Tju103和CTLA4-Ig诱导MHC半相合小鼠骨髓移植耐受比较

目的:观察Tju103和CTLA4-Ig各自对MHC半相合小鼠骨髓移植免疫耐受的诱导。方法:半相合供鼠T细胞与受鼠抗原、Tju103(或CTLA4-Ig)共育后与骨髓细胞混合移植,观测移植后受情况。结果:A.单纯照射组:全部小鼠于照射后11d内死于造血衰竭;B.白血病CTX治疗组:全部小鼠于接种白血病细胞后16～23d死于白血病;C.单纯移植组:全部小鼠于移植后21d内死于移植物抗宿主病(GVHD);D.CsA预防组:5只小鼠于移植后8～22d死亡,1只死于白血病,各有2只死于GVHD和感染,5只活过30d;E.Tju103处理组:4只小鼠于移植后9～26d死亡,2只死于GVHD,各有1只死于白血病和感染,6只活过30d;F.CTLA4-Ig处理组:2只小鼠于移植后17～26d死亡GVHD,8只活过30d。结论:Tju103和CT-LA4-Ig均明显延长生存期,降低GVHD发生和严重程度,CTLA4-Ig保留有抗感染和移植抗白血病(GVL)作用,而Tju103没有。

CTLA4 Ig在诱导小鼠心脏移植免疫耐受中的作用

目的 通过建立小鼠心脏移植模型 ,探讨CTLA4Ig在免疫抑制和诱导免疫耐受中的作用。方法 建立小鼠心脏移植模型 ,供体分别为DBA/2和 6 15新生鼠心脏 ,受体为BALB/c小鼠 ,移植后分别予以CTLA4Ig 0 .1、1、5mg·kg-1·d-1,治疗 1周 ,观察不同剂量CTLA4Ig对新生鼠移植心脏存活时间的影响 ;BALB/c小鼠首次移植 2周后再次移植DBA/2或 6 15新生鼠心脏 ,观察CTLA4Ig对再次移植心脏存活的影响。结果 与对照组相比 ,CTLA4Ig 0 .1mg·kg-1·d组 ,移植心脏的存活时间不能延长 ,CTLA4Ig 1mg·kg-1·d和 5mg·kg-1·d-1组能显著延长心脏的存活时间 ,但两组间差异不显著 (P >0 .0 5 )。再次移植 6 15心脏各组 ,移植心脏的存活时间均无显著延长 ,而再次移植DBA/2新生鼠心脏 ,CTLA4Ig 1mg·kg-1·d-1和 5mg·kg-1·d-1组 ,其移植心脏的存活时间仍然能显著延长 (P <0 .0 1)。结论 CTLA4Ig能延长新生鼠心脏移植存活时间 。

CTLA4-Ig影响T细胞功能及机理的初步研究

目的 :研究CTLA4 Ig融合蛋白对外周血T淋巴细胞活化的抑制作用及机理。方法 :分离新鲜人外周血单个核细胞 ,观察CTLA4 Ig对淋巴细胞转化和混合淋巴细胞培养的作用 ,用流式细胞术观察CTLA4 Ig对T细胞表面CD2 5表达的影响 ,最后通过EMSA方法检测激活T细胞中核蛋白的变化。结果 :CTLA4 Ig能够抑制淋巴细胞转化和混合淋巴细胞反应 ,减低T细胞表面CD2 5的表达 ,抑制核内与IL 2表达相关的RE AP结合因子的活化。结论 :CTLA4 Ig通过多种信号途径对T细胞的活化起作用 ,其机制之一是抑制核内结合于IL 2增强子RE AP位点的核因子的活化。

负载pCTLA4-Ig基因的猪未成熟树突状细胞抑制异种脾细胞的增殖

目的:建立猪外周血来源的未成熟树突状细胞(im-DC)体外诱导、扩增方法。探讨负载猪源性pCTLA4-Ig重组腺病毒的猪imDCs对大鼠脾细胞增殖的影响。方法:家猪外周血单个核细胞(PBMC),以rpGM-CSF(30μg/L)和rpIL-4(20μg/L)体外诱导培养,收集悬浮细胞经电镜、流式细胞仪鉴定。利用Adv-pCTLA4-Ig转染猪imDCs,RT-PCR鉴定。对比转染组与未转染组imDCs刺激SD大鼠脾细胞增殖的能力。结果:获得第4～5天悬浮细胞具有典型的imDCs形态特征,表达猪源性DC的特异性标志SLA-DR、CD172a,而CD80/CD86表达较低。Adv-pCTLA4-Ig转染猪imDCs行RT-PCR出现pCTLA4-Ig、吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)基因的表达。混合淋巴细胞培养转染组与未转染组imDCs刺激指数有显著性差异(P<0.05)。结论:联合应用rpGM-CSF和rpIL-4可诱导猪PBMC衍生成大量的imDCs。负载pCTLA4-Ig基因的猪imDCs,能够表达IDO,降低对异种抗原的免疫应答,显著抑制异种脾细胞增殖。

Tju103和CTLA4-Ig诱导T淋巴细胞免疫耐受的比较(英文)

目的观察比较Tju103和CTLA4-Ig分别调节、诱导T淋巴细胞免疫耐受的作用。方法用经丝裂霉素处理的异基因正常BALB/c(H-2d)小鼠巨噬细胞做耐受诱导原,分别用Tju103和CTLA4-Ig体外训导、调节C57BL/6(H-2d)小鼠T淋巴细胞,通过增殖效应(单向混合淋巴细胞反应,MLR)和杀伤效应(MTT法),考察经训导的C57BL/6小鼠T淋巴细胞分别对BALB/c小鼠和CBA(H-2k)小鼠脾细胞以及EL9611(H-2d)红白血病细胞的增殖效应和杀伤效应的改变。结果经Tju103调节后,C57BL/6小鼠T淋巴细胞对BALB/c和CBA小鼠脾细胞以及EL9611红白病细胞的增殖反应和杀伤效应抑制作用明显,未能诱导对已接触抗原(BALB/c小鼠)产生特异性免疫耐受。经CTLA4-Ig孵育后,C57BL/6小鼠T淋巴细胞对这三种细胞的增殖反应和杀伤效应抑制作用明显;对已接触抗原呈现免疫耐受,而对第三种抗原(CBA小鼠)和EL9611白血病细胞保持反应性。结论在特异抗原存在下,Tju103和CTLA4-Ig均能明显抑制异基因小鼠T淋巴细胞增殖反应性和杀伤效应,但Tju103诱导非特异免疫抑制,而CTLA4-Ig诱导特异免疫耐受,更适合于诱导移植免耐受。

CTLA4-Ig基因修饰的树突状细胞体外对Th1/Th2平衡的影响

目的:探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4 Ig)基因修饰的树突状细胞(CTLA4 Ig-DCs)体外对Th1/Th2平衡的影响。方法:通过腺病毒载体将目的基因(CTLA4 Ig)转染至小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)。采用流式细胞术(FCM)检测DC表面分子和胞内CTLA4 Ig的表达;采用混合淋巴细胞反应检测DC刺激同种异体T细胞的能力,ELISA法检测DC抗原提呈反应中Th1和Th2类细胞因子IFN-γ和IL-4分泌水平。结果:CTLA4 Ig基因成功转染至DC,转染率约为80%,制备的CTLA4 Ig-DCs稳定表达CTLA4Ig,表面分子CD86呈现低表达;CTLA4 Ig-DCs可有效抑制T细胞增殖,降低抗原提呈反应上清中IFN-γ和IL-4的分泌,并增加IFN-γ/IL-4比值。结论:通过腺病毒将CTLA4 Ig转染DC并且高效表达,可有效降低DC表面CD86分子,抑制同种异体T细胞反应,并能影响体外Th1/Th2水平。

AAV体外介导hCTLA4-Ig在新生猪胰岛细胞中的表达与生物学活性

目的:探讨AAV-hCTLA4-Ig体外感染猪胰岛细胞后,hCTLA4-Ig基因的表达能力及生物学活性。方法:腺相关病毒载体(AAV)介导hCTLA4-Ig体外转染新生猪胰岛细胞(NIPs),用RT-PCR和免疫细胞化学法检测胰岛细胞内hCTLA4-Ig mRNA及蛋白质水平的表达。转染后的新生猪胰岛细胞与人淋巴细胞共孵育,通过ELISA法检测培养基中IL-2,IFN-γ,TNF-α细胞因子水平的变化。并观察转染组与对照组葡萄糖刺激后的胰岛素释放反应。结果:转染组NIPs可检测到hCTLA4-Ig基因及蛋白表达;与人淋巴细胞共孵育后IL-2,TNF-α,IFN-γ浓度明显低于对照组(P<0.01);且葡萄糖刺激胰岛素释放反应与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:AAV-CTLA4-Ig体外转染的胰岛细胞能够表达具有生物学活性的hCTLA4-Ig,可抑制T细胞激活,而胰岛细胞生理功能不受影响。

CTLA4-Ig联合骨髓细胞诱导小鼠心脏移植耐受

目的:探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(Cytotoxic T Lymphocyte Antigen 4-i mmunoglobulin,CTLA4-Ig)与供体骨髓细胞联合应用诱导器官移植免疫耐受的可行性。方法:应用小鼠腹部心脏移植模型,实验组小鼠术中输注供体骨髓细胞,术后腹腔注射CTLA4-Ig。观察移植心脏存活时间,并进行病理分析,检测迟发性超敏反应(Delayed Type Hyper-sensitivity,DTH)。后期进行供体来源的皮肤移植并观察存活时间。结果:实验组移植心脏存活时间较对照组显著延长,达(79.3±23.7)d;排斥反应减轻,并产生了供体抗原特异性的免疫低反应性;后期进行的皮肤移植实验中,供体来源的皮肤存活时间也显著延长,达(23.0±3.1)d。结论:CTLA4-Ig与骨髓细胞联合应用可以显著延长移植物存活时间,诱导实体器官移植免疫耐受。两者具有明显的协同作用。

CTLA4-Ig诱导大鼠同种肝细胞移植免疫耐受的实验研究

目的研究CTLA4-Ig诱导在D-氨基半乳糖致急性肝功能衰竭大鼠脾内同种异体肝细胞移植的免疫耐受。方法急性药物性肝衰模型:用10%D-氨基半乳糖溶液按1.0 g/kg一次性大鼠腹腔注射;用Ⅳ型胶原酶肝脏原位灌注,制备肝细胞悬液,浓度为4×107/ml,2 h内经脾移植;24只用D-氨基半乳糖诱导的急性肝衰大鼠,24 h后均进行经脾同种异体肝细胞移植,然后随机分为两组,一组为治疗组,腹腔一次性注射CTLA4-Ig,另一组为对照组,不予处理。两组均分别于术后第1,3,5,7天观察IL-2、TNF、肝功能及脾脏HE染色的变化。结果治疗组与对照组比较,术后治疗组IL-2含量明显下降,差异有显著性,P<0.05;术后TNF含量两组之间差异无显著性,P>0.05;术后肝功能治疗组比对照组下降明显,P<0.05。组织学改变:术后第7天治疗组仍可见肝细胞或肝细胞团,对照组脾内见大量淋巴细胞浸润,但很少见肝细胞。结论CTLA4-Ig能诱导大鼠经脾同种异体肝细胞移植的免疫耐受,促使急性肝衰大鼠肝功能得到改善。

TJU103联合CTLA4-Ig对T细胞表型和分泌细胞因子的影响

本研究应用HLA半相合供、受者间单向混合淋巴细胞培养 (MLC )体系 ,体外检测了联合应用TJU10 3和CTLA4 Ig对供者T细胞增殖以及表型和分泌细胞因子的影响。结果显示 ,单独应用TJU10 3和CTLA4 Ig均能够降低T细胞的增殖活性 ,二者联合应用具有明显的协同抑制增殖效应 ,并能够使CD4 + CD6 9+ /CD8+ CD6 9+ 比值降低 ,Th1型细胞因子 (TNF α ,IFN γ )分泌减少 ,Th2型细胞因子 (IL 4 )分泌增加。提示TJU10 3和CTLA4 Ig联合应用能够阻断供者T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路 ,抑制T细胞的增殖活性 ,使CD4 + CD6 9+ /CD8+ CD6 9+ 比值降低 ,并能够调节Th细胞分化 ,诱导Th细胞免疫偏离 ,使辅助性T细胞更多地向Th2细胞方向分化 ,可以作为一条预防临床HLA半相合造血干细胞移植重度移植物抗宿主病 (GVHD )

基因转移CTLA4-Ig对异种胰岛移植排斥反应的影响

目的探讨基因转移细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)对异种胰岛移植排斥反应的影响。方法用携带基因CTLA4-Ig的重组腺病毒转染人胰岛细胞,植入糖尿病大鼠肾胞膜下,建立人-大鼠异种胰岛移植模型,观察糖尿病大鼠移植后血糖变化、生存情况及移植物病理形态学改变,检测移植物CTLA4-Ig、胰岛素的表达和移植大鼠IL-2、TNF-α的水平变化。结果(1)糖尿病大鼠胰岛移植后2d血糖降至正常,对照组和转染组血糖平均分别在移植后8d和25d升高。(2)转染组移植物存活时间(28±6)d,较对照组(10±2)d显著延长(t=10.52,P<0.01)。(3)移植大鼠生存时间:转染组(48±8)d显著长于对照组(21±6)d(t=12.23,P<0.01)。(4)对照组在移植后1周内,IL-2、TNF-α水平均急剧上升,较移植前显著升高(P<0.01);转染组则较移植前下降。(5)转染组移植物可见CTLA4-Ig和胰岛素的表达。结论基因转移CTLA4-Ig可抑制异种胰岛移植排斥反应,延长移植大鼠和移植物的存活时间。

CTLA4-Ig在树突状细胞中的表达及效应研究

目的 获得CTLA4-Ig转基因修饰的DC细胞,分析表达产物CTLA4-Ig对T细胞活化功能的影响。方法 采用脂质体转染方法将CTLA4-Ig表达载体转入DC细胞,通过ELISA法鉴定转染DC细胞48和72h培养上清液及稳定表达的培养上清液,分离Balb/c小鼠和C57BL/10J小鼠淋巴细胞为反应细胞和刺激细胞,观察CTLA4-Ig对同种细胞混合培养反应的影响。结果 将鼠CTLA4-Ig表达载体转入DC细胞,获得瞬时表达及稳定表达,CTLA4-Ig可抑制单向混合淋巴细胞反应,且效应亦呈剂量依赖性。结论 鼠CTLA4-Ig表达产物对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用,其抑制作用随表达载体转染细胞培养上清液的增加而增强。同时获得了稳定表达CTLA4-Ig融合蛋白的CTLA4-Ig转基因修饰的DC细胞,为以后的工作奠定了基础。

pCDR1 Th表位和CTLA4Ig双基因共表达真核表达载体的构建

目的构建能稳定表达pCDR1 Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体,探讨其在小鼠体内的表达并对表达产物进行鉴定。方法用Touchdown PCR法扩增CTLA4Ig基因,同时引入pCDR1Th表位。将PCR产物连接真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1(+)-CTLA4Ig-pCDR1。将构建表达CTLA4Ig-pCDR1减毒鼠伤寒沙门菌SL7207喂饲BALB/c小鼠,取脾脏进行免疫组化鉴定重组蛋白在动物体内的表达。结果酶切鉴定和基因序列测定显示重组质粒构建成功。重组蛋白在BALB/c小鼠脾脏免疫细胞胞浆中有阳性表达。结论成功构建了能稳定表达pCDR1 Th表位和CTLA4Ig融合基因的真核表达载体。

重组人CTLA4-Ig对T细胞活化功能的影响

目的：分析真核表达产物ＣＴＬＡ４－ Ｉｇ 对Ｔ细胞活化功能的影响。方法：构建并用真核表达系统表达ＣＴＬＡ４ －Ｉｇ，通过蛋白Ａ亲合柱纯化获得纯品；然后观察ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 对淋巴细胞转化功能及Ｔ细胞表面分子ＣＤ２５ 表达的影响；用３Ｈ－ ＴｄＲ掺入法研究ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 对混合淋巴细胞反应的影响。结果：ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 抑制ＰＨＡ对淋巴细胞的转化；同时，抑制ＰＨＡ刺激的淋巴细胞表面ＣＤ２５ 分子的表达，抑制率达５３ ％ ，与对照相比抑制显著（ Ｐ＜０．０５），且这种效应有剂量依赖性；ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 抑制单向混合淋巴细胞反应，抑制率达８７．５３％ ，与对照相比亦抑制显著（ Ｐ＜０ ．０５） ，且效应亦呈剂量依赖性。结论：ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 能有效阻断Ｔ细胞的活化，并且阻断效应是通过多种信号途径起作用的。

CTLA_4-Ig对老年支气管哮喘病人CD_4^+CD_(45)RO^+T细胞功能的影响

目的研究老年支气管哮喘病人周围血CD4+CD45RO+T细胞表达IL-4及IL-13的情况及CTLA4-Ig对其影响。方法用ELISA方法测定老年支气管哮喘病人CD4+CD45RO+T细胞产生IL-4和IL-13的水平及CTLA4-Ig对其影响。结果老年支气管哮喘病人CD4+CD45RO+T细胞分泌IL-4、IL-13增多,IL-13增多较IL-4更为明显(P<0.01),CTLA4-Ig可有效抑制老年哮喘病人CD4+CD45RO+T细胞分泌IL-4和IL-13(P<0.01)。结论CD4+CD45RO+T细胞产生的IL-4和IL-13在老年哮喘发病中起重要作用,CTLA4-Ig可有效抑制IL-4和IL-13的分泌。

腺病毒转染CTLA4-Ig对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠治疗作用的研究

目的探索CTLA4-Ig转基因对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的疗效,为临床治疗多发性硬化(MS)提供新思路。方法将表达CTLA4-Ig的重组腺病毒(AdCTLA4-Ig)注射至Wistar大鼠EAE模型侧脑室内,与地塞米松治疗组对比观察实验动物发病情况和神经电生理改变。结果AdCTLA4-Ig注射后的大鼠EAE发病情况得以改善,脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential,BAEP)和体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)异常改变有所减轻。结论AdCTLA4-Ig对EAE大鼠有治疗作用,其疗效略优于地塞米松。

肾脏足细胞B7-1抗原呈递与CTLA4-Ig研究进展

作为肾小球滤过屏障主要组成部分的足细胞,在特定致炎因素诱导下,可具有抗原呈递的特性,扮演非专职抗原呈递细胞的角色,并启动自身免疫反应,从而导致足细胞损伤和蛋白尿,可能在糖尿病肾病、狼疮性肾炎、微小病变肾病、局灶节段性肾小球硬化及膜性肾病等肾小球足细胞疾病的发病中起作用。因此,阻断由足细胞启动的抗原呈递过程,有望为治疗此类疾病的新的途径。近年来,抗原呈递阻断剂CTLA4-Ig融合蛋白制剂在肾小球疾病的临床实践证实了这种可能,本文就肾脏足细胞B7-1抗原呈递与CTLA4-Ig的研究进展作一综述。

异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys构建及融合蛋白表达

目的构建异源性Th表位修饰的CTLA4-Ig-msBlys的原核表达质粒,并在E.coliBL21中诱导融合蛋白表达,初步检测蛋白特性。方法采用PCR法从质粒pCMV-sBlys扩增sBlys片段,将与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位重组后的msBlys连接CTLA4-Ig片段,克隆入pGEX-KG原核表达载体,用LB固体培养基抗生素筛选、酶切并经琼脂糖凝胶电泳鉴定;将质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys转入E.coliBL21菌株中,实现插入基因的融合表达,用SDS-PAGE和Western-blot检测表达产物。结果 pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys构建正确且最终转入E.coliBL21,得到融合蛋白的表达;CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白在E.coli中获得表达,表达产物的相对分子质量同预期值一致。结论成功构建原核表达质粒pGEX-KG-CTLA4-Ig-msBlys,并在E.coliBL21表达CTLA4-Ig-msBlys融合蛋白,为下一步探讨Blys在自身免疫性疾病患者的治疗作用奠定了基础。

CTLA4-lg融合蛋白基因的表达及其生物学功能的初步研究

目的获得CTLA4全长基因并在真核表达系统中表达。方法通过RT PCR方法 ,从MT2细胞系克隆CT LA4全长基因 ;经引物重叠和半巢式PCR改造 ,获得含抑瘤素M信号肽的CTLA4胞外段DNA ,然后克隆至真核表达载体pIg ,转染COS和CHO K细胞表达。结果获得了CTLA4全长基因 ,序列分析表明 ,该序列与GenBank数据库中的序列一致。在COS和CHO K细胞培养上清中有CT LA4 Ig的表达 ,该产物能抑制淋巴细胞转化。结论真核表达体系表达了有生物学活性的CTLA4 Ig。

B7-CD28/CTLA4共刺激通路与胰岛移植

目的 探讨B7 CD2 8 细胞毒T淋巴细胞相关蛋白 4(CTLA4)共刺激通路在胰岛移植中的重要作用。方法 采用文献回顾的方法对该共刺激通路的分子结构、功能以及有关动物实验的资料进行综述。结果 B7 CD2 8 CTLA4共刺激通路是T淋巴细胞活化、增殖的信号传导通路之一 ,若缺乏共刺激信号 ,则会导致T淋巴细胞呈克隆无反应状态。CTLA4 Ig通过阻断CD2 8介导的共刺激通路 ,使胰岛移植物在受者体内长期存活。结论 通过对B7 CD2 8 CTLA4共刺激通路的研究 ,有助于了解移植胰岛存活的免疫机理。