三七总皂苷调控CTRP6/RhoA/Rock对骨质疏松大鼠的保护作用机制研究

目的:探究三七总皂苷对骨质疏松大鼠的保护作用及机制。方法:雌性SD大鼠50只,随机分为假手术组、模型组、三七总皂苷组(40 mg/kg)、三七总皂苷+si-NC组(40 mg/kg三七总皂苷组+4 nmol/kg si-NC)、三七总皂苷+si-CTRP6组(40 mg/kg三七总皂苷组+4 nmol/kg si-CTRP6),每组各10只。除假手术组外,其余各组均采用双侧卵巢切除法构建骨质疏松症大鼠模型。选模成功后,各组采用相应药物干预10周。检测血清雌二醇(E_(2))、骨代谢相关指标[Ca、P、1,25(OH)_(2)D_(3)]、炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平以及氧化应激(SOD、GSH-Px、MDA)水平;苏木素-伊红染色观察股骨组织病理学变化;显微CT分析股骨骨微结构变化;Western blot检测大鼠股骨组织CTRP6/Rho A/Rock通路蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠股骨组织出明显病理损伤,血清E_(2)、Ca、P和1,25(OH)_(2)D_(3),SOD、GSH-Px水平均降低(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平均升高(P<0.01),股骨组织CTRP6表达降低(P<0.01),GTP-Rho A/Rho A、Rock1/Rock2比值均增加(P<0.01)。与模型组比较,三七总皂苷组大鼠股骨组织损伤减轻,血清E_(2)、Ca、P和1,25(OH)_(2)D_(3),SOD、GSH-Px水平均升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平均降低(P<0.01),股骨组织CTRP6表达增加(P<0.01),GTP-Rho A/Rho A、Rock1/Rock2比值均降低(P<0.01)。与三七总皂苷组比较,三七总皂苷+si-CTRP6组大鼠上述指标均被显著抑制(均P<0.01)。结论:三七总皂苷能够改善骨质疏松模型大鼠股骨组织的损伤情况,其机制与调控CTRP6/Rho A/Rock通路,抑制炎症与氧化应激相关。

C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)抑制卵巢癌细胞的增殖和迁移

目的探讨C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)对卵巢癌细胞增殖和转移的抑制作用。方法 ELISA分别检测卵巢癌患者与健康志愿者血清,SKOV3、3AO和HO8910上皮性卵巢癌细胞与IOSE80正常卵巢上皮细胞培养上清中CTRP6的水平;采用人CTRP6重组蛋白处理高转移性卵巢癌HO8910细胞,ELISA检测HO8910细胞白细胞介素8(IL-8)和血管内皮生长因子(VEGF)的分泌水平,采用CCK-8法检测细胞增殖、TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力;采用CTRP6小干扰RNA(CTRP6 siRNA)或CTRP6抗体处理HO8910细胞,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果CTRP6在卵巢癌患者血清和上皮性卵巢癌细胞培养上清中水平降低;CTRP6重组蛋白处理HO8910细胞48 h后,细胞增殖和侵袭能力显著下降;利用siRNA抑制CTRP6表达后,细胞增殖和迁移能力显著增强;CTRP6抗体处理后,细胞增殖和迁移能力亦显著增强。结论 CTRP6在卵巢癌患者血清和上皮性卵巢癌细胞上清中水平降低;CTRP6可阻断IL-8/VEGF通路从而抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖和迁移。

C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)介导庆大霉素所致大鼠急性肾损伤

目的探讨抗炎细胞因子C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在庆大霉素所致急性肾损伤(AKI)中的作用。方法SD大鼠分为5组,对照组、模型组和3个实验组。模型组和实验组皮下注射庆大霉素400 mg/(kg·d),连续注射2 d,建立庆大霉素中毒性AKI动物模型;3个实验组大鼠在注射庆大霉素前2 d,分别给予(0.5、5、50)mg/kg的CTRP6腺病毒表达载体。苦味酸比色法检测肌酐(Cr)含量,紫外分光光度法检测血清尿素氮(BUN)含量,ELISA检测血清CTRP6的水平以及肾组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。Western blot法检测肾脏组织中CTRP6、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)和caspase-1的表达。结果与对照组相比,模型组大鼠AKI指标血清BUN和Cr水平较对照组显著增高,炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌量以及NLRP3和caspase-1蛋白表达水平也显著增加。与模型组相比,实验组大鼠血清BUN和Cr水平降低,IL-1β和TNF-α的分泌减少,NLRP3和caspase-1的表达水平下降。随着注射CTRP6腺病毒表达载体注射剂量的增加,抑制效果逐渐增强。结论 CTRP6以剂量依赖的方式减弱庆大霉素所致的大鼠急性肾功能损伤。

高脂饮食和运动影响妊娠中期大鼠皮下和腹膜脂肪组织中asprosin和CTRP6的表达

目的研究孕期高脂饮食和运动对皮下和腹膜后脂肪组织中asprosin和CTRP6表达的影响。方法从妊娠第1天开始,大鼠分别以脂肪含量13.5%的常规饲料和脂肪含量60%的高脂饲料喂养,妊娠第3天运动组大鼠放开转轮开始自主运动,饮食和运动处理持续整个孕期。按照处理将妊娠Sprague-Dawley大鼠随机分为4组:正常饮食非运动组(CH-SD)、正常饮食运动组(CH-RW)、高脂饮食非运动组(HF-SD)、高脂饮食运动组(HF-RW)。于妊娠第14天用RT-qPCR测定脂肪组织中asprosin和CTRP6的mRNA表达水平,Western blotting测定asprosin和CTRP6的蛋白表达水平。结果腹膜后脂肪组织中,asprosin mRNA表达在HF-RW组显著高于CH-SD组、CH-RW组和HF-SD组(P<0.001)。皮下脂肪组织中,asprosin mRNA表达在HFSD组显著高于CH-SD组(P=0.0234),而HF-RW组中asprosin mRNA的表达水平正常(P=0.0494)。腹膜后脂肪组织中,CTRP6 mRNA水平在HF-RW组显著高于CH-SD组、CH-RW组和HF-SD组(P<0.0001),CTRP6蛋白水平在HF-RW组显著高于CH-RW组和HF-SD组(P<0.05)。皮下脂肪组织中,CTRP6蛋白表达在CH-RW组显著高于HF-SD组和HF-RW组(P<0.05)。皮下脂肪组织中CTRP6的蛋白水平与血糖呈显著负相关(r=-0.6038,P=0.0172),而腹膜后脂肪组织中CTRP6的蛋白水平与血糖呈显著正相关(r=0.5305,P=0.0285),且asprosin和CTRP6 mRNA在皮下脂肪组织中的表达量要显著低于其在腹膜后脂肪组织中的表达量(P<0.0001)。结论妊娠期高脂饮食和运动会影响妊娠中期大鼠脂肪组织内asprosin和CTRP6的表达水平,且具有部位差异性。

C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)参与免疫及相关疾病的研究进展

新型脂肪因子C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)属于CTRP家族成员,在人类和小鼠多种组织中广泛表达。与其他CTRP一样,CTRP6由N端信号肽、短的可变区、胶原结构域和C端C1q球状结构域四部分组成,其结构在进化过程中高度保守。CTRP6参与多种炎症过程,在炎症调节、脂肪组织炎症、类风湿性关节炎(RA)、炎症性肾损伤、血管内皮炎症和肿瘤发生发展过程中起重要作用。我们主要对CTRP6的结构、表达分布及其参与免疫及相关疾病的研究进展进行总结。

阿司匹林通过调节CTRP6抑制糖尿病大鼠心肌纤维化和炎症反应

目的探究阿司匹林对糖尿病大鼠心肌纤维化和炎症反应的影响及其分子作用机制。方法选取SPF级,雄性,SD大鼠,随机分为三组:对照组(Control组)、糖尿病组(DM组)和阿司匹林药物干预组(Aspirin组)。Control组:腹腔注射生理盐水;DM组:腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(60 mg/kg)构造糖尿病大鼠模型;Aspirin组:先腹腔注射STZ 60 mg/kg,再以1 mg/(kg·d)阿司匹林大鼠灌胃处理。10周后超声心动图检测大鼠心脏结构与功能变化;Masson染色观察大鼠心肌纤维化状况;ELSIA检测心肌炎症因子(IL-β、IL-6、TNF-α)含量;RTPCR和Western blot检测心肌组织CTRP6 mRNA和蛋白表达变化。结果与Control组相比,DM组大鼠心脏功能异常和结构损伤,心肌纤维化状况显著,心肌IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著增加(P<0.01),RT-PCR和Western blot检测显示心肌组织CTRP6表达显著降低(P<0.01);与DM组相比,Aspirin组大鼠心脏功能恢复和结构改善,心肌纤维化程度显著降低,心肌IL-1β、IL-6、TNF-α含量下降(P<0.05,P<0.01),心肌组织CTRP6 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论阿司匹林可以抑制糖尿病大鼠心肌纤维化和炎症反应其机制涉及促进CTRP6表达。

白藜芦醇通过调控CTRP6对高血压大鼠心肌纤维化的影响

目的探究白藜芦醇(RES)对高血压大鼠心肌纤维化的影响及机制。方法将30只大鼠分为假手术组(Sham组)、高血压模型组(Model组)和RES治疗组(RES组),Model组和RES组大鼠采用腹主动脉缩窄的方法构建高血压大鼠模型,Sham组大鼠仅穿线不结扎血管,RES组大鼠给予剂量为10 mg/(kg·d)的RES灌胃7 d,其余2组给予等量的生理盐水灌胃7 d;造模第28天,测定各组大鼠体质量(BW)、尾动脉收缩压(SBP),取心脏检测左心室体质量指数(LVMI),苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织形态,马松(Masson)染色观察心肌组织纤维化变化,Western blot检测大鼠心尖组织中C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)以及纤维化相关指标Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达。结果3组大鼠BW比较,差异无统计学意义(P>0.05);与Sham组相比,Model组SBP和LVMI显著升高(P<0.01),心肌组织排列紊乱,胶原沉积增加,CTRP6表达显著降低(P<0.01),CollagenⅢ和TGF-β1表达显著升高(P<0.01);与Model组相比,RES组SBP和LVMI降低(P<0.05或P<0.01),心肌组织排列相对规则,心肌胶原沉积减少,CTRP6表达升高(P<0.05),CollagenⅢ和TGF-β1表达显著降低(P<0.01)。结论RES能够改善高血压大鼠心肌纤维化,可能与促进CTRP6的表达有关。

CTRP6在小鼠卵巢中的定位、表达以及FSH对CTRP6的调控作用

目的探究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在小鼠卵巢中的定位、表达以及FSH对其调控作用。方法免疫组化对56日龄小鼠卵巢中的CTRP6蛋白进行定位,实时定量PCR检测3 d、10 d、21 d和56 d小鼠、21日龄小鼠注射了孕马血清促性腺激素(PMSG)0 h、12 h、36 h、48 h及注射HCG 4 h、8 h、12 h卵巢中CTRP6 mRNA的表达水平。分别向人卵巢颗粒细胞(KGN)中加入0 ng/ml、1 ng/ml、10 ng/ml和100 ng/ml的FSH和LH,培养24 h后检测CTRP6 mRNA水平。结果小鼠卵巢免疫组化结果显示CTRP6可以在颗粒细胞和卵母细胞中表达,尤其在窦卵泡颗粒细胞中表达水平较高。另外,小鼠CTRP6 mRNA的表达水平随着年龄增加而升高(P<0.05),且经PMSG处理不同时长后,CTRP6 mRNA相对表达量较PMSG处理前显著增加(P<0.05),而与PMSG处理48 h比较,HCG处理后CTRP6 mRNA的相对表达水平显著降低(P<0.05),且随着处理时间的延长呈降低趋势。不同浓度梯度(1、10、100 ng/ml)的FSH处理KGN细胞24 h后均使CTRP6 mRNA表达水平显著增高(P<0.05),浓度为10 ng/ml时CTRP6 mRNA水平达峰值。选择10 ng/ml FSH于不同时间梯度(6、12和24 h)处理KGN细胞后,CTRP6 mRNA相对表达量均较未处理前显著增加(P<0.05),且随着时间延长呈升高趋势。不同浓度梯度(1、10、100 ng/ml)的LH处理KGN细胞24 h后,CTRP6 mRNA的表达均较LH处理前无显著差异(P>0.05)。结论CTRP6可能参与了卵泡生长发育的调控,是卵泡形成的重要因子。

CTRP6在心脏纤维化和内皮向间质转化中的作用研究

目的:探讨CTRP6在心肌纤维化和内皮向间质转化中的作用和机制。方法:将雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、心肌梗死组和治疗组。心肌梗死组和治疗组均采用冠状动脉左前降支结扎的方法建立小鼠心肌梗死模型,治疗组小鼠给予0.2 mg/kg CTRP6皮下注射(从术后第3天到第28天)。采用小动物超声检查心功能,病理染色检测心肌梗死面积,RT-PCR检测纤维化和内皮间质转化相关因子的转录水平,免疫荧光染色检测内皮间质转化标志物。分离培养原代小鼠心脏微血管内皮细胞,将细胞随机分为以下5组:对照组、转化生长因子(TGF)-β1刺激组,治疗组1(给予TGF-β1+1μg/mL CTRP6处理),治疗组2(给予TGF-β1+2μg/mL CTRP6处理),治疗组3(给予TGF-β1+4μg/mL CTRP6处理)。结果:在心肌梗死模型建立4周后,治疗组小鼠死亡率明显低于心肌梗死组(40%对60%,P<0.05),梗死面积小于心肌梗死组[(48.7±3.2)%对(58.8±3.2)%,P<0.05],左室射血分数,左室短轴缩短率明显高于心肌梗死组,左室舒张末期内径,左室收缩末期内径明显低于心肌梗死组(P均<0.05);小鼠心脏胶原沉积,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和TGF-β的mRNA表达水平明显低于心肌梗死组(P均<0.05)。免疫荧光染色显示治疗组心脏平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)表达低于心肌梗死组,内皮CD31蛋白表达高于心肌梗死组。治疗组心脏内皮间质转化标志物snail1、snail2、twist1和twist2的mRNA表达水平低于心肌梗死组(P均<0.05)。细胞实验示TGF-β1刺激组内皮细胞内皮间质转化明显增多,各CTRP6治疗组内皮间质转化明显减少。结论:CTRP6通过抑制内皮向间质转化,减少心肌纤维化的发展。

血清CTRP6和代谢综合征患者胰岛素抵抗的关系研究

目的:本文旨在血清CTRP6和代谢综合征患者胰岛素抵抗的关系研究。方法:本文选取2018年1月〜2019年7月在我院确诊为代谢综合征的50例患者,并选择50名体检者参与实验采集年龄、性别、体重指数BM1、吸烟、饮酒、WC、SBP、DBP、GLU、、PG、TG、Cr、BUN、HDL、LDL、FIL、IR1和CTRP6水平等各种数据结果:两组实验者的BMl、WC、SBP和DBP有显著性差异(P<0.05);单因素或Logistic回归发现:MS状态与BMI、WC、GLU、PG、TG、HDL、I3UN、FIL.和IRI等指标有密切关联(P<0.05).GLU、TG、BUN和IRI是CTRP6水平的关联影响因素(P<0.05).结论:MS患者血清CTRP6水平明显偏高,GLU、PG、TG、HDL-C等是CTRP6的关联影响因素间接提示MS患者的胰岛素抵抗特征。

七氟烷联合下调CTRP6基因抑制肝癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探讨七氟烷联合下调CTRP6对肝癌细胞迁移侵袭的影响及作用机制。方法运用MTT法检测七氟烷(1%、2%、5%)对肝癌细胞的抑制率;将si-con组(转染si-con)、si-CTRP6(转染si-CTRP6)、sevo+si-con(转染si-con,再用2%sevo处理)、sevo+si-CTRP6组(转染si-CTRP6,再用2%sevo处理),用脂质体法转染至HepG2;qRT-PCR法检测细胞中CTRP6的表达;Transwell法检测细胞的迁移和侵袭;Western blot检测细胞中CTRP6、Shh、Ihh、Smo的蛋白表达。结果与control组相比,2%sevo、5%sevo可明显增强肝癌细胞的抑制率,且2%sevo可明显的抑制肝癌细胞的迁移和侵袭(P<0.05);重要的是,2%sevo可下调肝癌细胞中CTRP6的表达,且敲减CTRP6可明显的抑制肝癌细胞的迁移和侵袭;敲减CTRP6可明显的抑制肝癌细胞中Hedgehog信号通路关键基因Shh、Ihh、Smo的蛋白表达。结论七氟烷联合下调CTRP6可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制与失活Hedgehog信号通路有关,将可为七氟烷联合下调CTRP6在肝癌中的治疗提供实验支持。

血清SHBG、CTRP6表达与多囊卵巢综合征患者IVF-ET妊娠成功率的相关性

目的探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠成功率与血清性激素结合球蛋白(SHBG)、C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6 (CTRP6)水平的关系。方法选取2017年3月至2020年5月期间于泉州市妇幼保健院儿童医院生殖中心就诊并行IVF-ET的112例PCOS患者为研究对象(PCOS组),同期选取行IVF-ET的94例非PCOS不孕患者作为对照组。分别采用酶联免疫吸附(ELISA)法、电化学发光免疫测定法检测两组患者的血清SHBG、CTRP6水平;以PCOS患者血清SHBG、CTRP6水平平均值为界分组,其中SHBG低水平组56例、SHBG高水平组56例;CTRP6低水平组55例、CTRP6高水平组57例。比较各组患者的IVF-ET相关指标及妊娠结局;多因素Logistic回归分析影响PCOS患者IVF-ET后妊娠成功的危险因素。结果 PCOS组和对照组患者的血清SHBG [(45.28±9.86) nmol/L vs (67.24±16.78) nmol/L]、CTRP6 [(237.65±40.22) ng/mL vs (452.83±54.67) ng/mL]水平比较,PCOS明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);SHBG低水平组和SHBG高水平组患者的基础睾酮(T)值[(62.24±20.08) ng/dL vs (46.86±18.37) ng/dL]、hCG日雌二醇(E2)[(8 050.24±1 052.24) pg/mL vs (6 324.46±1 002.83) pg/mL]水平、早期流产比例(30.36%vs 8.93%)比较,SHBG低水平组明显高于SHBG高水平组,胚胎着床(28.57%vs 48.21%)、临床妊娠比例(16.07%vs 37.50%)及hCG日孕酮(P)[(1.19±0.31) ng/mL vs (1.32±0.23) ng/mL)水平比较,SHBG低水平组明显低于SHBG高水平组,差异均有统计学意义(P<0.05);CTRP6低水平组和CTRP6高水平组患者的基础T值[(63.25±21.63) ng/d L vs (48.36±17.83) ng/d L、h CG日E2 [(8 154.64±1062.14) pg/m L vs (6 150.21±1 039.54) pg/mL]水平、早期流产比例(32.14%vs 7.14%)比较,CTRP6低水平组明显高于CTRP6高水平组,胚胎着床(25.00%vs 51.79%)、临床妊娠比例(17.86%vs 35.71%)及hCG日P [(1.17±0.26) ng/mL vs (1.34±0.31) ng/mL]水平比较,CTRP6低水平组明显低于CTRP6高水平组,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,SHBG和CTRP6低表达是影响PCOS患者IVF-ET后妊娠成功的独立危险因素(P<0.05)。结论血清SHBG、CTRP6低表达均可能降低PCOS患者IVF-ET后妊娠成功率。

血清CTRP4、CTRP5、CTRP6与2型糖尿病合并冠心病患者冠状动脉病变的关系研究

目的:探讨血清补体1q/肿瘤坏死因子相关蛋白(CTRP)4、CTRP5、CTRP6与2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)患者冠状动脉病变的关系。方法:选取2021年3月~2021年7月我院收治的100例T2DM合并CHD患者为合并组,根据SYNTAX评分分为中重度病变组44例和轻度病变组56例,选取同期收治的100例单纯T2DM患者为T2DM组,另选取同期体检健康志愿者80名为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清CTRP4、CTRP5、CTRP6水平。采用Spearman相关性分析T2DM合并CHD患者SYNTAX评分与血清CTRP4、CTRP5、CTRP6水平的相关性,多因素Logistic回归分析T2DM合并CHD患者冠状动脉中重度病变的影响因素。结果:对照组、T2DM组、合并组血清CTRP4、CTRP5水平依次升高,CTRP6水平依次降低(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,T2DM合并CHD患者SYNTAX评分与血清CTRP4、CTRP5水平呈正相关(rs=0.820、0.833,P均<0.001),与CTRP6水平呈负相关(rs=-0.838,P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,T2DM病程延长和糖化血红白蛋白(Hb A1c)、CTRP4、CTRP5升高为T2DM合并CHD患者冠状动脉中重度病变的独立危险因素,CTRP6升高为独立保护因素(P<0.05)。结论:血清CTRP4、CTRP5水平升高和CTRP6水平降低与T2DM合并CHD患者冠状动脉病变加重独立相关,可能成为T2DM合并CHD患者冠状动脉病变评估指标。

CTRP6对阿霉素诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的探讨C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(C1q/tumour necrosis factor-related protein 6,CTRP6)对阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导的心肌细胞凋亡及氧化应激损伤的影响及其相关作用机制。方法建立H9C2心肌细胞损伤模型,设置对照组(NS组)、DOX(1μmol/L)组和DOX(1μmol/L)+浓度梯度CTRP6组(CTRP6浓度分别为0.5、1、3、5μg/ml),培养24h后检测心肌细胞生存率,结果表明,CTRP6浓度为3μg/ml时,心肌细胞的生存率提高最显著,因此后续实验CTRP6浓度选择3μg/ml。后续H9C2心肌细胞实验分组为对照组(NS组)、CTRP6组、DOX(1μmol/L)组和DOX(1μmol/L)+CTRP6(3μg/ml)组。荧光实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blot法检测DOX刺激后CTRP6转录及翻译水平改变,Tunel法检测细胞凋亡水平,使用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测细胞谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western blot法检测脂联素受体1(adiponectin receptor 1,AdipoR1)蛋白水平改变,检测蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3(protein kinase B/glycogen synthase kinase-3β,Akt/GSK-3β)信号通路蛋白表达改变情况。结果与对照组(NC组)比较,DOX组细胞CTRP6蛋白表达水平及mRNA水平显著降低(分别降低46.26%及67.74%,P<0.05);与DOX组比较,DOX+CTRP6组CTRP6蛋白表达水平显著提高(P<0.05);加入不同浓度梯度的CTRP6蛋白,其中DOX+3μg/ml CTRP6处理组心肌细胞存活率显著提高了26.48%(P<0.05);Tunel染色显示凋亡减少,Bcl-2表达升高;抗氧化分子GSH-Px及SOD活性分别升高20.49%及36.89%,MDA水平受到显著抑制(降低47.09%,P<0.05);AdipoR1蛋白水平显著提高(P<0.05);Akt/GSK-3β信号通路蛋白磷酸化水平显著升高。结论CTRP6改善DOX诱导的心肌细胞凋亡及氧化应激损伤,可能是通过Akt/GSK-3β信号通路发挥的保护作用。

CTRP6基因缺失对小鼠白色脂肪组织“棕色化”的影响

补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)是一种新型脂肪分泌因子,在动物脂代谢中发挥重要作用。作者前期研究发现,利用慢病毒敲减CTRP6能够保护小鼠免于发生饮食诱导型肥胖。该文以CTRP6缺失的杂合子(KO)小鼠为材料,结合冷刺激手段,来确认CTRP6对小鼠体重和白脂"棕色化"的影响。首先通过Real-time PCR分析KO小鼠CTRP6表达水平,与野生型(WT)小鼠相比, KO小鼠各组织中CTRP6表达显著降低。然后,取4周龄雄性KO小鼠,随机分为两组(5只/组):4°C冷刺激组和25°C室温组,分别以WT小鼠为对照。6周后对小鼠体重、体脂进行分析。与WT小鼠相比,两个温度下KO小鼠体重和白色脂肪的质量均显著下降,棕色脂肪的质量显著上升。对脂肪组织基因表达分析发现, KO小鼠白色脂肪的UCP1、PGC1、PRDM16(棕色脂肪标志基因)以及Cyt c、NRF1、TFAM(线粒体标志基因)的表达显著升高。上述数据表明, CTRP6缺失能够抑制小鼠白色脂肪积累,促进白色脂肪"棕色化"。该研究为揭示CTRP6基因生物学功能奠定了基础,为人类肥胖及其相关代谢疾病的治疗提供了理论借鉴。

小鼠CTRP6基因缺失对LPS介导的急性炎症反应的影响

C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)是一种新型脂肪细胞因子,不仅对动物脂代谢具有重要的调控作用,还参与机体的炎症反应。该文以CTRP6基因敲除鼠(CTRP6–/–)为材料,通过腹腔注射脂多糖(LPS)建立急性炎症反应模型,旨在分析CTRP6在炎症反应中的作用。首先,取2月龄雄性CTRP6–/–(KO)小鼠,随机分为2组(5只/组):LPS处理组和生理盐水组,分别以WT鼠为对照。利用Real-time PCR和ELISA分析LPS对WT小鼠机体内CTRP6表达水平的影响,发现LPS刺激后WT小鼠各组织及血清中CTRP6的表达水平均下降,表明CTRP6基因与LPS诱导的急性炎症反应密切相关。接下来,对比两种基因型小鼠发现,KO组小鼠注射LPS后,其炎症因子TNF-α和IL-1β升高水平显著低于WT对照组。进一步通过肺部切片HE染色和肺组织干湿比评估炎症反应对肺的损伤程度,发现KO组小鼠的肺损伤程度显著低于WT小鼠。最后,在体外,利用LPS刺激骨髓来源的巨噬细胞,两种基因型巨噬细胞的炎症因子表达水平均显著升高,但CTRP6–/–型巨噬细胞的炎症因子升高水平以及NF-κB的磷酸化升高水平均显著低于WT型巨噬细胞。综上所述,CTRP6基因与机体炎症反应密切相关,CTRP6基因缺失导致小鼠对LPS的应答减弱,缓解了急性炎症反应对机体造成的伤害。

牛蒡子苷元调控CTRP6对七氟烷麻醉后大鼠炎症反应和认知功能障碍的影响

目的:研究牛蒡子苷元对七氟烷麻醉后大鼠炎症反应和认知功能障碍的影响,并初步探讨其作用机制。方法:雄性SPF级SD大鼠50只,随机分为对照组、七氟烷组及牛蒡子苷元低(5 mg·kg^(-1))、中(10 mg·kg^(-1))、高(20 mg·kg^(-1))剂量组,每组10只。除对照组外,其余组大鼠采用6%七氟烷麻醉。牛蒡子苷元各剂量组大鼠在麻醉前腹腔注射200μL牛蒡子苷元溶液,对照组和七氟烷组大鼠腹腔注射等体积二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)。干预48 h后,Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力;酶联免疫吸附测定实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察海马组织病理学改变;原位缺口末端标记法(terminal-deoxynucleotidy transferase mediated nick end labeling, TUNEL)分析各组大鼠海马组织神经元凋亡水平;蛋白质免疫印迹(Western Blot)和免疫组织化学法检测大鼠海马组织C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(C1q/tumor necrosis factor-related protein 6,CTRP6)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-Akt、核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)、p-NF-κB蛋白表达水平。结果:与对照组比较,七氟烷组大鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.05),穿台指数及CTRP6蛋白表达水平显著降低(P<0.05),血清IL-6、IL-1β、TNF-α的含量及p-Akt/Akt和p-NF-κB/NF-κB的水平显著升高(P<0.05),海马CA1区病理损伤显著,神经元凋亡指数显著升高(P<0.05);与七氟烷组比较,牛蒡子苷元各剂量组大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),穿台指数及CTRP6蛋白表达显著增加(P<0.05),血清IL-6、IL-1β、TNF-α的含量及p-Akt/Akt和p-NF-κB/NF-κB的水平显著降低(P<0.05),海马CA1区病理损伤明显改善,神经元凋亡指数显著降低(P<0.05)。结论:牛蒡子苷元能明显改善七氟烷麻醉诱发的大鼠神经性炎症反应和认知功能障碍,其作用可能与调控CTRP6/Akt/NF-κB信号通路相关。

芪丹颗粒对2型糖尿病患者胰岛素抵抗及血清CTRP6和CTRP12水平的影响

【目的】研究芪丹颗粒对2型糖尿病脾虚痰瘀证患者胰岛素抵抗、血清CTRP6及CTRP12水平的影响。【方法】将60例2型糖尿病脾虚痰瘀证患者随机分为治疗组和对照组,每组各30例。2组均给予糖尿病基础治疗,在此基础上,治疗组给予芪丹颗粒治疗,对照组给予盐酸二甲双胍片治疗,疗程为8周。观察2组患者治疗前后胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及血清CTRP6和CTRP12水平的变化情况,并评估HOMA-IR与血清CTRP6和CTRP12水平的相关性。【结果】(1)治疗后,2组患者的HOMA-IR均较治疗前明显下降(P<0.05),且治疗组对HOMA-IR的下降作用明显优于对照组(P<0.05)。(2)治疗后,治疗组患者血清CTRP6水平较治疗前明显下降(P<0.05),血清CTRP12水平较治疗前明显升高(P<0.05);而对照组治疗前后血清CTRP6和CTRP12水平均无显著性变化(P>0.05)。组间比较,治疗组对血清CTRP6水平的下降作用和对血清CTRP12水平的升高作用均明显优于对照组(P<0.05)。(3)相关性分析结果提示HOMA-IR与血清CTRP6水平呈正相关(r=0.746,R2=0.557,P<0.01),而与血清CTRP12水平呈负相关(r=-0.802,R2=0.644,P<0.01);血清CTRP6、CTRP12水平是HOMAIR的独立影响因子(P<0.01)。【结论】芪丹颗粒能有效改善2型糖尿病脾虚痰瘀证患者胰岛素抵抗,其作用机制可能与调节血清CTRP6及CTRP12水平有关。

基于NLRP3炎症小体研究C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6对病毒性心肌炎细胞损伤的保护作用

目的:研究补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(C1q/tumor necrosis factor-related protein 6,CTRP6)对柯萨奇病毒B3(Coxsackie B3 virus,CBV3)诱导的病毒性心肌炎细胞损伤的调控作用,并探讨其可能的作用机制。方法:通过CBV3感染人心肌细胞系AC-16来建立病毒性心肌炎的体外细胞模型。通过表达质粒转染技术来实现CTRP6在心肌细胞中的过表达。细胞分为4组:正常组、CBV3组、CBV3+空载体组和CBV3+CTRP6载体组。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法检测mRNA表达水平。采用Western blotting方法检测蛋白表达水平。采用相应的试剂盒测量肌酸激酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin-I,cTn-I)的活性水平。利用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick end labeling,TUNEL)检测细心肌细胞胞凋亡。利用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测量炎症因子浓度。采用RNA沉默技术来敲除AdipoR1在心肌细胞中的表达。结果:与正常组相比,CBV3感染组心肌细胞中CTRP6的表达水平显著降低(P<0.01)。CBV3感染心肌细胞显著提高CK-MB和cTn-I的活性水平,并增加凋亡细胞数量和炎症因子的释放(P<0.01)。与CBV3+空载体相比,CBV3+CTRP6载体组心肌细胞中的CK-MB和cTn-I的活性水平显著下降,凋亡细胞数量显著减少,炎症因子的释放显著降低(P<0.01)。与CBV3+空载体组相比,过表达CTRP6可显著抑制CBV3感染的诱导的NLRP3炎症小体的激活(P<0.01)。敲除AdiopR1则显著阻断CTRP6对心肌炎细胞损伤的保护作用(P<0.01)。结论:CTRP6通过作用于AdiopR1受体抑制NLRP3炎症小体的激活来减轻CBV3诱导的病毒性心肌炎细胞损伤。

肿瘤坏死因子相关蛋白6缺失减缓CCl_(4)诱发的小鼠肝脏纤维化进程

目的探讨补体Clq/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)在肝病发生发展中的作用及其可能机制。方法四氯化碳灌胃法构建小鼠肝纤维化模型,比较野生型(CTRP6^(+/+))和敲除型(CTRP6^(-/-))小鼠肝损伤后的病理和生化指标差异;RT-qPCR检测纤维化标志基因(Acta2、Col1a1、Mmp2、TGF-β和TNF-α)和细胞增殖标志基因(Cyclin D、Cyclin E和CDK6)的表达水平。结果与CTRP6^(+/+)小鼠相比,CTRP6^(-/-)小鼠肝细胞表现为轻度的坏死、疏松和肿胀等病变,且肝内超氧化物歧化酶(SOD)活力升高(P<0.01)、丙二醛(MDA)含量降低(P<0.01);CTRP6^(-/-)小鼠肝脏纤维化和细胞增殖标志基因表达显著低于CTRP6^(+/+)小鼠。结论CTRP6基因缺失减缓了CCl_(4)诱导的小鼠肝纤维化进程,作用机制可能是敲除CTRP6影响了肝细胞的增殖。