酸
法
ctab—pvp法
酵母双杂交文库
Keywords
cotton fibers
hot borate method
ctab
-
pvp
method
yeast two hybrid library
分类号
Q71 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
棉花纤维RNA提取方法的比较及酵母双杂交文库的构建
徐雯
邓宗汉
陈婷婷
彭良才
夏涛
《中国农学通报》
CSCD
2012
2
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