人B7-2和增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建

目的 构建含人B7- 2与增强型绿色荧光蛋白融合基因表达载体p EGFP- N3- B7- 2。方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增到人B7- 2 c DNA基因片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒p GEM- Teasy和p EGFP- N3上。结果 通过酶切和序列分析证实插入片段序列正确。结论 应用基因工程技术构建成功p EGFP- N3- B7- 2融合基因表达载体,为增强型绿色荧光蛋白作为人B7- 2生物标记分子,转染肿瘤细胞及树突状细胞制备疫苗奠定了基础。

猪链球菌2型表面蛋白sp融合基因的构建与高效表达

利用PCR方法从猪链球菌2型四川资阳分离株449-1扩增出sp基因,克隆到pMD18-T载体中,构建出克隆载体pMD18T-sp。以SalⅠ和BamHⅠ从pMD18T-sp中切下目的sp基因片段并克隆到质粒pMAL-p2X中,构建重组表达质粒pMALp2X-sp,转化宿主菌TB1中进行诱导表达。分析表明sp基因序列比GenBank报道序列AY864331少了270 bp;SDS-PAGE电泳检测结果表明,重组菌株表达出了136 Ku左右的目的蛋白MBP-Sao,目的蛋白为可溶表达,约占菌体蛋白总量的12.3%。表达的蛋白可用Amylose树脂纯化。将纯化的融合蛋白MBP-Sao免疫家兔,所得抗血清经ELISA检测,结果显示融合蛋白MBP-Sao包板抗体效价达1:16 000,且与猪链球菌2型和9型呈阳性反应,而与沙门氏杆菌及巴氏杆菌呈阴性反应。本试验对猪链球菌2型表面蛋白Sao的高效表达及其免疫原性进行了初步研究,为进一步研究猪链球菌2型表面蛋白Sao的结构和功能奠定了基础。

Cos - 7 细胞表达 I L- 2 - H B Vpre S 融合蛋白的免疫原性

为了协同白细胞介素－ ２（ Ｉ Ｌ－ ２） 和乙型肝炎病毒（ Ｈ Ｂ Ｖ） 前 Ｓ 抗原（ｐｒｅ Ｓ） 的多种生物学功能，用基因重组方法将表达 Ｉ Ｌ－ ２ｐｒｅ Ｓ 的质粒ｐ Ｃ Ｗ Ｉ Ｉ Ｐ 转染 Ｃｏｓ － ７ 细胞。该细胞分泌表达的 Ｉ Ｌ－ ２ｐｒｅ Ｓ 融合蛋白保留了 Ｉ Ｌ－ ２ 和ｐｒｅ Ｓ 抗原天然分子的生物学活性，且能增强ｐｒｅ Ｓ 抗原的免疫原性，产生协同作用，促进机体免疫应答。这可能为 Ｈ Ｂ Ｖ 持续性感染者寻找新的治疗方法提供理论基础与实验依据。

猪圆环病毒II型衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达

将PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白在大肠杆菌中融合表达。利用PCR技术扩增猪圆环病毒Cap基因。将Cap基因克隆至T4噬菌体表达质粒pSOC的SOC基因(T4噬菌体表面非结构蛋白基因)下游,构建成T4噬菌体SOC位点表达Cap的表达载体pSOC-Cap。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后表达的目的蛋白SOC-Cap进行SDS-PAGE与Western-blot方法检测。表达的SOC-Cap蛋白相对分子质量约28kD,表达量占菌体总蛋白量的22.31%,并具有与PCV2特异性抗体反应的活性。PCV2衣壳蛋白片段与T4噬菌体SOC蛋白的融合表达后,表达量较高,并具有免疫活性,有望用于猪圆环病毒II型的诊断和预防。

一种高亲和结合Ⅰ型胶原蛋白的GST融合蛋白表达分析

鉴于纤维化疾病病人组织中I型胶原的异常沉积和人胎盘生长因子2氨基酸123~144肽段(PlGF-2 123-144 )对I型胶原蛋白出众的高亲性,尝试制备PlGF-2 123-144 短肽用于改善抗纤维化药物的组织靶向特异性。首先对该短肽的编码DNA序列进行修改和扩增,构建了GST- PlGF-2 123-144 融合蛋白的原核表达质粒;进而使用 E.coli BL21诱导表达该融合蛋白,并以谷胱甘肽琼脂糖纯化后透析;最后采用ELISA检测确定,经原核表达和纯化所获得的GST- PlGF-2 123-14 融合蛋白具备对I型胶原蛋白的高亲性。为研发特异性靶向纤维化组织的抗纤维化药物打下了可靠基础。