应用m2-Gi1α融合蛋白鉴别M2受体的特异性药物

目的表达m2-Gilα融合蛋白,通过检测GDP与m2-Gilα融合蛋白的亲和力大小来鉴别m2受体的特异性激动剂、拮抗剂和反向激动剂。方法用两步PCR反应重组m2-Gilα融合蛋白cDNAs,并插入到pBacPAK9病毒载体中,利用Sf9细胞表达M2受体蛋白和m2-Gilα融合蛋白,通过[3H]QNB结合饱和实验及[35S]GTPγS竞争性替代结合实验,检测受体表达水平及GDP 与m2-Gilα融合蛋白的亲和力。结果m2-Gilα融合蛋白表达水平是(18.14±0.17)pmol·mg(膜蛋白)-1。m2-Gilα融合蛋白与[3H]QNB的结合量随着[3H]QNB浓度的升高而增加,10 μmol·L-1GTDγS使m2-Gilα融合蛋白与[3H]QNB的饱和结合曲线明显下移。Ach使m2-Gilα融合蛋白与[35S]GTPγS竞争性替代结合曲线明显右移,Pilo稍次之,alcuronium,AF—DX116,Iso及atropine 则使曲线左移,GDP的IC50值分别是168.4,152.3,6.84,6.12,5.59,4.52 μmol·L-1,无配体存在时为14.7μmol·L-1。结论表达的m2-Gilα融合蛋白具备M2配体结合的特性及G蛋白耦联受体的信号转导功能,对于有基础活性的m2-Gilα融合蛋白,Ach, Pilo是完全激动剂;atropine,alcuronium。

链脲佐菌素诱发的大鼠糖尿病对cAMP介导的小冠状动脉舒张的影响

目的:观察链脲佐菌素(streptozotoxin)诱发的大鼠糖尿病(STZ大鼠)对cAMP介导的小冠状动脉舒张的影响。方法:Wistar大鼠尾静脉注射streptozotoxin造模。应用视频显微测量技术(videomicroscopymeasurement)活体观察小冠状动脉的舒张。结果:(1)STZ诱发的大鼠糖尿病对经cAMP信号系统起作用的isoproterenol(ISO)引起的剂量依赖性舒张产生减弱,且与血管内皮无关。(2)STZ诱发的糖尿病大鼠的小冠状动脉对腺苷酸环化酶激活剂forskolin引起的舒张减弱,而腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536可使舒张进一步减弱。(3)血管平滑肌细胞特异性电压依赖性钾通道阻断剂4-aminopyridine使STZ大鼠ISO和forskolin引起的舒张被阻断。(4)G蛋白刺激剂NaF使STZ大鼠小冠状动脉产生的舒张减弱,明显被抑制。结论:STZ诱发的大鼠糖尿病可以抑制cAMP信号系统介导的非内皮依赖性的小冠状动脉的舒张,此种作用是通过抑制平滑肌细胞电压依赖性钾通道的作用实现并受G蛋白影响。