猪源病毒细胞毒性T淋巴细胞表位研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子,也称为猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen,SLA)Ⅰ类分子,在机体抗原递呈、器官移植、细胞免疫应答和调控等方面起重要作用。细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位是抗原经抗原递呈细胞加工后,与SLA-Ⅰ类分子结合并递呈的线性肽段,具有高度特异性,在机体抗原识别递呈和细胞免疫抵抗病毒感染方面发挥着关键作用。CTL表位能够刺激CTLs发挥细胞杀伤作用,主要表现为杀伤病毒。作者将对口蹄疫病毒、非洲猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒等几种重要的猪源病毒的CTL表位研究现状进行综述,并利用生物信息学手段分析SLA-Ⅰ与CTL表位结合基序特征,以期为今后相关猪源病毒CTL表位的研究和多表位疫苗的设计提供参考。

煤基费托合成产物产业链延伸研究进展

煤制油行业的主要产品包括柴油、石脑油和液化石油气,但由于产品结构单一,市场的抗风险能力较弱。根据煤基费托合成产物特性,研究开发出高附加值、精细化加工利用技术,不仅可以提升煤制油企业的经济效益,而且还能够为煤制油产业的健康发展提供有力支撑。本文综述了我国煤基费托合成产物产业链现有的发展情况,聚焦低温费托合成技术和产业链产物特点,对现有的8种高附加值产品做了综述。

IL-17D调控CD93^(+)CTL在肺脏肿瘤微环境中的杀伤功能及桔梗的促进作用

目的:探讨IL-17D调控CD93^(+)CTL在肺脏肿瘤微环境(TME)中的杀伤功能及桔梗(PG)的促进作用。方法:采用PG或IL-17D处理小鼠肺脏B16黑色素瘤模型和对照小鼠,观察肺脏肿瘤克隆形成;应用单细胞测序、免疫荧光染色、流式细胞术等方法检测肿瘤小鼠肺脏IL-17D表达变化;采用单细胞测序、流式细胞术等方法分别检测各组小鼠肺脏CD93^(+)CTL含量、细胞表型和功能因子改变(包括CD107a、穿孔素、颗粒酶B、趋化因子CCL2、CXCL9及趋化因子受体CCR2、CXCR3等);利用EL4细胞系,采用Western blot、RT-PCR检测桔梗皂苷D对IL-17D及其转录调控因子NRF2表达的作用。结果:小鼠肺脏CD93^(+)CTL较CD93−CTL高表达穿孔素、CD107a等细胞毒性效应因子和趋化因子受体CXCR3、CCR2等,而颗粒酶B分泌能力无显著差异;小鼠肺脏肿瘤模型中,肺脏IL-17D表达及其CD93^(+)CTL含量明显下降(P<0.001);肿瘤小鼠经IL-17D回补实验,或经PG处理10 d后,肺脏IL-17D和CD93^(+)CTL比例和数量明显增多(P<0.05),肿瘤克隆明显减少。同时,肿瘤局部CD93^(+)CTL募集和功能相关细胞因子CCL2、CXCL9、IL-17D等表达明显上调。PG对IL-17D的上调作用在EL4细胞系体外实验中也得到了验证,桔梗皂苷D可显著上调EL4细胞IL-17D及其转录调控因子NRF2表达。结论:中药PG及其提取物可上调肺脏IL-17D表达,增强肺脏CD93^(+)CTL浸润和杀伤功能,拮抗肿瘤在肺脏的恶性进展,是PG改善肺脏TME的重要药理机制。

一类基于游离病毒感染和细胞-细胞传播的宿主体内HIV-1感染动力学模型

该文考虑一类具有细胞-细胞传播、胞内时滞、饱和CTL免疫反应和免疫损害的HIV-1感染动力学模型.通过计算得到了免疫未激活和免疫激活再生率.通过分析特征方程根的分布,讨论了可行平衡点的局部渐近稳定性.通过构造适当的Lyapunov泛函并应用LaSalle不变性原理,证明了模型的全局动力学由免疫未激活和免疫激活再生率决定:如果免疫未激活再生率小于1,则病毒未感染平衡点是全局渐近稳定的;如果免疫未激活再生率大于1且免疫激活再生率小于1,则免疫未激活感染平衡点是全局渐近稳定的;如果免疫激活再生率大于1,则慢性感染平衡点是全局渐近稳定的.此外,通过数值模拟说明了免疫损害和细胞-细胞传播对模型动力学的影响.

基于约束总体最小二乘法的超宽带掘进机定位算法研究

为推进煤矿巷道内掘进机自主定位和定向综掘无人化作业,针对定位时传感器之间由于系统同步时钟偏差引起的定位误差问题,以及由于最小二乘法本身的降正则化特性引起系数矩阵严重病态,表现为系数矩阵中的微小误差会导致定位结果产生巨大偏移的问题。提出了一种基于超宽带的到达时间差(TDOA)约束总体最小二乘法(CTLS)的定位算法:将TDOA非线性观测方程组做线性化处理,结合系统误差在观测方程组的分布特性,采用CTLS算法得到经优化后的目标函数,通过牛顿迭代法得到目标位置估计。实验结果表明,在TDOA测量误差较小的条件下,目标位置估计精度能够接近克拉美罗下限(CRLB)。

小胶质细胞介导的T细胞应答在大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中的致病作用

目的探讨大鼠维持中枢神经系统(CNS)炎症的小胶质细胞、T细胞亚群之间的相互效应关系,以期部分解释实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中中枢神经系统(CNS)持续存在病理损伤的原因。方法用鼠源性髓鞘碱性蛋白MBP68-86抗原肽制备Lewis大鼠EAE模型,透射电子显微镜观察脑组织超微结构,免疫荧光染色、Western blot、流式细胞术和RT-qPCR检测外周血、脾脏、脑组织中相关分子的表达。结果MBP68-86抗原肽成功制备出EAE模型。流式细胞及免疫荧光分析发现EAE模型组外周血CD4^(+)T(28.01%)、CD8^(+)T(12.81%)细胞的数量及脾脏中MHCⅡ的表达明显上调(P<0.05)。同时,在中枢神经系统中小胶质细胞的CD86^(+)CD206^(-)M1样巨噬细胞的数量明显多于CD86^(-)CD206^(+)M2样巨噬细胞。Western blot和RT-qPCR结果显示EAE模型组小胶质细胞及脑组织中MHCI、IL-10、TGF-β、CD32b,Granzyme B、Perforin、FASL分子表达明显上调(P<0.05)。结论大鼠EAE免疫应答过程中,CNS存在一个由CTL和Th2细胞共同参与的免疫应答环路,这可能是维持MS/EAE时间-空间多发性的主要机制。

猪圆环病毒2型全基因组序列分析及Cap蛋白CTL表位预测

【目的】监测当前湖南省猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)流行毒株及其衣壳蛋白(capsid protein,Cap)变异情况,并预测Cap蛋白细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位,为新型PCV2疫苗研制和病毒净化提供参考依据。【方法】本研究对2019-2021年于湖南省6个地区收集的17份PCV2阳性组织样品进行PCV2全基因组序列扩增及测序分析,绘制系统进化树,利用生物信息学方法分析Cap蛋白氨基酸变异情况,并预测CTL表位。【结果】系统进化树显示,获得的17株PCV2全基因组序列中,1株PCV2a、7株PCV2b和9株PCV2d。Cap蛋白氨基酸序列比对分析发现,共有16个氨基酸残基突变位点位于病毒Cap蛋白表面,且有11个突变位点参与构象型表位的形成。此外,共预测出9个PCV2 Cap蛋白潜在的CTL表位,其中4个表位(16-24、28-36、136-144和179-187位氨基酸)在GenBank的1610株PCV2不同基因型毒株中高度保守。通过TCR-pMHC复合物3D结构对4个保守性表位进一步分析,结果显示,这4个肽段均能与MHCⅠ分子和TCR形成稳定的TCR-pMHC复合物。【结论】本研究结果表明,PCV2b和PCV2d为当前湖南省主要流行的基因型,且表现出高度变异;预测的CTL表位可作为候选抗原表位。

具有饱和发生率和分布时滞的HIV免疫模型的稳定性

本文提出一类具有饱和发生率和抗体免疫反应的细胞内感染的时滞HIV感染模型,包括未感染细胞、潜伏感染细胞、感染细胞、游离HIV病毒和CTL免疫反应细胞。考虑4种时滞:潜伏感染时滞、细胞内时滞、感染细胞转化病毒时滞和CTL免疫反应时滞。定义2个阈值:感染基本再生数R 0和CTL免疫再生数R 1,得到了模型的3类平衡点:无感染平衡点、免疫灭活感染平衡点和免疫激活感染平衡点。通过分析特征方程、构造Lyapunov函数和LaSalle不变原理,建立了各平衡点局部以及全局渐近稳定性的判定准则。

时态逻辑描述能力比较研究

时态逻辑在软件确认和模型检查中有广泛的应用。时态逻辑的不同变体有不同描述能力。正确理解时态逻辑的描述能力有助于书写系统特性的正确时态逻辑公式特性。论文从语法、语义域定义和语法到语义域映射三个方面对不同时态逻辑加以描述,对时态逻辑描述能力进行了比较。

基于Petri网的服务组合故障诊断与处理

通过分析服务组合的故障需求,给出服务组合故障处理的框架.该框架采用Petri网来解决服务组合的错误发现及其处理问题.重点讨论了可用服务失败、组件失败及网络故障的情况,并相应地给出了服务组合故障模型.在此基础上对故障处理模型进行分析,给出服务组合故障处理正确性准则,并证明了其正确性.最后,采用CTL(computational tree logic)描述相关性质并提出验证服务组合故障分析的实施算法.仿真结果表明,该方法在处理服务组合故障时具有一定的优越性.

乙型肝炎病毒HBcAg免疫优势CTL表位多肽在HBV转基因小鼠体内的免疫学功能研究

目的 探讨基于乙型肝炎 (Hepatitisbvirus,HBV)核心抗原免疫优势细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlympho cyte,CTL)表位的治疗性多肽抗原组分、结构以及在HBV转基因小鼠体内的免疫学功能。方法 用分子设计的理论和方法 ,设计基于HBV核心抗原免疫优势性CTL表位、Pre S2B细胞表位及破伤风类毒素通用TH 表位的治疗性多肽疫苗候选分子 ,经Merrifield固相多肽合成技术合成 ,经高效液相色谱 (HPLC)纯化、鉴定。以HBV转基因小鼠为试验对象 ,进行体内免疫学功能研究。结果 所设计治疗性多肽分子可在体诱导较强的抗原特异性CD8+ T细胞应答和适度的抗体反应 ,并抑制HBV特异性抗原的分泌和乙型肝炎病毒复制。结论 提示所设计基于HBV核心抗原免疫优势性CTL表位、Pre S2B细胞表位及破伤风类毒素通用TH 表位的多肽分子可作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗候选分子。

当归多糖及当归内酯对小鼠细胞免疫功能的影响

利用混合淋巴细胞培养反应（ＭｉｘｅｄＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅＲｅａｃｔｉｏｎ，ＭＬＲ）研究了传统中药当归（ＡｎｇｅｌｉｃａＳｉｎｅｎｓｉｓＤｉｅｌｓ，ＡＳＤ）来源的两种免疫调节剂当归多糖（ＡＳＤＰ）、当归内酯（ＡＳＤＥ３）的免疫作用机理。结果表明：两者均能明显促进由同种异型抗原刺激的正常小鼠及Ｓ１８０荷瘤小鼠脾细胞增殖（Ｐ＜０．０１），其促进作用与剂量之间呈依赖关系。在一定浓度范围内（１６～５００μｇ／ｍｌ）对未经活化的脾细胞无诱导增殖作用。选择促进效应较大的药物剂量，培养９６ｈ，对活化的Ｔ淋巴细胞亚群的变化标记检测，结果显示：ＡＳＤＰ可明显增加Ｌ３Ｔ＋４细胞比例，ＡＳＤＥ３可明显增加Ｌ３Ｔ＋４和Ｌｙｔ＋２细胞的数量。在浓度为２５０μｇ／ｍｌ时，ＡＳＤＥ３增强细胞毒Ｔ细胞的功能，其杀伤活性增加８０％。

基于HBV核心抗原CTL表位的治疗性多肽在体诱导抗原特异性细胞免疫应答的研究

目的 探讨基于表位的治疗性多肽抗原组分、结构与诱导免疫应答之间的关系。方法 用分子设计的理论和方法 ,设计基于HBV抗原免疫优势性CTL、Th及B细胞表位的 3种治疗性多肽候选疫苗分子 ,经Merrifield固相多肽合成技术合成 ,并经HPLC纯化、鉴定。以BALB c(H 2 d)纯系小鼠为实验对象 ,进行体内免疫学功能研究。结果 所设计治疗性多肽分子可在体诱导较强的抗原特异性CTL应答和适度的抗体反应。Th、B细胞表位的引入可增强CTL表位肽的效应。结论 提示在治疗性表位多肽疫苗的分子设计中 ,引入B -、Th表位可显著提高CTL表位肽的免疫原性。

乙型肝炎病毒抗原表位模拟多肽诱导CTL应答的研究(英文)

目的 应用分子设计技术设计治疗性多肽 ,以探讨基于乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus,HBV)核心抗原优势细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlymphocyts,CTL)表位的多肽设计与启动HLA Ⅰ限制性HBV特异性CD8+ T细胞应答的关系。方法 合成含HBcAg免疫优势CTL表位、Pre S2蛋白优势B细胞表位和破伤风类毒素通用TH 表位的多肽 ,并进行HLA A2 + 人PBMC体外和Balb/c小鼠体内免疫学功能研究。结果 上述多肽可在体内外诱导CD8+ CTL应答。以棕榈酸为分子内佐剂的Palm p4 4可诱导较强的CD8+ CTL应答 ,与单纯多肽比较不需另加佐剂。结论 脂类分子内佐剂可显著提高多肽的免疫原性 ;Palm p4 4可作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗设计较有效的候选分子。

一种形式化验证方法:模型检验

模型检验作为一种形式化验证方法,近年来在各种硬件、软件设计中得到了广泛应用.文中首先介绍了描述系统行为的Kripke结构和描述系统性质的CTL逻辑,然后介绍了模型检验中常用的两种算法:标记算法和基于固定点的算法,最后介绍了为避免内存爆炸而引入的符号模型检验技术.

TLSF_(JM)对同种异体抗原诱导的小鼠杀伤性T细胞分化及效应功能的影响

本文以小鼠混合淋巴细胞反应为模型，研究了ＪＭ 急性Ｔ 淋巴细胞白血病细胞分泌的抑制因子（ ＴＬＳＦＪＭ）在体外对同种异体抗原诱导小鼠Ｔ 细胞增殖和杀伤性Ｔ 细胞分化的影响。结果表明：（１） ＴＬＳＦＪＭ 可明显抑制同种异体抗原刺激的Ｔ 细胞增殖， 且具有剂量依赖性；（２） ＴＬＳＦＪＭ 能有效地抑制同种异体抗原诱导的小鼠ＣＴＬ 分化；（３）ＴＬＳＦＪＭ 对杀伤相ＣＴＬ 的杀伤活性没有抑制作用。

人工合成HLA衍生肽对CTL和NK细胞毒功能的影响

目的 :探讨合成HLA衍生肽对CTL和NK细胞毒功能的影响。方法 :人工固相合成 2种HLA衍生肽 (P1:HLA B 0 70 1 75 84和P2 :HLA B 2 70 2 75 84) ,分别用MTT法和LDH释放法 ,在体外观察HLA衍生肽对CTL和NK细胞毒功能的影响及其等位基因特异性。结果 :P2可显著抑制CTL的细胞毒效应 (P <0 0 1) ,这种抑制作用不具有等位基因特异性 ,而对NK的细胞毒功能则没有明显影响。结论 :合成HLA肽对CTL和NK细胞毒功能的影响只与HLA肽的序列有关 ,P2即HLA B 2 70 2 75 84,可抑制CTL的细胞毒功能。

铝电解控制中灰关联规则挖掘算法的应用

在事务拓扑空间的基础上,将灰色系统理论引入属性集的关联规则挖掘中,提出了一种新的适用于铝电解工业控制现场的灰关联度挖掘框架,并给出了基于该框架的灰关联规则挖掘算法,即Gray＿CTL挖掘算法。将算法分解为两个小问题:1)计算关于时间属性的灰关联度,这是算法的核心;2)挖掘灰关联规则。以电解槽的热平衡数据挖掘为例,对某电解槽一个月的生产数据进行分析后,获得的灰关联规则说明该段时间内分子比、槽电压等因素对温度的影响程度较大。

两种白血病细胞抗原负载DC的体外诱导特异性CTL应答的比较

目的: 比较树突状细胞(DC)与白血病细胞融合及白血病细胞冻融抗原负载DC两种白血病DC疫苗诱导抗原特异性CTL应答的能力.方法: 采用羟乙基淀粉-Ficoll两步法分离外周血单个核细胞(PBMC), 通过贴壁2 h获得黏附的单核细胞, 用GM-CSF加IL- 4诱导培养5 d收获细胞.将细胞分为4组: A组将K562细胞或原代慢性粒细胞白血病(CML)细胞在500 g/L PEG-100 mL/L DMSO诱导下与DC融合; B组加入相应细胞数量的白血病细胞冻融抗原; C组将K562细胞或CML细胞与DC共培养; D组: 单独DC培养组.融合前以红色荧光染料PKH26标记K562细胞, 采用流式细胞仪(FCM)检测PKH26/FITC-抗HLA-ABC抗体双标细胞并评估融合率.培养的第6天, 加入TNF-α诱导DC成熟, 然后分别与自体T细胞共培养, 用MTT比色法检测各组CTL对靶细胞的杀伤活性.结果: GM-CSF加IL- 4和TNF-α依次诱导成熟的DC具有经典的DC的形态和表型特征, 在PEG-DMSO的介导下, DC与白血病细胞的融合率为(17.33～29.94)%.两种抗原负载方案激活的CTL均对表达K562抗原的细胞具有特异性的细胞毒作用.在效靶比相同时, 融合组诱导CTL的杀伤活性强于冻融抗原致敏DC组.结论: 与冻融抗原致敏的DC相比, DC与白血病细胞融合细胞递呈抗原的效率更高, 体外诱导的CTL特异性杀伤靶细胞的作用更强, 有可能用于白血病的免疫治疗.

CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位的鉴定

目的: 鉴定CTL识别的HLA A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位。方法: 以细胞因子从外周血单个核细胞(PBMC)中诱导树突状细胞(DC), 通过形态学观察和流式细胞术进行鉴定。用表位预测法选取并合成两种肽分子, 分别脉冲成熟的DC, 并刺激HLA- A2+健康人自体CD8+ T细胞。1wk后, 用脉冲肽的自体PBMC以每 7d的间隔刺激该CD8+T细胞 3次。以共接受 4次抗原肽刺激的T细胞作为CTL,用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验, 检测CTL对靶细胞的杀伤效应。用酶联免疫斑点法 (ELISPOT), 检测CTL中抗原特异性分泌IFN- γ的T细胞数。结果: 形态学和流式细胞术的结果显示, PBMC可诱生成熟的DC。肽L235(FLPDHINIV)诱导的CTL, 可特异性杀伤L235脉冲的T2细胞和OVA66+、HLA A2+的SW480细胞, 且L235诱导的特异性分泌IFN- γ的T细胞数增加。结论: 卵巢癌相关抗原OVA66的HLA A2限制性CTL表位L235, 能激发对肿瘤抗原的特异性免疫应答, 为制备肿瘤特异性肽疫苗奠定了实验基础。