产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌分布与耐药性分析

目的:了解我院产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的分布和耐药性,为临床合理选用抗生素提供依据。方法:根据ESBLs已知基因序列设计CTX-M通用引物,对36株临床分离产ESBLs大肠埃希菌进行PCR扩增。采用琼脂平皿稀释法进行最低抑菌浓度(MIC)测定。结果:31株大肠埃希菌产CTX-M酶,占产ESBLs菌株的86/。CTX-M-1组13株阳性,CTX-M-9组24株阳性,其中6株二者共同阳性;CTX-M-2组、CTX-M-8组和CTX-M-25组均为0株阳性。产CTX-M酶大肠埃希菌对碳青霉烯类和哌拉西林/他唑巴坦普遍敏感,对哌拉西林和喹诺酮类完全耐药,对头孢曲松和头孢噻肟MIC结果显示耐药明显,对其他三代、四代头孢菌素及头孢西丁耐药率介于45.16/～64.52/之间。结论:我院大部分产ESBLs大肠埃希菌产CTX-M酶,产CTX-M酶大肠埃希菌对头孢曲松和头孢噻肟耐药明显。

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌blaCTX-M基因型及耐药性检测

目的 了解我院产超广谱13，内酰胺酶（extended-spectrumβ-lactamascs，ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中CTX-M型耐药基因的分布及其耐药情况。方法 用针对SHV、TEM、CTX-M基因的特异性引物进行PCR扩增确定超广谱β--内酰胺酶基因型，对扩增到的CTX-M基因进行DNA序列分析；采用三维实验检测菌株产AmpC酶；采用K—B琼脂扩散法进行菌株的药物敏感性测定。结果34株产CTX-M酶菌中有28株同时产2种或2种以上的B．内酰胺酶，并且其中有一株同时产两种CTX-M酶。序列分析证实35份CTX-M的扩增产物中有17份为CTX-M-14，占48．6％；11份为CTX-M-3，占31．4％；4份为CTX-M-9，占11．4％；2份为CTX—M．19，占5．7％；1份为CTX-M-13，占2．9％。产CTX-M酶菌株对氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛钠、哌拉西林、环丙沙星、头孢吡肟、头孢哌酮，舒巴坦、头孢他啶、头孢西丁、庆大霉素、哌拉西林，他唑巴坦、氨曲南、亚胺培南和美洛培南的耐药率分别是100％、100％、100％、100％、100％、100％、97．1％、52．5％、53．1％、32．4％、38．2％、75．8％、23．5％、63．6％、0、0。产其它亚型ESBLs的菌株对上述药物的耐药率分别是100％、92．9％。78．6％、71．4％、92．9％、92_3％、57．1％、21．4％、7．1％、78．6％、64．3％、64-3％、38．5％、78．6％、0、0。结论 产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中CTX-M型耐药基因主要是CTX-M-14、CTX-M-3、CTX-M-9、CTX-M-19和CTX—M．13；产CTX-M酶菌株绝大多数同时产其它多种β-内酰胺酶，其对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛钠、哌拉西林、环丙沙星、头孢吡肟、头孢哌酮，舒巴坦的耐药水平高于不产CTX-M型ESBLs株（P〈0．05）；耐药表型呈多样性，亚胺培南或美洛培南是临床治疗产CTX-M酶菌株感染的首选药物。

新疆昌吉市2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在确定引起新疆昌吉市某规模化猪场仔猪死亡的病因,采集病死猪的脾脏、肝脏、心脏、肺脏、肾脏和淋巴结等组织样进行细菌病原分离鉴定。分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色镜检、生化试验、菌种鉴定及测序分析、血清型鉴定和药敏试验。结果显示,分离株在TSA营养琼脂上生长良好,镜检可见革兰氏阳性球菌,呈典型链状排列;生化特性与猪链球菌相符;PCR扩增得到大小为328 bp和689 bp的目的条带,分离株与猪链球菌同源性为100%,在系统进化树上与2型猪链球菌处于同一分支,为2型猪链球菌;分离株对恩诺沙星、环丙沙星、林可霉素、阿莫西林、头孢噻呋钠、氟苯尼考6种药物敏感,对磺胺嘧啶钠耐药。研究表明,该猪场仔猪感染了猪链球菌,恩诺沙星、环丙沙星等药物可用于临床治疗。

CTX-M型超广谱β-内酰胺酶耐药性特点分析

超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs）是革兰阴性杆菌对新型广谱内酰胺类抗生素耐药最重要的机制之一,ESBLs由质粒介导,能够水解青霉素、氨曲南、及1、2、3代头孢菌素。近年来,

30株鸡大肠杆菌ESBLs基因型检测及耐药性分析

采用2倍稀释法检测30株鸡大肠杆菌对常见药物耐药性,用表型筛选和确证试验检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况,并分别用TEM、SHV和CTX-M等3种通用引物进行PCR扩增以确定其基因型。结果显示23株大肠杆菌为产ESBLs株,占76.7%。PCR扩增表明TEM、CTX-M、SHV阳性率分别为73.9%、43.5%和0%,有7株同时检测出TEM和CTX-M基因(占30.4%),3株未检测出TEM、CTX-M和SHV 3种基因(占13.0%)。药敏试验结果显示产ESBLs大肠杆菌对药物的多重耐药性明显比非产酶大肠杆菌严重,产酶菌对氨苄西林和头孢噻呋的耐药率最高,为95.7%,对氨基糖苷类、恩诺沙星和复方新诺明的耐药率均高于78%,氨苄西林和三代头孢与酶抑制剂联用或2种不同种类的药物联用均能明显增强抗菌活性。以上结果表明河南省76.7%的临床分离鸡大肠杆菌为产ESBLs株,其基因型主要是TEM和CTX-M,尚无SHV型,β-内酰胺类与酶抑制剂联用或不同种类药物联用是防治鸡产酶大肠杆菌感染的有效措施之一。

鲍曼不动杆菌的基因分型及耐药性分析

目的分析上海某综合性医院不同科室来源的鲍曼不动杆菌菌株的同源性及耐药状况,了解鲍曼不动杆菌院内感染流行情况。方法采用重复序列PCR技术(REP-PCR),对51株临床分离的鲍曼不动杆菌菌株进行基因分型,并用纸片扩散法进行药敏试验。结果51株鲍曼不动杆菌分为13个基因型,其中A型16株,为主要流行型别;C型、D型各6株;M型有5株;E型、F型和G型各3株;B型、H型和K型各2株;I型、J型、L型各1株。药敏试验结果显示分离出的菌株对常用抗菌药呈现出多重耐药的现象。其中对阿米卡星和亚胺培南的耐药性最低,均为33.3%;对头孢唑啉耐药性最高,为100%。结论鲍曼不动杆菌基因的同源性分析表明,该院存在着以A型鲍曼不动杆菌为主的感染流行,估计该型菌株可能以克隆株的形式播散。鲍曼不动杆菌的耐药性很强,应加强其耐药性监测,合理使用抗菌药物。

应用HIV-1耐药性基因型检测广东部分地区HIV耐药株

目的利用艾滋病病毒1型(HIV-1)耐药性基因型检测法,在HIV-1感染者中监测HIV-1耐药性病毒株,掌握广东省HIV-1感染者在利用抗病毒药物治疗前是否存在耐药突变及其流行情况。方法从未接受高效抗逆转录病毒联合疗法(HAART)治疗的HIV-1感染者血浆中提取病毒RNA,采用套式PCR扩增目的基因片断,并对扩增片断进行序列测定和分析。结果HIV-1耐药性基因型检测法能够从HIV-1感染者血浆病毒载量大于1 000拷贝/ml以上、CD4低于400以下的样本中扩增到目的片断。在广东省50例未治疗对象中,低中度耐药相关突变例数为2例,占4%;高度耐药相关突变例数为0;总耐药相关突变例数为2例,占4%。结论HIV-1耐药性基因型检测法能有效地监测HIV-1感染者血浆中的耐药性病毒株的存在,并且方法提供的结果准确、可靠。对广东省未接受抗病毒治疗的HIV-1感染者中耐药突变的检测表明,HIV-1感染者中存在病毒的耐药性突变,也反应了HIV毒株自然变异情况的存在。

36株临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型及耐药性分析

目的探究临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec基因分型和耐药性。方法将选取的36株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌采取多重PCR的方法进行SCCmec基因分型,并采取K-B纸片扩散法进行耐药性的分析。结果通过检测分析,SCCmecⅡ型菌株有2株(5.6%),SCCmecⅢ型菌株有30株(83.3%),SCCmecⅣ型菌株有4株(11.1%)。并且SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型的菌株均数均具有较高的耐药性。结论分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的SCCmec的基因分型表现为SCC-mecⅡ型和SCCmecⅢ型以及SCCmecⅣ型菌株,其中SCCmecⅡ型和SCCmecⅢ型均表现为多重的耐药性。

上海地区31株2型猪链球菌的分离鉴定及其耐药性分析

猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种重要人畜共患病,尤其是猪链球菌2型,不仅对猪的致病性最强,而目可感染特定人群并致死,给人类公共卫生和养猪业带来巨大影响。本研究采集临床症状疑似2型猪链球菌感染猪的全血及内脏器官,通过观察菌落形态及培养特征,筛选出可疑样品,纯化培养并进行PCR鉴定,筛选到31株2型猪链球菌,最后用纸片扩散法对临床分离到的2型猪链球菌菌株测定其耐药性,结果显示对5种药物耐药率分别为:80%(AM)、68%(GM)、84%(CHL)、52%(SXT)、55%(CIP)。试验结果表明分离的31株2型猪源性链球菌,均为多重耐药株,且青霉素类药物的耐药性较为严重,这为临床在治疗2型猪链球菌病提供了合理的指导作用。

蚌埠地区产超广谱β-内酰胺酶菌株CTX-M型耐药基因的分布

目的了解蚌埠市部分医院临床分离产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中CTX-M型ESBLs基因分布情况。方法标本为蚌埠市3所医院2003年4月-2004年4月间,临床分离产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌147株;采用聚合酶链反应(PCR)扩增产CTX-M型ESBLs菌株基因;按Sanger双脱氧末端终止法,用自动测序仪对其进行测序以鉴定基因型。结果147株产ESBLs菌株中有92株携带CTX-M型ESBLs基因,其中CTX-M-14型52株、CTX-M-3型20株、CTX-M-15型20株。结论蚌埠市部分医院产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高,主要为CTX-M-14型。

白念珠菌基因多态性与耐药性关系

【目的】探讨耐氟康唑白念珠菌基因多态性与其耐药性是否相关。【方法】收集48株敏感白念珠菌和10株耐氟康唑白念珠菌,其中包括2株体外诱导的耐氟康唑白念珠菌。选择1个随机引物(引物1251),采用任意引物PCR方法基因分型,将电泳图谱扫描入计算机后采用Labwork4.0软件转化为数值图表,利用SPSS11.5进行聚类分析。【结果】引物1251的PCR指纹图带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物。聚类分析结果提示8株临床耐药菌的PCR指纹图相似系数为71.7%,而其中7株的耐药菌相似系数高达86.7%,远高于58株菌的平均相似系数(47.3%)。2株体外诱导的耐药菌诱导前后基因型未发生变化。【结论】基因分型的结果未提示耐氟康唑白念珠菌存在一定的特殊电泳条带,但提示了特定的PCR指纹图可能与耐药性有一定相关性。

多重PCR检测临床产ESBLs大肠埃希菌的耐药基因型研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药性、产ESBLs的阳性率及耐药基因之间的关系。方法采用Kirby-Bauer(K-B)琼脂扩散法检测120株临床分离的大肠埃希菌对18种抗生素的耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株,运用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果120株大肠埃希菌产ESBLs的有51株,阳性率为42.5%。120株大肠埃希菌对亚胺培南全部敏感,产ESBLs的大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等头孢类抗菌药物的耐药率高达100%;51株产ESBLs菌株其中46株扩增到CTX-M型耐药基因,44株扩增到TEM型基因,2株扩增到SHV基因,1株OXA型基因,未检出PER和VEB型。结论大肠埃希菌产ESBLs较高,耐药显著,碳青酶烯类抗生素是目前治疗产ESBLs大肠埃希菌最有效的药物;产ESBLs大肠埃希菌的主要基因型别为CTX-M型和TEM型。

淋病奈瑟球菌的耐药性检测

目的了解淋病奈瑟球菌对临床常见药物的耐药性。方法采用琼脂稀释法测定13种抗菌药物对35株淋病奈瑟球菌的MICs;Nitrocefin(头孢硝噻酚)纸片检测β-内酰胺酶,并采用PCR测定其基因型。结果淋病奈瑟球菌对青霉素、四环素、环丙沙星与头孢呋辛的耐药率分别为65.7%、60.0%、88.6%与14.3%,对第3、4代头孢菌素、大观霉素非常敏感,耐药率均为0%;42.9%的菌株产生TEM型β-内酰胺酶。结论淋病奈瑟球菌对青霉素、四环素类和氟喹诺酮类的耐药性高,治疗宜选用第3、4代头孢菌素和大观霉素等,同时加强耐药性监测。

60株肺炎克雷伯菌多重耐药性及主要耐药基因的研究

目的:了解临床分离的肺炎克雷伯菌耐药性及主要耐药基因存在状况。方法:采用Microscan微生物鉴定仪,微量肉汤稀释法测定肺炎克雷伯菌对21种抗生素的敏感性。采用聚合酶链反应(PCR)及测序技术分析超广谱β内酰氨酶(ESBLs),质粒介导的AmpC酶和氨基糖苷类修饰酶基因型。结果:肺炎克雷伯菌对亚胺培南全部敏感,对其他抗生素均有不同程度的耐药。60株全部扩增出TEM基因,有25株检出CTX-M-I群基因,有54株扩增出DHA基因,59株检出共3种氨基糖苷类修饰酶基因。且有22株同时携带2～6种耐药基因。对其中4株细菌进行基因型测序,证实CTX-M-I群扩增产物均为CTX-M-3;DHA扩增产物均为DHA-1;氨基糖苷类修饰酶基因分别为aac(3)-Ⅱ、aac(6')-I和ant(3″)-I。其中CTX-M-3(AY635141)、DHA-1(AY635140)已注册GenBank(括号内为GenBank注册号)。结论:临床分离的肺炎克雷伯菌为多重耐药菌,同时存在2～6种耐药基因。

鲍曼不动杆菌的耐药性及β-内酰胺酶基因的研究

目的调查鲍曼不动杆菌耐药特点及β-内酰胺酶基因类型.方法用Phoenix-100系统对细菌进行鉴定和药敏试验.用琼脂稀释法测定头孢噻肟等6种抗生素的最低抑菌浓度;用PCR法检测β-内酰胺酶基因,并对耐药基因测序分析.结果247株鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美洛培南耐药率仅为3.2%和4.1%,而对阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦等其余14种抗生素耐药率为31.9%～67.2%.20株多重耐药性鲍曼不动杆菌中17株具TEM基因,任选3株经DNA测序为TEM-1型基因,与GeneBank(χ 54604)比较,共有4处同义突变.未检出SHV、OXA、CTX-M、PER和VEB型β-内酰胺酶基因.结论本地区鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药除与TEM型耐药基因有关外,可能还与其他耐药机制有关.

耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的检测及其耐药性分析

目的探讨该院耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的检测方法,并了解该地区耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的耐药特征,为该院对铜绿假单胞菌的控制提供依据。方法方便选取65例2017年7月—2018年12月在该院住院治疗的患者的标本,临床分离了65株铜绿假单胞菌,对其进行菌种的鉴定和药物的敏感试验。采用E-test试验对金属酶进行检测,采用PCR法扩增产金属β-内酰胺酶的基因,并进一步测序确认扩增的阳性产物。结果65株铜绿假单胞菌的标本中以呼吸道分泌物最多,占比81.54%(53株),在分布上呼吸内科、ICU病房比较高,分别占了总数的33.85%(22株)和36.92%(24株)。药敏试验结果显示,有18株(27.69%)铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药,并且大多为多重耐药菌株;E-test试验结果显示,阳性金属酶4株,检出率为22.22%;PCR法扩增金属酶基因阳性3株(4.62%),其中IMP-1和VIM-2分别为3株和1株。结论该地区耐亚胺培南的18株铜绿假单胞菌中大多为多重耐药菌株,产金属β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药中发挥着极其重要的作用,并且IMP-1和VIM-2为酶的主要基因型。

猪链球菌9型菌株的分离鉴定

为了确诊四川省某猪场1头25日龄左右的后腿跛行并急性死亡仔猪的病因,并制定对猪群其他猪只的预防和治疗方案。本试验剖检死亡仔猪,取脾脏、肝脏、肺脏组织和血液进行细菌分离培养,革兰染色镜检,PCR分型鉴定和药敏试验。结果显示,分离培养的细菌革兰染色为阳性;分离菌株经PCR检测为猪链球菌9型;药敏试验确定该分离菌株对氨苄西林、环丙沙星、氟苯尼考、青霉素、多西环素、头孢氨苄、氧氟沙星、头孢拉定、头孢呋辛和氯霉素敏感。结果表明,该猪场仔猪为感染猪链球菌9型引起的急性死亡,通过头孢类等药物可以有效的治疗发病仔猪。

临床分离志贺菌中产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因型及耐药性分析

目的了解北京地区临床分离志贺菌携带CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因型及耐药特征。方法收集2008-2011年本地区分离出的志贺菌83株,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M型ESBLs耐药基因,明确基因型,阳性产物序列在GenBank上进行比对确定基因亚型,并通过DNAman软件对核酸序列进行分析;对携带CTX-M型ESBLs耐药基因菌株按照Kirby-Bauer法进行药物敏感性试验,测定志贺菌对8种头孢类抗生素耐药情况。结果 83株志贺菌中,13株携带CTX-M型ESBLs基因,阳性率为15.66%。对DNA序列进行比对、分析均为CTX-M-9型中的CTX-M-14亚型,未发现单核苷酸多态性(SNPs)位点。药敏结果显示,13株携带CTX-M型ESBLs基因菌株对头孢噻吩、头孢唑林、头孢噻肟等头孢类抗生素耐药,对头孢西丁、头孢他啶、头孢吡肟和头孢哌酮等头孢类抗生素均敏感,部分菌株对氨曲南耐药。结论本地区志贺菌中CTX-M型ESBLs以CTX-M-14亚型为主,基因结构稳定,携带CTX-M-14型ESBLs菌株呈多重耐药。