百合叶片总RNA提取方法比较及优化

为筛选出适合百合叶片RNA提取方法,以铁炮百合‘白天堂’组培苗叶片为材料,比较了改进的CTAB、SDS及传统的Trizol、CTAB、SDS方法提取RNA的效果。结果表明:不论传统及改进的SDS法和Trizol法均不能有效去除百合叶片组织中的多糖、蛋白等杂质,传统CTAB法提取RNA存在DNA污染。针对百合叶片组织富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用醋酸钠及无水乙醇去除多糖,酚/氯仿反复抽提去除蛋白,DNaseⅠ去除DNA,LiCl有效沉淀RNA。采用此方法提取的RNA条带清晰,经紫外光谱分析D260/D280比值为2.0,D260/D230为2.1,电泳28S、18S条带清晰,比值约为1.5。RT-PCR结果表明,改进的CTAB法提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。

山丹百合花蕾总RNA提取方法的比较

以SDS改进法、CTAB改进法及EASYAPIN试剂盒法3种方法提取山丹百合花蕾的总RNA,并通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测对其提取效果进行分析比较。结果表明:SDS改进法提取的RNA效果不显著,CTAB改进法提取的RNA产量高,但有大量的DNA污染,需进一步纯化;EASYAPIN试剂盒法提取的RNA质量好,纯度高,完整性强,可直接进行下一步的分子生物学研究。