PCR-CTPP技术在宫颈癌P73基因多态性研究中应用

采用PCR-CTPP技术检测分析新疆维吾尔族宫颈癌P73基因第二外显子G4C14-to-A4T14多态性,并与PCR-RFLP技术检测结果对比,探讨PCR-CTPP在SNP检测及分析中的应用。结果显示:经PCR-CTPP扩增出P73基因第二外显子G4C14-to-A4T14三种基因型相应的DNA片段,与DNA测序结果符合。说明PCR-CTPP技术成本较低、省时、操作简便,结果稳定可靠,对于SNP研究具有较高的应用价值。

PCR-CTPP技术在MDR1基因SNP分型中的应用

目的:建立两对引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP)技术改进体系-两步法PCR-CTPP,研究其在MDR1基因SNP的快速分型中的应用价值。方法:采用两步法PCR-CTPP技术对158例的癫痫患者MDR1基因rs3789243和rs2235046进行检测分型,并以DNA测序验证基因分型结果。结果:通过两步法PCR-CTPP得到的基因分型结果与DNA测序得到的基因分型结果完全一致。结论:改进的两步法PCR-CTPP技术是一种可靠、快速的对基因SNP分型检测方法,能在普通实验室广泛应用,有助于基因SNP的分型研究。

PCR-CTPP:一种基于错配技术的SNP分型方法的改良

为探讨两对交叉引物PCR(PCR-CTPP)技术的原理并提高SNP分型的准确性,以人类MTHFR基因1298位点突变为例,通过设计合理的引物、优化引物终浓度及复性温度等重建PCR-CTPP检测系统,对比常规PCR-CTPP和改良的PCR-CTPP检测系统的可靠性。结果表明,改良的PCR-CTPP检测系统更加准确,支持了常规方法存在理论缺陷的观点;批量鉴定结果进一步验证了改良方法的可靠性。该技术有望在医学和分子生物学等领域广泛应用。

采用PCR-CTPP检测白细胞介素2基因多态性

目的采用PCR-CTPP技术,检测中国浙南地区白细胞介素-2(IL-2)基因-330位的多态性,并分析其可能的临床应用。方法针对IL-2基因-330(T/G)多态性设计两条序列特异性引物,结合两侧引物,在同一反应管中进行PCR。对PCR条件进行优化,并与测序结果进行对比。在此优化条件对101名体检个体的DNA进行IL-2基因多态性分析。结果通过条件优化,PCR-CTPP(polymerase chain reaction with confronting two-pair primers)可以区分IL-2-330位T或G的单核苷酸的多态性,并与测序结果相符合。101位体检个体中TT纯合子为43例(42.6%),GG纯合子为11例(10.9%),T/G杂合子为47例(46.5%),结果按Hardy Weinberg分布(P>0.05)。结论PCR-CTPP可区分IL-2-330(T/G)多态性,且简单、方便,具有临床应用价值。

PCR-CTPP简单快速检测乙醇脱氢酶-1B基因多态性

目的建立两对交叉引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP)检测体系鉴别乙醇脱氢酶-1B基因多态性。方法针对ADH1B rs1229984位点设计两对内外引物,经过聚合酶链反应、电泳鉴别基因型,将该方法与DNA测序法比较,验证其检测准确性,并通过该方法检测58例健康人ADH1B基因多态性分布情况。结果 PCR-CTPP方法可用于准确检测ADH1B基因多态性,与DNA测序结果相符;在58例健康人中,ADH1B A等位基因频率71.6%,为优势等位基因。结论PCR-CTPP技术检测ADH1B基因多态性简单快速、经济省力,可用于疾病易感基因的快速筛查和分子流行病学研究,适合在一般实验室推广应用。

姜黄素CTPP-PEG-PCL胶束的制备及体外评价

该研究合成了材料3-羧丙基-三苯基溴化鏻-聚乙二醇-聚己内酯(CTPP-PEG-PCL),并且采用自组装溶剂挥发法制备载姜黄素CTPP-PEG-PCL胶束,芘荧光光谱法测定临界胶束浓度(critical micelle concentration,CMC),考察粒径、包封率、形态、体外释放度;采用MTT实验进行肝星状细胞毒性评价。所得材料CTPP-PEG-PCL经1H NMR表征确证其结构,CMC为2.252 mg.L-1,胶束粒径约为190 nm,含药量为(0.66±0.008)g.L-1,包封率(94±0.6)%,体外释放显示缓释特性,姜黄素胶束对肝星状细胞的生长抑制率显著高于姜黄素原料药(P<0.05)。表明CTPP-PEG-PCL胶束临界胶束浓度小,包封率高,肝星状细胞生长抑制效果显著。

p73G4A多态性与新疆维吾尔族人乳头状瘤病毒相关性宫颈癌的研究

目的p73G4A多态性与新疆维族HPV相关宫颈癌发生的相关性;探讨PCR-CTPP在SNP检测及分析中的应用。方法应用PCR、PCR-RFLP以及PCR-CTPP技术对101例维族宫颈癌和100例维族正常宫颈组织的p73G4A多态性分布及HPV16的感染情况进行检测。结果p73G4A多态性3种基因型GC/GC、AT/AT和GC/AT在维吾尔族宫颈癌中所占比例差异无显著性(χ2=2.268,P>0.05);HPV16DNA检测显示,HPV16感染在宫颈癌及对照组中分布经统计学分析差异有显著性(χ2=116.837,P<0.05);p73G4A多态性3种基因型在HPV16阳性组和阴性组中分布,经统计学分析差异无显著性(χ2=1.820,P>0.05);采用PCR-CTPP技术检测分析维族宫颈癌p73G4A多态性,与PCR-RFLP技术检测结果一致。结论p73G4A多态性可能与维族宫颈癌无相关性;PCR-CTPP技术经济、省时、操作简单,结果稳定可靠,对于SNP以及基因点突变研究具有较高的应用价值。

MUTYH基因与结直肠癌发病的关系

目的:检测家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis,FAP)家族成员MUTYH基因SNP位点,为结直肠癌易感人群的筛检提供依据.方法:应用PCR-SSCP及基因测序方法检测三个疑似FAP家系患者MUTYH基因SNP位点,PCR-CTPP方法检测中国医科大学附属第一医院结直肠癌组患者283例与对照组307患者血液DNA中MUTYH IVS1-5A>CSNP突变位点的情况,分析其多态性与结直肠癌易感性的关系.结果:发现MUTYH基因3个SNP位点,分别为IVS1-5A>C(A/C);IVS6+35A>G(A/G,G/G)及c.G972C(Q335H)(G/C).结直肠癌患者中发生MUTYH IVS1-5A/C与MUTYH IVS1-5C/C突变的患者分别为11和2例,对照组中发生MUTYH IVS1-5A/C突变的患者为4例,但未发现MUTYH IVS1-5C/C纯合性突变.对照组中MUTYH IVS1-5A/C等位基因频率与结直肠癌组相比,有显著性差异(χ2=7.43,P=0.006).MUTYH IVS1-5A>C多态性与结直肠癌易感性有相关性.结论:MUTYH IVS1-5A>C位点基因多态性在结直肠癌发生中起着作用,其对了解结直肠癌的发病机制及对高危人群的筛检具有重大意义.

P73基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性分析

采用两对引物-聚合酶链反应（PCR-CTPP）方法分别对100例非小细胞肺癌患者和120例健康对照者进行p73基因多态性检测,DNA测序验证基因分型结果,对p73基因多态性与非小细胞肺癌的相关性进行分析,探讨湖南省地区人群中p73基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的关系。试验结果表明,PCRCTPP法和测序得到的基因分型结果完全吻合,100例肺癌患者的p73基因型分布如下：GC/GC型60例（60%）、GC/AT型36例（36%）、AT/AT型4例（4%）,与携带p73 GC/GC基因型者比较,携带AT/AT基因型者的肺癌患病风险增加3.4倍（OR=3.387,95%CI=1.055-10.875,P=0.032）,而携带GC/AT基因型者肺癌风险也呈增加趋势,但是无显著性差异（OR=1.183,95%CI=0.672-2.082,P=0.561）。p73基因多态性可能与湖南省地区人群非小细胞肺癌遗传易感性相关。

急性酒精中毒患者儿茶酚氧位甲基化转移酶基因多态性分析

目的:分析急性酒精中毒患者儿茶酚氧位甲基化转移酶COMT rs4680基因多态性。方法:针对COMT rs4680位点设计内外两对引物,建立两对交叉引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP)检测体系,经过PCR扩增,通过琼脂糖凝胶电泳鉴别基因型,最后将该结果与基因测序结果比较,验证其准确性,并通过该方法检测288例急性酒精中毒患者(急性酒精中毒组)和348例健康对照人群(健康对照组)COMT基因型,分析COMT rs4680基因多态性与急性酒精中毒的关系。结果:COMT rs4680有GG型、AG型、AA型三种基因型,且PCR-CTPP方法可以准确检测COMT rs4680基因多态性;与健康对照组比较,急性酒精中毒组AA型检出率明显升高(P<0.05),但两组G、A两种等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PCR-CTPP可成功鉴别COMT rs4680三种基因型,AA型可能是急性酒精中毒发生的高危因素之一。

第二胶片厂正在加快CTP版材的国产化进程

国内CTP技术在走过1996～1998年的研讨、论证和冷静思索之后,1999年走上了试验性阶段。羊城晚报、北京日报、辽宁美术印刷厂、深圳当纳利——旭日印务公司率先引进了CTP系统。从版材输出机的扫描方式看,有内鼓式(Purup-Eskofot版神)、外鼓式(Optronics Aurorg)和平台式(Agfa Polaris)。从版材输出机的扫描光源看,有488nm氩离子激光(Optronics Aurora和Purup-Eskofot牌神)、532nmFD-YAG激光(Agfa Polaris)

两对交叉引物PCR检测非缺失型α地中海贫血点突变的建立及临床应用

目的建立一种基于两对交叉引物PCR技术(PCR with confronting two-pair primers,PCR-CTPP)同时快速检测非缺失型α地中海贫血WS、QS和CS三种突变类型的方法及其在临床中的应用。方法根据α珠蛋白基因中发生WS、QS和CS突变的区域基因序列,分别针对单个位点设计两对引物即通用外引物和特异性引物,经过聚合酶链反应、电泳鉴别基因型,同时检测非缺失型α地中海贫血。将该方法与PCR反向斑点杂交(PCR-RDB)技术比较,验证其检测准确性。结果PCR-CTPP方法可用于准确检测非缺失型α地中海贫血的WS、QS和CS突变类型,结果显示与常规非缺失型α地中海贫血PCR-RDB检测方法一致。结论PCR-CTPP技术检测非缺失型α地中海贫血WS、QS、CS三种突变位点,简单快速、经济省力,可用于非缺失型α地中海贫血的快速筛查和分子流行病学研究,适合在一般实验室推广应用。适用于非缺失型α地中海贫血的人群筛查及婚前或产前筛查,适合各个层次医院应用。