珍稀濒危树种金钱槭的基因组DNA提取方法研究

[目的]明确高效提取金钱槭基因组DNA的方法。[方法]以金钱槭幼嫩叶片为材料,采用4种不同方法提取金钱槭基因组DNA,并通过紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳检测、限制性内切酶酶切和扩增保守基因片段等方法比较不同DNA的提取效率。[结果]高盐低pH法因操作时间较长导致DNA损失较多,提取到的DNA虽然杂质含量较低,但浓度也较低。SDS法提取效果不佳,提取到的DNA含量少且完整性差。尿素法提取的DNA质量最差,降解严重,难以用于后续分子生物学研究。改良CTAB法可以大量提取能够用于酶切及PCR扩增的DNA。[结论]金钱槭DNA高效提取方法的确定可以为相关的分子生物学研究提供科学依据和技术参考。

单粒蔬菜种子DNA快速提取方法的建立

利用磁珠法对甘蓝、白菜、芥菜、洋葱、黄瓜、番茄、辣椒等7种形状、大小不同的蔬菜单粒种子和幼苗进行DNA提取,采用内参基因Actin进行实时荧光定量PCR评价DNA质量,利用KASP(kompetitive allele specific PCR)标记检验DNA质量是否达到KASP检测要求。结果显示,单粒种子磁珠法提取的各蔬菜DNA平均Ct值均处于19~24范围内。KASP检测进一步证实种子提取DNA的质量达到KASP标记分型的要求。综上所述,本研究建立了一种简单、经济、实用性强的单粒种子DNA提取方法,该方法对不同大小的蔬菜种子具有较好的稳定性,且大幅缩短了获得基因型数据的时间。

改良CTAB法提取不同作物总RNA技术研究

为提高操作效率,本研究开发出一种简洁有效的作物总RNA提取方法。研究以油菜、棉花、花生、小麦、马铃薯、玉米、大豆、西葫芦等作物的不同组织为试材,通过CTAB法、改良CTAB法及TanSzol Reagent试剂盒法提取总RNA,检测结果发现,经过改良后的CTAB法提取的总RNA质量较高。在油菜花瓣、小麦、花生、西葫芦叶片中,该方法获得了较高的总RNA得率,分别为24.5、23.7、26.4、17.35μg/mL;OD260/280和OD260/230值分别为1.90、1.73、1.72、1.80和2.10、1.50、2.01、1.70。综合比较以上3种方法,改良后的CTAB法适用于油菜、小麦、花生、西葫芦等作物的总RNA提取,为后续分子生物学检测奠定了基础。

植物DNA提取方法的研究进展

随着分子生物学的快速发展,植物DNA提取技术在植物科学研究、农业生产、环境保护和法医物证学等领域发挥着至关重要的作用。传统方法如CTAB法、SDS法和高盐低pH法,虽然在提取效率和纯度方面取得了一定的成功,但存在操作繁琐、耗时长、试剂对人体有害等问题。为了克服这些问题,研究者开发了一系列快速、高效的提取方法,如微针贴片法、纤维素滤纸法、EZ-D法和碱裂解法。这些方法在提高提取速度和纯度的同时,减少了对环境和操作人员的影响。本文总结了植物DNA提取的传统方法和近年来发展起来的快速提取新技术的优缺点。

对CTAB法提取菠菜基因组DNA实验的优化设计

CTAB法是一种经典的提取植物DNA的方法,但传统的提取方法存在RNA污染、DNA提纯率不高等问题。基于这些问题,文章对实验步骤进行了优化,并将使用改良方法提取的菠菜叶片DNA通过紫外分光光度法进行检测。结果表明,使用改良方法提取的DNA其浓度及纯度显著提高,有效提升了实验教学的质量和效率。

入侵植物一年蓬基因组DNA提取方法优化

一年蓬为菊科飞蓬属植物,是分布较广、危害较重的一种外来入侵杂草。为优选该植物基因组DNA的提取方法,本研究采取四因素三水平正交试验设计,对一年蓬基因组DNA的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)提取方法进行优化,并与常规的植物基因组试剂盒法进行对比。结果表明,一年蓬基因组DNA较优的提取方法为改良CTAB法,即一年蓬的干燥叶片经CTAB-free去除多糖,并加入β-巯基乙醇防止酚氧化,用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提3次。改良CTAB法提取的一年蓬基因组DNA质量较高,微量分光光度计检测的A_(260)/A_(280)数值接近1.8~2.0,且凝胶电泳DNA条带清晰,无明显拖带。该方法为该植物的遗传多样性和入侵机制等研究提供参考。

鲜榨果汁基因组DNA快速提取方法的建立及优化

目的建立及优化鲜榨果汁基因组DNA快速提取方法。方法本研究比较了植物DNA快速提取试剂盒法、棉签法、纤维素膜片法和滤纸片法4种方法提取15种鲜榨果汁基因组DNA的效果,并筛选不同的提取液和裂解液、优化裂解液中的盐酸胍浓度和果汁基因组提取时间。结果滤纸片法采用DNA裂解液(6 mol/L盐酸胍、1%聚乙烯吡咯烷酮、50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、20 mmol/L乙二胺四乙酸、21.3 mmol/L曲拉通-X-100;pH 6.4)、DNA漂洗液3(8 mol/L盐酸胍、50 mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐;pH 6.4)和DNA漂洗液4(10 mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、100 mmol/L氯化钠;pH 8.0)即可在5 min内从鲜榨果汁中提取得到适用于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)的基因组DNA。结论本研究建立的滤纸片法不需要离心机等昂贵的仪器设备、操作简单、无刺激性气味、无环境条件限制,具有快速、价廉、环保等优点,为果汁基因组DNA快速提取与现场鉴定研究提供了参考。

苎麻总DNA提取的CTAB法优化方案

根据苎麻组织自身含有较多的酚类、粘状物及黄酮类等次生代谢物质的特点,对CTAB法进行优化后用于提取苎麻组织总DNA.在研磨过程中加入抗氧化剂PVP,提取缓冲液中加入终浓度6%的PVP和4%的β-巯基乙醇,可防止整个提取过程中溶液变褐;在第2次用氯仿/异戊醇抽提时,加入10%的CTAB和4%的N aC l高盐溶液,以除去多糖.经几种改良方案提取总DNA的ISSR-PCR扩增结果验证,以同时加入抗氧化剂和高盐溶液的CTAB-4法效果最好.

改良CTAB法快速提取棉花DNA

针对棉花（Ｇｏｓｓｐｉｕｍ）富含棉酚、多糖等其它次生干扰物质这一特点而设计的一种快速分离和纯化棉花总ＤＮＡ（ｇＤＮＡ）的方法。该方法是对ＣＴＡＢ（ｃｅｔｙｌｔｒｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ）法的改良，它在ＣＴＡＢ法的基础上，首先用ＤＩＥＣＡ（ｄｉｅｔｈｙｌｄｉｔｈｉｏｃａｒｂａｍｉｃａｃｉｄ）抑制酚氧化酶的活性，然后用活性炭和ＰＶＰ４０（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）排除棉酚等其它次生干扰物质。试验证明，该方法比较简便、快速、经济、有效，得到的ｇＤＮＡ完全可以满足ＰＣＲ等分子生物学分析。

提取植物和微生物DNA的SDS-CTAB改进法

该文介绍了一种简便快速地提取植物和微生物细胞总ＤＮＡ的方法，该法是对提取真菌ＤＮＡ的ＳＤＳＣＴＡＢ法进行改进而成，经过修改后的ＳＤＳＣＴＡＢ法可在数小时内高效地提取细胞总ＤＮＡ．制备物经琼脂糖凝胶电泳检测到大于２０ｋｂ的ＤＮＡ主带，基本无ＤＮＡ碎带；不用ＲＮａｓｅ处理，就已经无ＲＮＡ的干扰．ＯＤ２６０／２８０值显示产物纯度较高。

基于CTAB法提取毛竹基因组DNA的探讨

应用CTAB法、改良CTAB法、改良CTAB-高盐沉淀法对毛竹基因组DNA进行了提取,并用紫外分光光度计(UV3300)、琼脂糖凝胶电泳和PCR分析对提取的DNA进行了检测,对DNA的产量、质量、PCR效果等方面进行了综合比较。结果表明:改良CTAB-高盐沉淀法是提取高质量毛竹基因组DNA的较好方法。

利用改良CTAB法提取澳洲坚果成熟叶片高质量DNA

澳洲坚果的成熟叶片中次生物质含量很高,因此给DNA的提取造成很大困难。CTAB法可有效去除多糖等杂质,但常规CTAB法的提取效果并不好。为此,我们在此基础上进行改进。采用改良后的CTAB法提取了7个澳洲坚果样品的总DNA。结果表明:使用CTAB free缓冲液进行前处理可去除大部分的杂质。所获得的DNA纯度较高,OD_(260)/OD_(280)均在1.7～1.9之间,RNA消化彻底,DNA无明显降解,进行ISSR分析(UBC-835)条带清晰,多态性好。说明该方法获得的基因组DNA适合于进行以PCR为基础的DNA多态性的研究。

SDS-CTAB结合法提取棉花总DNA

根据以往提取棉花总DNA的经验 ,并参考了几种相关的植物总DNA提取方法 ,得到一种更适合棉花 (GossypiumL .)总DNA提取的方法。该提取方法综合了SDS法与CTAB法的优点 ,使获得的棉花总DNA纯度高 ,得率大 ,完整性较好 ,可用于PCR检测 ,Southern杂交 ,RAPD ,染色体步移等分子生物学操作。

一种适用于动物与植物总DNA提取的方法——改良CTAB法(英文)

关于动物和植物基因组DNA的提取方法国内外有很多报道，但同一方法通常只能较好的从动物或植物提取总DNA。在前人报道的基础上，该研究对常用的CTAB法进行了适当修改，获得了一种从动物和植物中均能有效提取DNA的方法。

一种适用于动物与植物总DNA提取的方法——改良CTAB法

[目的]介绍一种简单、高效且能用于提取动物与植物的总DNA的方法。[方法]采用改良CTAB法,从24个花生品种嫩叶及小白鼠的肝、肺和肾中提取DNA,进行琼脂糖电泳和蛋白核酸分析仪检测及PCR扩增检验。[结果]所提取DNA电泳条带清晰,整齐均匀,OD260/OD280值介于1.77～1.83,用于PCR扩增获得理想效果。[结论]该研究介绍的改良CTAB法提取动物和植物的总DNA,满足开展PCR扩增的要求。

改良CTAB法提取野牡丹科7种植物DNA

以野牡丹科植物幼叶为材料,对影响野牡丹科植物DNA提取质量的主要因子进行研究,以期建立适宜野牡丹科植物DNA提取的优化反应体系。结果表明,当提取液中CTAB浓度为4%,沉淀时加入0.6体积的预冷异丙醇、1/2体积的5 mol/L氯化钠及2倍体积的无水乙醇时,所提取到的DNA纯度较高,电泳条带清晰。且在此条件下,能提取出野牡丹科7种植物的DNA。

玉米大斑病菌的RAPD分析Ⅰ.应用CTAB法提取玉米大斑病菌DNA

用采自河北、辽宁、黑龙江、山东、吉林等 5省的 14个玉米大斑病菌菌株为试材进行液体培养 ,然后采用CTAB法从菌丝中提取DNA ,通过 75 2型紫外光栅分光光度计检测 ,最后将所提取的DNA在热循环仪PE - 480 0上进行随机引物多态性扩增。结果发现 ,所提取的DNA的OD2 60 /OD2 80 比值介于 1.730～ 1.847之间 ,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后得到了较清晰的扩增图谱 ,从而证明采用的CTAB法是提取玉米大斑病菌DNA并用于分子生物学研究的一种行之有效的方法。

用改进的CTAB法提取香菇基因组DNA

通过用改进的CTAB法提取27个香菇菌株的基因组DNA,并分别用紫外、琼脂糖凝胶电泳和PCR技术检测提取DNA样品的质量和产量,证明该方法可以用于香菇基因组DNA的提取,为香菇基因组DNA的提取建立了一种简单可靠的新方法.

改良CTAB法提取林木树种基因组DNA的研究

目的:验证改良CTAB法提取不同林木树种基因组DNA的效果,寻求一种对于不同林木树种基因组DNA提取普遍使用的方法。方法:采用改良的CTAB法提取22种木本植物基因组DNA,并对其进行定性、定量分析及酶切分析。结果:采用本法可以去除多糖和其他次生代谢物并获得高质量的DNA。结论:该方法可以作为一种适于在实验室进行的林木树种基因组DNA的提取方法。

改良CTAB法和高盐低pH值法提取花生DNA的效果

采用改良CTAB法和高盐低pH法提取花生总DNA,结果表明,高盐低pH法提取的花生DNA分子量略小,DNA有一定程度的降解,但得率大大高于CTAB法,按我们稍有改动的实验方法,每克鲜重的叶片,可提取1000μg以上的DNA。两种方法提取的DNA均可酶切完全,RAPD-PCR扩增,结果相同。高盐低pH值法廉价、步骤少、易掌握,是提取花生DNA较好的方法。