改良CTAB-LiCl法提取枣总RNA体系的建立

试验以枣树田间枝条的枝皮及组培苗为材料,应用改进的CTAB法进行了总RNA的提取。针对枣组织中富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用β-巯基乙醇和PVP去除酚类,KAc及无水乙醇去除多糖,LiCl沉淀过夜的方法提取得到的RNA,条带整齐、清晰,A260/A280介于1.8～2.0之间,A260/A230均大于2.0,证明得到的RNA纯度、完整性和产率均较高,蛋白、多糖及酚类等去除较彻底。结果表明,本试验建立的改良CTAB-LiCl法适于进行枣总RNA的提取。

从水稻种胚中提取RNA的新方法

介绍了一种全新、简单的提取水稻种胚RNA的CTAB-LiCl提取法,可在不用液氮的室温下有效地排除剥取的种胚中大量带有的多糖和本身脂质的干扰,所得RNA样品经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析证明具有较高的纯度和完整性,并可进一步满足RT-PCR和Northern印迹的实验需要,适用于富含多糖和脂质的植物组织RNA的提取。

甜叶菊RNA分离方法研究

甜叶菊组织中酚类、萜类和多糖等代谢产物含量较高,RNA难分离,易降解,使用现有的方法提取甜叶菊组织RNA产率低、质量差,无法应用于实验操作。本文针对甜叶菊组织次生代谢物多的特点,以传统的CTAB法(cetyl trimethyl ammonium bromide)为基础,分别采用不同的方法进行RNA抽提和纯化。结果发现采用CTAB-LiCl法提取的RNA完整性好,且纯度高;传统的CTAB法提取的RNA完整性好,但有DNA和其它杂质的污染;高盐溶液法提取的RNA降解比较严重,同时还有杂质污染。结论说明CTAB-LiCl法适用于多糖类植物RNA的分离。

茶树不同器官组织总RNA提取方法的研究

从茶树组织中提取高质量的总RNA,是开展茶树基因组学、功能基因组学研究的重要前提,而RNase、多酚类物质严重干扰茶树总RNA的分离提取。鉴于茶树组织总RNA提取过程难易不一、总RNA提取质量良莠不齐的现状,现对材料用量、提取液、DNA和蛋白质抽提液、RNA沉淀试剂、多酚氧化抑制剂等进行了比较研究,建立了一种适合茶树各器官组织总RNA提取的简单高效的方法(简易CTAB-LiCl法),并与实验室常用的改良Tri-Reagent法、改良CTAB法进行了比较。核酸定量和琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,简易CTAB-LiCl法从茶树各器官组织中提取到的总RNA质量高、得率高。总RNA的得率是改良CTAB法的1.6-5倍。因此,简易CTAB-LiCl法具有效率高、适用范围广,且操作简单、实验成本低的特点。RT-PCR和cDNA-AFLP实验表明,提取的总RNA能够用于后续的分子生物学研究。

铁皮石斛总RNA提取方法的比较研究

针对铁皮石斛富含多糖、多酚等次生代谢物质的特点,以铁皮石斛叶片为材料,比较改良CTAB-LiCl法、SDS法以及试剂盒法提取总RNA的质量,利用电泳检测、核酸蛋白仪浓度测定、RT-PCR等进行验证分析。结果表明,3种方法均能提取铁皮石斛叶片中总RNA,但提取效果存在差异。改良CTAB-LiCl法提取总RNA的28S和18S条带清晰、D_(600 nm)/D_(280 nm)与D_(260 nm)/D_(230 nm)分别为1.96和2.03,RNA完整性好、纯度高,RNA浓度在3种方法中最高,达到560.6 mg/L,RT-PCR扩增出目的基因片段条带最明显,适用于后续的分子生物学研究。

富含多酚类植物RNA提取的研究进展

植物体内广泛存在多糖、多酚等次生代谢物,由于其易被氧化,且难以与核酸分离,导致了RNA提取困难。针对植物多酚类化合物的结构及生物学特性进行分析,将现有的RNA提取方法进行分类,并对它们的原理及优劣进行了论述与评价。

骆驼蓬总RNA的4种提取方法比较

以骆驼蓬(Peganum harmala L.)为材料,采用植物总RNA提取试剂盒法(TIANGEN)、TRIZOL试剂盒法(TIANGEN)、SDS-异丙醇法、CTAB-LiCl法提取总RNA,比较4种方法提取总RNA的得率和纯度。结果表明:CTAB-LiCl法效果最好,电泳条带清晰,RNA完整性好,28S条带亮度约是18S的2倍,所提RNA的OD260/OD280的值在1.80～2.0之间。经RT-PCR获得了600bp大小的特异条带,说明利用改良的CTAB-LiCl法从骆驼蓬中提取到的RNA质量高、完整性好,完全适合于进一步的分子生物学研究。

油桐叶片和种仁总RNA提取方法

本研究测得油桐叶片和种仁总糖含量分别为75.20,32.80 mg/g,总酚含量分别为15.75,0.57 mg/g,在此基础上对TRIzol法、CTAB-LiCl法进行改良,分别提取出高质量的种仁、叶片总RNA,并与异硫氰酸胍法及NOGEN试剂盒法进行比较,结果表明:改良TRIzol法提取的油桐种仁总RNA OD260/OD280稳定在1.9～2.0,28S rRNA和18S rRNA条带清晰完整,RNA产率较高,改良CTAB-LiCl法得到的种仁总RNA有部分降解,异硫氰酸胍法则对小分子盐类去除不够充分,而试剂盒提取出的油桐种仁总RNA有少许降解且有DNA杂质污染。上述4种方法中只有改良CTAB-LiCl法能成功提取出质量较高的油桐叶片总RNA。因此,改良TRIzol法和改良CTAB-LiCl法可分别作为提取油桐种仁和叶片总RNA的首选方法。

桑寄生不同部位总RNA提取方法比较研究

目的:从桑寄生中提取高质量的RNA。方法:以桑寄生叶片、茎、花和种子为材料,采用TRIzol试剂盒法、改良TRIzol法、CTAB-Li Cl法、CTAB-异丙醇法4种方法,比较不同材料及不同方法分离RNA的效果。结果:TRIzol试剂盒法和改良TRIzol法均不能有效的去除桑寄生中的多糖和蛋白质等杂质,不适合用于桑寄生RNA的提取;CTAB-Li Cl法提取的RNA质量较高、完整性较好,可满足各种后续分子生物学实验的要求;CTAB-异丙醇法提取桑寄生RNA的效果虽然较好,但还达不到小RNA分析实验要求。结论:为桑寄生后续分子生物学研究提供基础,也为次生代谢物较丰富的药用植物RNA的提取提供参考。

沙葱总RNA的提取与质量分析

以沙葱种子和沙葱幼叶为材料,分别用RNAiso Plus试剂法、RNAiso Plus醋酸钠改进法、CTAB-异丙醇法、CTAB-LiCl法4种不同的方法提取沙葱总RNA,经琼脂糖凝胶电泳,采用紫外分光光度法测定总RNA纯度并进行RT-PCR检测.结果表明,沙葱不同组织总RNA提取的最优方法有所不同.采用CTAB-LiCl法能有效地提取出沙葱种子高质量、完整性好而且无胶状不溶物的RNA,没有明显的蛋白和基因组DNA的污染.采用RNAiso Plus醋酸钠改进法能有效地去除沙葱幼叶中多糖的干扰,所提取的RNA条带清晰,完整性好,是沙葱幼叶总RNA提取的有效方法.

番茄果实RNA提取方法比较

从富含多糖、多酚的番茄果实中提取高质量的总RNA,对进行下一步分子生物学研究至关重要。采用CTAB-LiCl法和Trizol法分别对番茄果实的总RNA进行提取和分析。结果表明,CTAB-LiCl法提取的总RNA产量低,而且有基因组DNA的污染;Trizol方法提取的RNA产量相对较高,很少有基因组DNA污染。

荷花花瓣总RNA的提取方法

以荷花花瓣为材料,在比较CTAB-LiCl法和Trizol法的基础上,针对荷花花瓣富含多糖、多酚的特点,在RNA提取过程中加入去多糖步骤,改良了CTAB-LiCl法.结果表明,改良CTAB-LiCl法能有效地去除多糖,提取到的RNA 28 SrRNA亮度约为18SrRNA的二倍,A260/A280比值为1.98,A260/A230比值为2.36,RNA产率为685.3ng/μL,说明利用改良CTAB-LiCl法从荷花花瓣中提取的RNA质量好、产率高、完整性好.

草珊瑚叶片总RNA提取方法及效果的比较研究

采用CTAB法、CTAB-LiCl法、CTAB-Trizol法、Trizol法、天根RNA提取试剂盒及百泰克RNA提取试剂盒提取草珊瑚（Sarcandraglabra）叶片总RNA，并通过微量紫外分光光度计、电泳检测等对提取的结果进行了分析比较。结果表明：CTAB-LiCl法和天根RNA提取试剂盒比较适合提取草珊瑚叶片的总RNA。这两种方法提取的总RNA的完整性和纯度较高，无明显的蛋白质及其他杂质污染，OD260/OD280的值在1.9～2.1，OD260/OD230在2.0～2.4。获得质量高、完整性好、纯度高的总RNA，为后续构建cDNA文库以及相关基因的克隆提供了试验基础。

白腐真菌总RNA提取方法的研究

为寻求一种简便有效的白腐真菌总RNA的提取方法,在实验中分别采用Trizol试剂盒法、CTAB-LiCl法、硅藻土-STE法进行操作,琼脂糖凝胶电泳和紫外吸收光谱检测提取的RNA。通过对提取的总RNA实验操作过程、浓度、纯度以及完整性等方面的比较与分析,得出硅藻土-STE法是白腐真菌总RNA提取的理想方法。

百合花瓣总RNA提取方法的研究

以亚洲百合品种Pollyanna和东方百合品种Sorbonne为试材,在比较异硫氰酸胍法、SDS/酚法与CTAB-L i Cl法提取总RNA效果的基础上,针对百合组织中富含多糖的特点,在Sorbonne提取RNA中加入特殊除多糖步骤,改进了CTAB- L i Cl法.结果表明,改进CTAB- L i Cl法能有效去除多糖,提取到的RNA2 8S r RNA亮度约为18S r RNA的2倍,A2 6 0 / 2 80介于1.8～2 .0之间,A2 6 0 / 2 30为2 .0 ,Pollyanna RNA产率为36 .3μL·g- 1 ,Sor-bonne RNA产率为10 .2 μL·g- 1 ,经RT- PCR获得了特异性条带,说明用改进CTAB- L i Cl法从百合花瓣中提取到的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于进一步的分子生物学研究.

山药组织总RNA提取方法的比较与分析

采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较。结果表明,Trizol法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法。

半夏叶片总RNA四种提取方法及效果的比较

目的 针对三叶半夏成熟叶片化学成分复杂，富含多糖、酚类及其他多种化学物质的特点，选择优化一种简便、经济、高效的半夏成熟叶片高质量总RNA提取方法。方法 用4种不同的RNA抽提方法如异硫氰酸胍法、皂土法、CTAB—LiCl法和改进的SDS／酚法提取总RNA，通过电泳、紫外分光光度计检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行分析比较。结果 4种方法均能从半夏成熟叶片中提取到总RNA。其中皂土法的提取过程只需3～4h，是其他3种提取方法所用时间的一半。提取1g叶片的成本只有其他3种方法的1／13～1／14。此法提取的总RNA18S、28S带型清晰无弥散，完整性好，无严重的蛋白质和其他杂质污染，A260/A280为1．8～2．O，A260／A230大于2．O，且总RNA的产率高，为365．744μg／g鲜重，提取的总RNA适用于RT-PCR试验。结论 皂土法提取的RNA完全适用于DDRT-PCR、Northern blotting、cDNA文库构建等分子生物学研究，是一种快速、经济，适于抽提半夏总RNA的好方法。

改良尿素-氯化锂方法提取成熟小麦种子总RNA

为了分离提取成熟小麦种子总RNA ,去除多糖等杂质的严重干扰 ,本实验对尿素 氯化锂分离RNA的方法做了三个方面的改进 :一、去除成熟种子的胚 (含大量麦胚凝集素等糖蛋白 ) ,发现裂解物的黏稠度明显下降 ;二、在裂解粗提物中加入CTAB至终浓度为 0 2 % ,可去除大部分多糖 ;三、异丙醇沉淀RNA之后 ,充分溶解 ,离心去除残留的不溶性多糖等杂质。结果表明

mCTAB-dLiCl法高效提取花生各组织部位RNA及其验证

【目的】探讨花生不同组织部位RNA提取方法,为开展花生分子生物学研究奠定基础。【方法】在CTAB法的基础上,设计一种改良的mCTAB-dLiCl法,其使用高质量体积分数的KAC除去组织中的多糖,使用两次10.0 mol/L的LiCl沉淀RNA,采用琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量,核酸蛋白分析仪测定RNA纯度,并通过逆转录、RT-PCR和cDNA-SCoT验证其质量。【结果】采用mCTAB-dLiCl法的RNA产率为554.80μg/g,RNA的A260/A280比率为1.89,RNA非变性琼脂糖凝胶电泳未出现可见的DNA条带;扩增的28S和18S条带比值为2∶1,且条带清晰无拖尾现象;提取的RNA通过逆转录、RT-PCR扩增和cDNA-SCoT扩增验证,均获得较好的扩增效果,获得的RNA和cDNA质量好。【结论】mCTAB-dLiCl RNA提取方法是一种高效提取花生各组织部位RNA的方法,可在花生分子生物学研究中应用。

从茶树种胚中提取总RNA方法的研究

茶树种胚中富含多糖和多酚类化合物,这增加了总RNA的提取难度。试验以茶树种胚为研究对象,通过对几种提取总RNA方法的比较与分析,认为用改进的CTAB-LiCl法提取茶树种胚总RNA的产率较高,质量好,可直接用于cDNA的合成、cDNA-AFLP分析等分子生物学实验操作。