CTLA4-Ig影响T细胞功能及机理的初步研究

目的 :研究CTLA4 Ig融合蛋白对外周血T淋巴细胞活化的抑制作用及机理。方法 :分离新鲜人外周血单个核细胞 ,观察CTLA4 Ig对淋巴细胞转化和混合淋巴细胞培养的作用 ,用流式细胞术观察CTLA4 Ig对T细胞表面CD2 5表达的影响 ,最后通过EMSA方法检测激活T细胞中核蛋白的变化。结果 :CTLA4 Ig能够抑制淋巴细胞转化和混合淋巴细胞反应 ,减低T细胞表面CD2 5的表达 ,抑制核内与IL 2表达相关的RE AP结合因子的活化。结论 :CTLA4 Ig通过多种信号途径对T细胞的活化起作用 ,其机制之一是抑制核内结合于IL 2增强子RE AP位点的核因子的活化。

负载pCTLA4-Ig基因的猪未成熟树突状细胞抑制异种脾细胞的增殖

目的:建立猪外周血来源的未成熟树突状细胞(im-DC)体外诱导、扩增方法。探讨负载猪源性pCTLA4-Ig重组腺病毒的猪imDCs对大鼠脾细胞增殖的影响。方法:家猪外周血单个核细胞(PBMC),以rpGM-CSF(30μg/L)和rpIL-4(20μg/L)体外诱导培养,收集悬浮细胞经电镜、流式细胞仪鉴定。利用Adv-pCTLA4-Ig转染猪imDCs,RT-PCR鉴定。对比转染组与未转染组imDCs刺激SD大鼠脾细胞增殖的能力。结果:获得第4～5天悬浮细胞具有典型的imDCs形态特征,表达猪源性DC的特异性标志SLA-DR、CD172a,而CD80/CD86表达较低。Adv-pCTLA4-Ig转染猪imDCs行RT-PCR出现pCTLA4-Ig、吲哚胺2,3-二氧化酶(IDO)基因的表达。混合淋巴细胞培养转染组与未转染组imDCs刺激指数有显著性差异(P<0.05)。结论:联合应用rpGM-CSF和rpIL-4可诱导猪PBMC衍生成大量的imDCs。负载pCTLA4-Ig基因的猪imDCs,能够表达IDO,降低对异种抗原的免疫应答,显著抑制异种脾细胞增殖。

Tju103和CTLA4-Ig诱导T淋巴细胞免疫耐受的比较(英文)

目的观察比较Tju103和CTLA4-Ig分别调节、诱导T淋巴细胞免疫耐受的作用。方法用经丝裂霉素处理的异基因正常BALB/c(H-2d)小鼠巨噬细胞做耐受诱导原,分别用Tju103和CTLA4-Ig体外训导、调节C57BL/6(H-2d)小鼠T淋巴细胞,通过增殖效应(单向混合淋巴细胞反应,MLR)和杀伤效应(MTT法),考察经训导的C57BL/6小鼠T淋巴细胞分别对BALB/c小鼠和CBA(H-2k)小鼠脾细胞以及EL9611(H-2d)红白血病细胞的增殖效应和杀伤效应的改变。结果经Tju103调节后,C57BL/6小鼠T淋巴细胞对BALB/c和CBA小鼠脾细胞以及EL9611红白病细胞的增殖反应和杀伤效应抑制作用明显,未能诱导对已接触抗原(BALB/c小鼠)产生特异性免疫耐受。经CTLA4-Ig孵育后,C57BL/6小鼠T淋巴细胞对这三种细胞的增殖反应和杀伤效应抑制作用明显;对已接触抗原呈现免疫耐受,而对第三种抗原(CBA小鼠)和EL9611白血病细胞保持反应性。结论在特异抗原存在下,Tju103和CTLA4-Ig均能明显抑制异基因小鼠T淋巴细胞增殖反应性和杀伤效应,但Tju103诱导非特异免疫抑制,而CTLA4-Ig诱导特异免疫耐受,更适合于诱导移植免耐受。

AAV体外介导hCTLA4-Ig在新生猪胰岛细胞中的表达与生物学活性

目的:探讨AAV-hCTLA4-Ig体外感染猪胰岛细胞后,hCTLA4-Ig基因的表达能力及生物学活性。方法:腺相关病毒载体(AAV)介导hCTLA4-Ig体外转染新生猪胰岛细胞(NIPs),用RT-PCR和免疫细胞化学法检测胰岛细胞内hCTLA4-Ig mRNA及蛋白质水平的表达。转染后的新生猪胰岛细胞与人淋巴细胞共孵育,通过ELISA法检测培养基中IL-2,IFN-γ,TNF-α细胞因子水平的变化。并观察转染组与对照组葡萄糖刺激后的胰岛素释放反应。结果:转染组NIPs可检测到hCTLA4-Ig基因及蛋白表达;与人淋巴细胞共孵育后IL-2,TNF-α,IFN-γ浓度明显低于对照组(P<0.01);且葡萄糖刺激胰岛素释放反应与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:AAV-CTLA4-Ig体外转染的胰岛细胞能够表达具有生物学活性的hCTLA4-Ig,可抑制T细胞激活,而胰岛细胞生理功能不受影响。

CTLA4-Ig对过敏性哮喘小鼠IL-13和气道高反应性的影响

目的:研究哮喘小鼠外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-13的表达情况和气道的高反应性及CTLA4-Ig对其影响,以明确支气管哮喘的免疫发病机制,并为治疗哮喘寻求一条安全有效的途径.方法:将小鼠分成A、B两组,A组(n=24)中的哮喘组(n=8)及CTLA4-Ig治疗组(n=8)用腹腔注射10%卵蛋白0.1 mL(10 mg)及10%氢氧化铝凝胶0.2 mL致敏,建立小鼠哮喘模型,测定外周血及BALF中白细胞总数并进行分类,用ELISA方法测定IL-13水平,并测定CTLA4-Ig对上述各项指标的影响.B组(n=24)中的哮喘组(n=8)及CTLA4-Ig治疗组(n=8)给予雾化吸入乙酰胆碱(0.08～1.25 g·L-1)用于测定气道高反应性.结果:激发后24 h哮喘小鼠外周血白细胞总数及嗜酸性粒细胞比例较正常组(n=8)增高(P=0.013,P=0.014);哮喘小鼠BALF中白细胞总数及嗜酸粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞比例较外周血中增高(P=0.001,P=0.0013,P=0.0001,P=0.037);CTLA4-Ig可以降低哮喘小鼠BALF中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞比例(P=0.0028,P=0.0001,P=0.033);与正常组(n=8)比较,哮喘组血清及BALF中IL-13水平明显升高(P=0.004,P=0.005),与哮喘组比较,治疗组血清及BALF中IL-13水平明显下降(P=0.003,P=0.03);CTLA4-Ig可有效降低小鼠气道高反应性.结论:IL-13在哮喘发病中起重要作用,CTLA4-Ig可抑制哮喘小鼠IL-13的分泌并能降低小鼠气道的高反应性,对哮喘治疗具有临床意义.

CTLA4-Ig联合骨髓细胞诱导小鼠心脏移植耐受

目的:探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(Cytotoxic T Lymphocyte Antigen 4-i mmunoglobulin,CTLA4-Ig)与供体骨髓细胞联合应用诱导器官移植免疫耐受的可行性。方法:应用小鼠腹部心脏移植模型,实验组小鼠术中输注供体骨髓细胞,术后腹腔注射CTLA4-Ig。观察移植心脏存活时间,并进行病理分析,检测迟发性超敏反应(Delayed Type Hyper-sensitivity,DTH)。后期进行供体来源的皮肤移植并观察存活时间。结果:实验组移植心脏存活时间较对照组显著延长,达(79.3±23.7)d;排斥反应减轻,并产生了供体抗原特异性的免疫低反应性;后期进行的皮肤移植实验中,供体来源的皮肤存活时间也显著延长,达(23.0±3.1)d。结论:CTLA4-Ig与骨髓细胞联合应用可以显著延长移植物存活时间,诱导实体器官移植免疫耐受。两者具有明显的协同作用。

CTLA4-Ig在异体移植方面的相关研究进展

CTLA4Ig是一种融合免疫球蛋白,可以选择性地阻断CD28与B7的信号传导通路,导致T细胞免疫失能,诱导对特异性抗原的免疫耐受.本文介绍了其生物学特性、免疫诱导耐受机制及在异体移植方面的研究进展和局限性,其在异体移植方面展示了良好的应用前景.

CTLA4-Ig诱导大鼠同种肝细胞移植免疫耐受的实验研究

目的研究CTLA4-Ig诱导在D-氨基半乳糖致急性肝功能衰竭大鼠脾内同种异体肝细胞移植的免疫耐受。方法急性药物性肝衰模型:用10%D-氨基半乳糖溶液按1.0 g/kg一次性大鼠腹腔注射;用Ⅳ型胶原酶肝脏原位灌注,制备肝细胞悬液,浓度为4×107/ml,2 h内经脾移植;24只用D-氨基半乳糖诱导的急性肝衰大鼠,24 h后均进行经脾同种异体肝细胞移植,然后随机分为两组,一组为治疗组,腹腔一次性注射CTLA4-Ig,另一组为对照组,不予处理。两组均分别于术后第1,3,5,7天观察IL-2、TNF、肝功能及脾脏HE染色的变化。结果治疗组与对照组比较,术后治疗组IL-2含量明显下降,差异有显著性,P<0.05;术后TNF含量两组之间差异无显著性,P>0.05;术后肝功能治疗组比对照组下降明显,P<0.05。组织学改变:术后第7天治疗组仍可见肝细胞或肝细胞团,对照组脾内见大量淋巴细胞浸润,但很少见肝细胞。结论CTLA4-Ig能诱导大鼠经脾同种异体肝细胞移植的免疫耐受,促使急性肝衰大鼠肝功能得到改善。

CTLA4-Ig诱导免疫耐受的机制及应用研究

CTLA4-Ig作为阻断B7-CD28/CTLA4共刺激通路、诱导抗原特异性T细胞克隆无能的最有效制剂,其作用机制主要有三:抑制T细胞的活化和效应过程、调节Th1/Th2型细胞分化、阻断树突状细胞的分化成熟。对于CTLA4-Ig的应用研究很多,取得一定效果的同时也存在局限性。本文从不同途径探讨CTLA4-Ig诱导免疫耐受的作用机理及应用研究,为进一步临床应用提供参考。

基因转移CTLA4-Ig对异种胰岛移植排斥反应的影响

目的探讨基因转移细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4-Ig)对异种胰岛移植排斥反应的影响。方法用携带基因CTLA4-Ig的重组腺病毒转染人胰岛细胞,植入糖尿病大鼠肾胞膜下,建立人-大鼠异种胰岛移植模型,观察糖尿病大鼠移植后血糖变化、生存情况及移植物病理形态学改变,检测移植物CTLA4-Ig、胰岛素的表达和移植大鼠IL-2、TNF-α的水平变化。结果(1)糖尿病大鼠胰岛移植后2d血糖降至正常,对照组和转染组血糖平均分别在移植后8d和25d升高。(2)转染组移植物存活时间(28±6)d,较对照组(10±2)d显著延长(t=10.52,P<0.01)。(3)移植大鼠生存时间:转染组(48±8)d显著长于对照组(21±6)d(t=12.23,P<0.01)。(4)对照组在移植后1周内,IL-2、TNF-α水平均急剧上升,较移植前显著升高(P<0.01);转染组则较移植前下降。(5)转染组移植物可见CTLA4-Ig和胰岛素的表达。结论基因转移CTLA4-Ig可抑制异种胰岛移植排斥反应,延长移植大鼠和移植物的存活时间。

TJU103联合CTLA4-Ig对T细胞表型和分泌细胞因子的影响

本研究应用HLA半相合供、受者间单向混合淋巴细胞培养 (MLC )体系 ,体外检测了联合应用TJU10 3和CTLA4 Ig对供者T细胞增殖以及表型和分泌细胞因子的影响。结果显示 ,单独应用TJU10 3和CTLA4 Ig均能够降低T细胞的增殖活性 ,二者联合应用具有明显的协同抑制增殖效应 ,并能够使CD4 + CD6 9+ /CD8+ CD6 9+ 比值降低 ,Th1型细胞因子 (TNF α ,IFN γ )分泌减少 ,Th2型细胞因子 (IL 4 )分泌增加。提示TJU10 3和CTLA4 Ig联合应用能够阻断供者T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路 ,抑制T细胞的增殖活性 ,使CD4 + CD6 9+ /CD8+ CD6 9+ 比值降低 ,并能够调节Th细胞分化 ,诱导Th细胞免疫偏离 ,使辅助性T细胞更多地向Th2细胞方向分化 ,可以作为一条预防临床HLA半相合造血干细胞移植重度移植物抗宿主病 (GVHD )

共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因修饰原代人内皮细胞包被大鼠胰岛模型的建立

目的:建立以分离培养的原代人脐静脉内皮细胞包被大鼠胰岛细胞模型。方法:分离培养原代人脐静脉内皮细胞,并分别通过免疫组化试验检测人Ⅷ因子相关抗原,透射电镜观察Weible-palade小体,荧光显微镜观察DiI-Ac-LDL的吞噬效果,对所分离的人脐静脉内皮细胞进行鉴定。分离大鼠胰岛细胞,然后在肝素化培养皿中进行共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被。对包被后的胰岛细胞进行形态学观察并检测其包被前后的功能。结果:分离培养的内皮细胞表达人Ⅷ因子相关抗原,电镜下可以观察到Weible-palade小体,荧光显微镜下可以观察到内皮细胞对DiI-Ac-LDL的吞噬。共表达sCD40L-Ig和CTLA4-Ig双基因的内皮细胞包被胰岛模型可以观察到内皮细胞的绿色荧光,未包被胰岛和内皮细胞包被胰岛的胰岛素释放指数分别为4.09和3.94,与未包被胰岛实验组相比,内皮细胞包被胰岛对高糖刺激反应无明显差异,但胰岛素释放量有所减少。结论:成功分离培养并鉴定了原代人脐静脉内皮细胞,并成功建立内皮细胞包被胰岛细胞模型,包被后胰岛功能正常。

CTLA4-Ig在树突状细胞中的表达及效应研究

目的 获得CTLA4-Ig转基因修饰的DC细胞,分析表达产物CTLA4-Ig对T细胞活化功能的影响。方法 采用脂质体转染方法将CTLA4-Ig表达载体转入DC细胞,通过ELISA法鉴定转染DC细胞48和72h培养上清液及稳定表达的培养上清液,分离Balb/c小鼠和C57BL/10J小鼠淋巴细胞为反应细胞和刺激细胞,观察CTLA4-Ig对同种细胞混合培养反应的影响。结果 将鼠CTLA4-Ig表达载体转入DC细胞,获得瞬时表达及稳定表达,CTLA4-Ig可抑制单向混合淋巴细胞反应,且效应亦呈剂量依赖性。结论 鼠CTLA4-Ig表达产物对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用,其抑制作用随表达载体转染细胞培养上清液的增加而增强。同时获得了稳定表达CTLA4-Ig融合蛋白的CTLA4-Ig转基因修饰的DC细胞,为以后的工作奠定了基础。

重组人CTLA4-Ig对T细胞活化功能的影响

目的：分析真核表达产物ＣＴＬＡ４－ Ｉｇ 对Ｔ细胞活化功能的影响。方法：构建并用真核表达系统表达ＣＴＬＡ４ －Ｉｇ，通过蛋白Ａ亲合柱纯化获得纯品；然后观察ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 对淋巴细胞转化功能及Ｔ细胞表面分子ＣＤ２５ 表达的影响；用３Ｈ－ ＴｄＲ掺入法研究ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 对混合淋巴细胞反应的影响。结果：ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 抑制ＰＨＡ对淋巴细胞的转化；同时，抑制ＰＨＡ刺激的淋巴细胞表面ＣＤ２５ 分子的表达，抑制率达５３ ％ ，与对照相比抑制显著（ Ｐ＜０．０５），且这种效应有剂量依赖性；ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 抑制单向混合淋巴细胞反应，抑制率达８７．５３％ ，与对照相比亦抑制显著（ Ｐ＜０ ．０５） ，且效应亦呈剂量依赖性。结论：ＣＴＬＡ４－Ｉｇ 能有效阻断Ｔ细胞的活化，并且阻断效应是通过多种信号途径起作用的。

腺病毒转染CTLA4-Ig对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠治疗作用的研究

目的探索CTLA4-Ig转基因对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠的疗效,为临床治疗多发性硬化(MS)提供新思路。方法将表达CTLA4-Ig的重组腺病毒(AdCTLA4-Ig)注射至Wistar大鼠EAE模型侧脑室内,与地塞米松治疗组对比观察实验动物发病情况和神经电生理改变。结果AdCTLA4-Ig注射后的大鼠EAE发病情况得以改善,脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential,BAEP)和体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)异常改变有所减轻。结论AdCTLA4-Ig对EAE大鼠有治疗作用,其疗效略优于地塞米松。

CTLA4-Ig在器官移植术后免疫排斥反应中的应用

CTLA4Ig是一种新型、高效的免疫抑制剂 ,主要通过竞争性抑制CD2 8与B7的结合来阻止共刺激信号的传递 ,抑制抗原特异性T淋巴细胞的增殖活化 ,未达到抑制免疫反应及诱导免疫耐受的作用 ,且无明显的毒副作用 ,因而在器官和组织移植排斥的防治和一些难治性自身免疫性疾病的治疗中有着广阔的应用前景。

CTLA4-Ig高度相关的变异体Belatacept——一种新型高选择、特异性的免疫抑制剂

CTLA4-Ig高度相关的变异体Belatacept作为一种新型高选择、特异性的免疫抑制剂近年来受到人们的高度关注。本文就Belatacept的相关研究进展作一简要介绍。

Tju103和CTLA4-Ig诱导MHC半相合小鼠骨髓移植耐受比较

目的:观察Tju103和CTLA4-Ig各自对MHC半相合小鼠骨髓移植免疫耐受的诱导。方法:半相合供鼠T细胞与受鼠抗原、Tju103(或CTLA4-Ig)共育后与骨髓细胞混合移植,观测移植后受情况。结果:A.单纯照射组:全部小鼠于照射后11d内死于造血衰竭;B.白血病CTX治疗组:全部小鼠于接种白血病细胞后16～23d死于白血病;C.单纯移植组:全部小鼠于移植后21d内死于移植物抗宿主病(GVHD);D.CsA预防组:5只小鼠于移植后8～22d死亡,1只死于白血病,各有2只死于GVHD和感染,5只活过30d;E.Tju103处理组:4只小鼠于移植后9～26d死亡,2只死于GVHD,各有1只死于白血病和感染,6只活过30d;F.CTLA4-Ig处理组:2只小鼠于移植后17～26d死亡GVHD,8只活过30d。结论:Tju103和CT-LA4-Ig均明显延长生存期,降低GVHD发生和严重程度,CTLA4-Ig保留有抗感染和移植抗白血病(GVL)作用,而Tju103没有。

CTLA4-Ig基因修饰的树突状细胞体外对Th1/Th2平衡的影响

目的:探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA4 Ig)基因修饰的树突状细胞(CTLA4 Ig-DCs)体外对Th1/Th2平衡的影响。方法:通过腺病毒载体将目的基因(CTLA4 Ig)转染至小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)。采用流式细胞术(FCM)检测DC表面分子和胞内CTLA4 Ig的表达;采用混合淋巴细胞反应检测DC刺激同种异体T细胞的能力,ELISA法检测DC抗原提呈反应中Th1和Th2类细胞因子IFN-γ和IL-4分泌水平。结果:CTLA4 Ig基因成功转染至DC,转染率约为80%,制备的CTLA4 Ig-DCs稳定表达CTLA4Ig,表面分子CD86呈现低表达;CTLA4 Ig-DCs可有效抑制T细胞增殖,降低抗原提呈反应上清中IFN-γ和IL-4的分泌,并增加IFN-γ/IL-4比值。结论:通过腺病毒将CTLA4 Ig转染DC并且高效表达,可有效降低DC表面CD86分子,抑制同种异体T细胞反应,并能影响体外Th1/Th2水平。