CTTN基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞侵袭能力的影响

目的探讨CTTN基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞侵袭能力的影响。方法将非小细胞肺癌A549细胞随机分为观察组与对照组,两组均采用Lipofectamine 2000脂质体转染法分别转染CTTN小干扰RNA(siRNA)、阴性siRNA。作用48 h,采用Western blotting法检测两组皮层肌动蛋白(Cortactin)相对表达量;以红色荧光Tritc-鬼笔环肽标记的F-actin和绿色荧光Dyligt488标记的Cortactin共定位黄色荧光的侵袭性伪足,采用激光共聚焦显微镜观察并计算侵袭性伪足百分率;采用Transwell小室试验检测两组细胞侵袭能力(以穿过基底膜的细胞数表示)。结果观察组与对照组Cortactin相对表达量分别为0.17±0.02、0.79±0.15,侵袭性伪足百分率分别为(22.37±4.8)%、(71.46±8.9)%,穿过基底膜的细胞数分别为(51±10)、(220±27)个,两组比较P均<0.05。结论沉默CTTN基因可通过减少非小细胞肺癌A549细胞侵袭性伪足的产生而降低其细胞侵袭能力。

癌基因CTTN表达Cortactin蛋白及其变异体磷酸化状态下与细胞蛋白Dynamin相互作用分析

目的:探讨Cortactin的氨基端序列在磷酸化介导的蛋白相互作用中的功能。方法:设计表达标签为GST的氨基端缺失的Cortactin突变体,纯化突变体蛋白,以及全长Cortactin蛋白,同时纯化His标签的细胞发动蛋白Dynamin,采用Src磷酸化Cortactin蛋白,并采用pull-down分析观察与Dynamin的相互作用。结果:成功表达和纯化Cortactin的1-80氨基酸(CortΔ80)缺失、1-349缺失的Cortactin突变体(CortΔ349),以及全长Cortactin(Cort WT)和Dynamin。Pull-down分析结果表明:与磷酸化的野生型Cortactin蛋白比较,氨基端缺失的Cortactin蛋白在磷酸化后与Dynamin的结合作用减弱。结论:实验提示Cortactin分子的氨基端是Arp2/3与actin结合的重要结构域其参与肌动蛋白聚合的过程,对于磷酸化信号的正常传导是不可或缺的部分。

CTTN (EMS1): an oncogene contributing to the metastasis of esophageal squamous cell carcinoma

Proto-oncogenes 被 genomic 扩大经常激活。有在肿瘤纸巾的增加的拷贝数字和作为结果的在表示上的基因的描述能便于肿瘤特定的 oncogenes 的鉴定。食道的癌症全球是普通癌症，食道的有鳞的房间癌(ESCC ) 是在中国的最流行的类型。多重基因变化在 ESCC 被发现了，但是很少对主要 oncogenes 和肿瘤被知道压制或涉及 ESCC 的 tumorigenesis 的基因。

miR-3685通过靶向CTTN抑制宫颈癌细胞的迁移、侵袭及生长

目的:微小RNA(microRNA,miRNA)通常通过与其靶基因的3′非翻译区(3′UTR)结合而调控肿瘤细胞的恶性行为,目前miR-3685对肿瘤细胞恶性行为的影响鲜有报道,本文旨在探讨miR-3685对宫颈癌细胞恶性行为及其分子机制的影响。方法:生物信息学软件预测miR-3685的靶基因,用EGFP报告系统验证。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测miR-3685和CTTN(cortactin)在人类宫颈癌细胞中的表达,用transwell迁移/侵袭实验、Western blot实验、集落形成实验、细胞周期进程实验分别检测了miR-3685和CTTN对HeLa细胞和SiHa细胞的迁移、侵袭能力、EMT进程、细胞增殖能力及细胞周期进程的影响。结果:与对照组相比,过表达miR-3685可抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭及生长,封闭miR-3685,得到相反的结果。过表达CTTN可促进宫颈癌HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭及生长,EGFP报告系统验证CTTN是miR-3685的直接靶基因(*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001)。结论:miR-3685通过抑制CTTN的表达而抑制宫颈癌HeLa和SiHa细胞的迁移、侵袭及生长。

肝癌细胞内Sox17基因表达水平与细胞迁移、侵袭力的相关性研究

目的:从基因表达水平上探讨肝肿瘤细胞内Sox17的mRNA表达量与细胞迁移、侵袭力的相关性。方法:收集4种肝肿瘤细胞HepG2、MHCC-97L、LM3、SK-Hep-1及一种非肿瘤肝上皮细胞QSG7701,Real-Time PCR法检测细胞内Sox17、CTTN基因的mRNA表达水平,细胞划痕和Transwell小室侵袭实验检测肝肿瘤细胞迁移、侵袭力。对Sox17基因的表达水平与CTTN的表达量及细胞划痕、Transwell小室侵袭的实验结果进行秩相关检验。结果:与非肿瘤细胞相比,肿瘤细胞内Sox17表达水平普遍较低,CTTN的表达水平较高;在4种肝肿瘤细胞中,Sox17基因的表达水平与CTTN的mRNA的表达水平及细胞划痕区域细胞生长速度、Transwell小室穿膜细胞数的统计结果呈负相关,秩相关系数rs=-1。结论:肝肿瘤细胞内Sox17基因的表达水平的高低与细胞的迁移、侵袭力呈负相关。

皮层肌动蛋白可通过PI3K-AKT通路调控食管鳞癌细胞的增殖和凋亡

目的探讨皮层肌动蛋白(CTTN)对食管鳞癌增殖和凋亡的影响及潜在的调控机制。方法在EC109、TE1细胞中过表达、敲低CTTN;Western blot检测PCNA、cleaved-PARP、cleaved-Caspase3以及PI3K-AKT通路的关键蛋白;CCK-8实验和平板克隆实验检测细胞活力和细胞增殖情况;软琼脂克隆形成实验评估细胞在动物体内的成瘤性,同时通过裸鼠皮下成瘤实验观察敲低CTTN对裸鼠EC109细胞皮下种植瘤生长的影响。结果成功构建CTTN稳定过表达或敲低的EC109和TE1细胞株。过表达CTTN不仅能提高PCNA、p-PI3K、p-AKT的表达水平,而且抑制cleaved-Caspase3、cleaved-PARP的表达,同时升高细胞活性,促进克隆形成(均P<0.001);敲低CTTN后PCNA、p-PI3K、p-AKT表达水平降低,cleaved-Caspase3、cleaved-PARP的表达升高,细胞活性降低,克隆形成显著减少,皮下种植瘤生长受到明显抑制(均P<0.001)。结论CTTN通过上调PI3K-AKT通路促进食管鳞癌细胞的增殖,抑制其凋亡。

miR-330-5p靶向PTBP1调控结肠癌凋亡的机制

[目的]探讨miR-330-5p/PTBP1/CTTN轴调控结肠癌细胞凋亡的潜在机制。[方法]纳入接受根治性结肠切除术的结肠癌患者113例,分析miR-330-5p在结肠癌组织和癌旁组织中的表达水平以及其对总生存率的影响。[结果]miR-330-5p在结肠癌组织中的表达水平较低(0.48±0.22 vs 0.16±0.09,P<0.05)。miR-330-5p高表达的结肠癌患者具有更高的总生存率。过表达miR-330-5p及敲低PTBP1,HCT116细胞的凋亡水平上升(13.02±2.11 vs 68.41±11.08, 12.84±2.16 vs 59.12±10.53,P<0.05)。过表达miR-330-5p后,HCT116细胞中PTBP1的mRNA水平和蛋白水平均下降(0.39±0.04 vs 0.05±0.01,P<0.05)。敲低CTTN后,HCTT6细胞的凋亡水平显著上升(11.70±2.05 vs 55.73±10.19,P<0.05)。过表达miR-330-5p或PTBP1敲低后,CTTN isoform a的表达水平下降。[结论]miR-330-5p能够靶向降解PTBP1 mRNA,减少PTBP1的表达水平,促进结肠癌细胞凋亡。miR-330-5p/PTBP1轴能够调控CTTN外显子的选择性剪接,抑制CTTN isoform a的表达水平并促进结肠癌细胞凋亡。