金黄色葡萄球菌CCT融合蛋白的表达及免疫活性研究

利用前期筛选的具有良好免疫原性的S.aureus表面Clfa蛋白免疫优势片段Clfais和TraP蛋白的融合重组蛋白,加入CTB分子内佐剂,以表达CTB-Clfais-TraP(CCT)蛋白和研究CCT免疫活性。实验采用重叠PCR方法将分子内佐剂CTB与Clfais-TraP基因串联,并将CTB-Clfais-TraP插入到表达载体p ET32-a(+)上,构建p ET32-a(+)-CTB-Clfais-TraP重组质粒,经鉴定后,重组质粒转化到大肠埃希菌BL21中表达目的蛋白,利用Western blot方法对其鉴定,以ELISA方法检测CCT蛋白的免疫活性。实验结果表明表达的CCT蛋白大小为87.6 ku,CCT能与Clfais、TraP免疫小鼠血清发生反应,表明CCT具有免疫活性,不受CTB分子影响,这为进一步研究CTB提高Clfais-TraP蛋白的免疫活性奠定了良好基础。