CTLL-2/MTT法快速测定IL-2基因转移效率的研究

应用包装ＩＬ－２基因的逆转录病毒载体，将ＩＬ－２基因导入小鼠成纤维细胞ＮＩＨ－３Ｔ３和小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，建立了ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－２，ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７和Ｂ１６／ＩＬ－２－４等３个转基因细胞株，应用ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法快速测定各转基因细胞株分泌上清ＩＬ－２的浓度．转染效率最高的ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７其ＩＬ－２分泌量高达１４２２ｕ／（１０６ｃ·２４ｈ），表明这一基因转移系统能有效地将外源基因导入靶细胞．ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法能快速、简便、有效地检测ＩＬ－２的表达．

MTT法测定瑞士乳杆菌MB2-1活菌数

以赛里木拉丝酸奶中提取的瑞士乳杆菌MB 2-1(Lactobacillus helveticus MB 2-1)为研究对象,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及测量细菌数量的范围,优化MTT法用于瑞士乳杆菌活菌计数的工作波长、MTT和DMSO用量、反应时间。结果表明:在107～109CFU/mL内测出的OD值与细菌浓度呈正向线性关系(R2>0.99),最佳反应条件为:1.0mL待测菌液与0.2mL MTT溶液在40℃条件下染色反应1h,反应液需要经过12000r/min离心10min,取离心沉淀物溶解于1.0mL二甲基亚砜中,于工作波长510nm处测定此溶液的OD值。MTT比色分析法可用于检测乳酸菌活菌数量。

Fura-2/AM 法和 MTT 法筛选多药抗药性逆转剂的比较

为了验证新方法Ｆｕｒａ２／ＡＭ法筛选多药抗药性逆转剂的效果，以新方法Ｆｕｒａ２／ＡＭ法与传统方法ＭＴＴ法进行筛选多药抗药性逆转剂的比较研究。结果显示Ｆｕｒａ２／ＡＭ法与ＭＴＴ法的筛选结果基本一致（相关系数γ＝０８６，Ｐ＜００１），且Ｆｕｒａ２／ＡＭ法有操作简单、快速、灵敏、重复性好及测定过程不需无菌操作等的特点，适用于大规模的筛选。

MTT法探讨苦参碱对人肺癌细胞LTEP-a-2的抑制作用

体外培养人肺癌细胞LTEP-a-2,设计两组药物作用浓度分别为0.3、0.5、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mg·mL-1和0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5mg·mL-1,各组分别在培养24、48、72、96h后采用MTT法分析苦参碱对肺癌细胞增殖的抑制作用。结果表明,低浓度苦参碱(0.1～0.2mg·mL-1)对肺癌细胞呈负抑制作用,当浓度达到0.25mg·mL-1时开始表现出抑制作用,且随着苦参碱浓度的增加和作用时间的延长,抑制作用逐渐增强。在苦参碱的安全用药范围内(0.1～0.5mg·mL-1),其96h抑制率可达到27.39%。

MTT比色分析法检测山羊白细胞介素-2方法的建立

以伴刀豆蛋白A(ConA)活化的山羊外周血单核细胞作为应答细胞 ,建立了检测山羊白细胞介素 2 (IL 2 )的MTT比色分析法。结果表明 ,以 3μg/mL的ConA浓度刺激 ,经过 36h活化所得的应答细胞活性最好 ;MTT的用量及作用时间分别以 2 0 μL( 5 0 μg/μL)及 4h为最佳 ;IL 2与活化细胞的作用时间以

改良MTT比色分析法测定乙型肝炎IL-2活性的研究

用改良MTT比色分析法,测定57例乙型肝炎患者末梢血淋巴细胞在PHA刺激下产生的白细胞介素2(IL-2)活性。各型乙型肝炎IL-2活性明显低于正常人,重症肝炎IL-2活性最低。结果提示:乙型肝炎细胞免疫功能紊乱。

采用2-氯腺苷改善MTT法检测淋巴细胞激活和杀伤功能

目的 :研究 2 氯腺苷 ( 2 ClA)特异性杀伤巨噬细胞对MTT法检测淋巴细胞激活试验和细胞毒试验的影响。方法 :运用细胞培养技术 ,培养小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞。通过MTT法检测 2 ClA处理和未处理的淋巴细胞的激活以及特异性活化后对肿瘤细胞的杀伤 ,同时还检测 2 ClA对巨噬细胞的毒性作用。结果 :2 ClA对巨噬细胞有很强的杀伤作用 ,采用MTT法检测淋巴细胞的活化和杀伤活性时 ,2 ClA处理组的OD值要明显低于未经 2 ClA处理的对照组 (P <0 0 5 )。结论 :2 ClA通过特异性杀伤巨噬细胞可以消除巨噬细胞在MTT法检测淋巴细胞激活和杀伤试验中所产生的影响 ,使检测更为准确。

建立MTT法测定人外周血IL-2活性

建立ＭＴＴ法测定人外周血ＩＬ－２活性田垒杨翼枫张家华（徐州医学科学研究所２２１００２）关键词ＭＴＴ测定人外周血ＩＬ－２活性中图法分类号Ｒ４４６．６１ＭＴＴ测定方法灵敏度高，较胎盼蓝染色法灵敏得多，与同位素渗入法测定结果相同［１］。由于ＭＴＴ法具有以...

对IL-4两种测活方法的比较及MTT法最适条件确定

目的建立一种稳定、灵敏的方法用于检测 IL - 4生物活性。方法比较人外周血 T淋巴细胞与 CTL L - 2 /IL - 4R细胞系对 rh IL - 4的增殖应答特点及 MTT法用于 rh IL - 4生物活性检测过程中的细胞浓度、细胞培养时间、MTT掺入浓度及时间等条件。结果两者均能对 rh IL - 4呈规律性增殖应答。 IL - 4活性测定时 ,人外周血 T淋巴细胞检测最低限为 8U /ml,CTL L - 2 /IL - 4R细胞系为 0 .73U /ml。确定了 MTT法用于 CTL L - 2 /IL - 4R细胞系检测 rh IL - 4生物活性时的最佳条件方案。结论就重复性和应答敏感性来说 ,CTL L - 2 /IL - 4R较之 T淋巴细胞更为优越 ,该细胞系可用于建立一种较灵敏而稳定的 IL -4测活方法。

MTT法检测复方大果木姜子软胶囊抗肿瘤作用

目的:研究复方大果木姜子软胶囊对S180和Hep-2肿瘤细胞株的增殖抑制作用.方法:MTT法评价复方大果木姜子软胶囊抗肿瘤效果.结果:实验证明复方大果木姜子软胶囊对S180细胞的IC50为37.44±1.021ug/mL,对Hep-2细胞的IC50为83.84±0.952ug/mL.结论:一定浓度的实验药物对肿瘤细胞S180和Hep-2的增殖具有抑制作用.

应用MTT比色法测定瑶药定心藤挥发油对肿瘤细胞的抑制作用

目的:探讨分析定心藤挥发油对人胃癌细胞SGC-7901、人白血病细胞K562的抑制作用。方法:应用超临界CO2法从瑶药定心藤中提取出挥发油,以半数抑制浓度(IC50)作为评价抗肿瘤活性强度的指标,采用MTT比色法测定定心藤挥发油的抗肿瘤活性,并将测定结果进行回顾性的分析。结果:定心藤挥发油对两种癌细胞均具有一定的抗肿瘤活性。相对于人胃癌细胞SGC-7901而言,定心藤挥发油对人白血病细胞K562的抑制作用更加显著,其IC50=13.95μg·mL-1。结论:定心藤超临界CO2提取挥发油对人白血病细胞K562的抑制作用显著,值得在临床上推广应用。

川芎多糖对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的探讨川芎多糖抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,诱导细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,加入不同浓度的川芎多糖,经MTT法检测HepG2细胞的活性,观察药物作用后的细胞形态,并采用流式细胞术检测HepG2细胞周期。结果 HepG2细胞的存活率随给药浓度的增大而降低,抑制作用呈现出明显的剂量依赖性(P<0.05);和空白组比较,药物作用48h后给药组G1期细胞百分含量明显升高(P<0.01),S期细胞百分含量明显减少(P<0.01)。结论川芎多糖对人肝癌HepG2细胞有明显的体外活性抑制作用,可能是通过将肿瘤细胞阻滞在G1期,从而诱导它的凋亡。

纳米SiO_2与常规SiO_2颗粒对Hela细胞的细胞毒性作用

为了探讨纳米SiO2和常规SiO2颗粒对Hela细胞的细胞毒性作用,采用不同浓度的纳米SiO2和常规SiO2颗粒(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6μg·μL-1)对Hela细胞进行12h染毒,应用MTT法检测细胞毒性效应.研究发现,较低浓度(≤0.2μg·μL-1)的纳米SiO2和常规SiO2对Hela细胞无明显细胞毒性(p>0.05);较高浓度时,纳米SiO2(≥0.4μg·μL-1)和常规SiO2(≥0.8μg·μL-1)对Hela细胞具有明显细胞毒性作用(p<0.01),并且随浓度增大细胞毒性增强;当浓度≥0.4μg·μL-1时,纳米SiO2的细胞毒性明显高于相同浓度的常规SiO2(p<0.05).以上结果表明,纳米SiO2和常规SiO2颗粒均能对Hela细胞产生细胞毒性,且纳米SiO2的细胞毒性强于常规SiO2;低浓度(≤0.2μg·μL-1)的纳米SiO2和常规SiO2具有很好的生物相容性.

β-细辛醚对PC12细胞和乳鼠皮层神经细胞形态学及细胞活力的影响

目的:观察β-细辛醚对PC12细胞和乳鼠皮层神经细胞形态学及细胞活力的影响。方法:用免疫细胞化学方法检测皮层神经细胞特异性标志物NSE、GFAP的表达;在体外将不同浓度β-细辛醚与PC12细胞和皮层神经细胞各作用24 h,用相差显微镜观察细胞形态的改变,并用MTT比色法检测细胞活力的变化。结果:原代培养的乳鼠皮层神经细胞大多数NSE呈阳性表达,少量GFAP呈阳性表达;β-细辛醚与PC12细胞作用24 h,低浓度β-细辛醚(7.5、15、30、60μg/ml)有促增殖作用,高浓度β-细辛醚(120、140、2480μg/ml)则可抑制其增殖,且随药物浓度的增加而增强;β-细辛醚与皮层神经细胞作用24 h,7.5、15、30、60、120μg/mlβ-细辛醚对其细胞形态和活力无明显影响,240μg/mlβ-细辛醚对其有促增殖作用,而480μg/mlβ-细辛醚对其则有损伤作用。结论:β-细辛醚可能有抗肿瘤和保护神经细胞的作用。

土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用

目的研究土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨土鳖虫抗肿瘤效应。方法以土鳖虫乳剂给SD大鼠灌胃,采血并制备血清。四氮唑盐法(MTT法)检测含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果土鳖虫含药血清可明显抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖,20%土鳖虫含药血清作用72h后抑制率高达56.728%,抑制率呈浓度依赖关系。流式细胞仪检测细胞凋亡发现肝癌HepG-2细胞以坏死居多,细胞周期多阻滞于G0-G1期。结论土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞体外增殖有明显的抑制作用。

九香虫粗提物对SGC-7901和HepG2细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究九香虫粗提物对人胃癌SGC-7901细胞和肝癌HepG2细胞体外增殖和细胞周期的影响。方法以乙醇为溶剂采用冷浸法获得九香虫的粗提物;利用倒置显微镜观察给药后两种癌细胞的形态变化;MTT法分析粗提物对两种癌细胞体外增殖的抑制作用;流式细胞仪分析粗提物对两种癌细胞周期的影响。结果九香虫粗提物对SGC-7901和HepG2细胞生长有抑制作用,并呈明显的剂量依赖性;九香虫粗提物作用24 h后,对SGC-7901和HepG2细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为1 281.62μg/ml和582μg/ml;流式细胞仪分析结果显示,与对照组细胞相比,HepG2细胞在细胞周期的分布上呈现显著的变化,即S期和G2/M期细胞比例明显降低、G0/G1期细胞比例明显升高。结论乙醇粗提物能抑制两种肿瘤细胞的体外增殖,对HepG2细胞抗肿瘤活性可能是由于通过其细胞周期的阻滞引起。

金葡菌肠毒素C_2的克隆表达及其生物学活性

目的克隆金葡菌肠毒素C2全长基因,构建SEC2的表达载体,实现其可溶性表达,并对纯化的rSEC2蛋白的生物学活性进行研究。方法通过聚合酶链式反应(polym erase chain reaction,PCR)从金葡菌FR I1230菌株基因中得到肠毒素SEC2的基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化。通过考察重组SEC2对淋巴细胞的增殖作用及其对肿瘤细胞杀伤活性的影响,对其超抗原活性和免疫学活性进行研究。结果得到正确的肠毒素SEC2基因序列并得到高效表达的融合蛋白,MTT法结果表明,重组SEC2表现出良好的促淋巴细胞增殖活性,且能够增强淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。结论本研究成功克隆了SEC2基因,表达并纯化出具有抗肿瘤生物学活性的重组SEC2蛋白,为进一步对其分子抗肿瘤作用机制进行研究以及构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。

蜂胶超临界CO2萃取物的体外抑瘤

采用MTT法研究蜂胶的超临界CO2萃取物（SE-P）对体外培养的肿瘤细胞生长的抑制作用,并和市售蜂胶乙醇提取物（ME-P）、蜂胶超临界CO2萃余物的95%乙醇提取物（RE-P）的抗肿瘤活性进行了对比;研究了不同萃取压力所得SE-P的抗肿瘤功效.SE-P在体外对肿瘤细胞U937,95D,SGC-7901和TE-1具有较强的抑制作用,SE-P对4株肿瘤细胞的最高抑制率和最高抑制率质量浓度均高于ME-P和RE-P.SE-P的抗肿瘤成分在各压力段都有分布,以10-15 MPa和20-30 MPa压力段抗肿瘤效果最好.研究结果表明,SE-P对体外培养的肿瘤细胞有较强的生长抑制作用.

条斑紫菜多糖PY-D2对小鼠脾淋巴细胞生长的影响

目的:研究条斑紫菜多糖体外提高机体免疫力的作用。方法:应用生化技术分离和纯化条斑紫菜多糖,获得条斑紫菜多糖2个组分,分别为PY-D1和PY-D2。体外培养条件下分别用不同浓度的PY-D2以及PY-D2与ConA或LPS协同处理小鼠脾淋巴细胞,通过MTT法观察条斑紫菜多糖对小鼠脾淋巴细胞生长的影响。采用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞的细胞周期变化。结果:PY-D2处理小鼠脾淋巴细胞72小时后对其生长有明显促进作用,且呈剂量依赖效应,0.25,0.5和1mg/ml条斑紫菜多糖处理小鼠脾淋巴细胞后,小鼠脾淋巴细胞的存活率分别为157.5%,162.1%和173.4%(P<0.01)。PY-D2与ConA或LPS共同处理小鼠脾淋巴细胞时,小鼠脾淋巴细胞的存活率高于ConA和LPS单独的作用,表现出明显的协同效应。流式细胞仪检测表明PY-D2可以促进小鼠脾淋巴细胞从G1期进入S期。结论:PY-D2可以促进小鼠脾淋巴细胞生长,为今后研究多糖提高机体免疫力的作用机理奠定了坚实的基础。