线粒体自噬受体蛋白FUN14结构域包含蛋白1在心血管疾病中的作用

作为细胞的有氧呼吸和能量供应中心,线粒体在细胞代谢、反应和凋亡中都发挥重要作用。因此,为了维持细胞功能,控制线粒体质量至关重要。线粒体自噬为一种选择性吞噬方式,通过靶向清除需要清除的功能失调的线粒体来维持细胞的动态平衡。FUN14结构域包含蛋白1(FUNDC1)是一种在心肌细胞线粒体外膜中高度表达、具有介导线粒体自噬功能的受体蛋白。多项研究表明,FUNDC1的表达水平和磷酸化状态与各种心血管疾病的发生、发展和预后密切相关。本文综述了FUNDC1介导的线粒体自噬的调控机制及其在心血管疾病中的作用。

Ⅲ型纤连蛋白样包含结构域1蛋白在食管癌组织中的表达及临床意义

目的研究Ⅲ型纤连蛋白样包含结构域1(FNDC1)蛋白在食管癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化及实时荧光定量PCR检测四川省巴中市中心医院2013年4月至2015年4月诊治的93例食管癌患者癌组织及癌旁组织中FNDC1的表达,分析癌组织中FNDC1的表达与临床病理特点关系。随访5年,Kaplan-Meier生存分析癌组织中不同FNDC1表达患者预后的差异。结果癌组织中FNDC1 mRNA的相对表达量明显高于癌旁组织(P <0.05)。FNDC1阳性棕褐色染色主要位于癌组织中肿瘤细胞的细胞浆,癌组织中FNDC1的阳性表达率明显高于癌旁组织(P <0.05)。癌组织中FNDC1蛋白表达与肿瘤分期及淋巴结转移有关(P <0.05)。随访3~60个月,FNDC1阳性患者5年总体生存率低于FNDC1阴性患者(P <0.05),FNDC1阳性患者的平均生存时间短于FNDC1阴性患者(P <0.05)。结论食管癌组织中FNDC1表达升高,FNDC1的表达与肿瘤分期及淋巴结转移有关,并有可能成为判断食管癌患者生存预后的标志物。

三结构域包含蛋白29对鼻咽癌细胞生长和迁移的影响

目的研究三结构域包含蛋白(TRIM 29)、死骨片蛋白-1(SQSTM 1)、根蛋白(RDX)基因在不同转移潜能鼻咽癌细胞系中的表达水平,了解其与鼻咽癌细胞侵袭转移的关系,揭示TRIM 29在鼻咽癌细胞侵袭转移中的作用。方法 1采用q RT-PCR(quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction)和蛋白印迹法(Western blot)检测高转移潜能鼻咽癌细胞系5-8F和低转移潜能鼻咽癌细胞系6-10B中TRIM 29、SQSTM 1、RDX基因的m RNA和蛋白表达水平;2脂质体转染法将TRIM 29特异性si RNA载体和空白载体转染5-8F细胞,建立稳定转染细胞系;3采用Western blot检测细胞中TRIM 29蛋白表达水平的变化,MTT法检测细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测细胞周期分布的变化,划痕实验观察细胞迁移能力的变化。结果 15-8F细胞中TRIM 29、SQSTM 1的表达水平明显高于6-10B细胞,而RDX的表达水平低于6-10B细胞;2建立了TRIM 29低表达的5-8F细胞系及其空白载体稳定转染细胞系;3与空白载体转染的5-8F细胞和未转染5-8F细胞比较,特异性si RNA转染的TRIM 29低表达5-8F细胞的增殖能力降低,G0/G1细胞增加,而S期细胞减少,细胞迁移能力降低。结论 1si RNA干扰TRIM 29表达抑制鼻咽癌5-8F细胞的生长和迁移;2TRIM 29、SQSTM 1与鼻咽癌转移密切相关,有望成为预警鼻咽癌转移的分子标志物,但RDX与鼻咽癌转移关系不确定。

血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平预测急性肺栓塞严重程度及预后的价值

目的探讨血浆信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE-1)、A解聚素和金属蛋白酶及血小板反应蛋白基序-9(ADAMTS-9)及血管生成素-2(ANG-2)水平预测急性肺栓塞(APE)严重程度及预后的价值。方法选取收治的APE患者121例,依据CT肺动脉栓塞指数(PAOI)分为轻度组34例(PAOI<30%)、中度组45例(30%≤PAOI≤50%)和重度组42例(PAOI>50%),根据APE患者预后情况分为预后良好组86例和预后不良组35例。采用酶联免疫吸附法测定血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平。应用多元logistic回归分析影响APE预后不良的危险因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平对APE预后不良的预测价值。采用Pearson相关分析血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与心功能指标的相关性。结果预后不良组血浆SCUBE-1[(24.63±11.70)ng/mL vs.(10.17±5.12)ng/mL]、ADAMTS-9[(47.50±13.25)ng/mL vs.(24.28±7.63)ng/mL]及ANG-2[(15.38±6.27)ng/mL vs.(4.15±1.52)ng/mL]水平均明显高于预后良好组(P<0.001)。APE患者病情越重,血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平越高,重度组>中度组>轻度组(P<0.001)。多元logistic回归分析显示,PAOI、CRP、cTnI、BNP、D-二聚体、SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高是影响APE预后不良的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2三项联合预测APE预后不良的曲线下面积最大(0.931,95%CI:0.868~0.996),其准确度为88.4%。相关分析显示,APE患者血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平与CRP、cTnI、BNP、D-二聚体及PAOI均呈正相关(P<0.05)。结论血浆SCUBE-1、ADAMTS-9及ANG-2水平升高与APE严重程度和预后不良有关,是APE预后不良的危险因素,三项联合对APE预后不良有较好的预测价值。

血清SCUBE-1及EndoCan水平与血液透析患者动静脉内瘘血栓形成的关系

目的探讨血清SCUBE-1、EndoCan水平对血液透析(MHD)患者动静脉内瘘(AVF)血栓形成的关系。方法选取2018年6月~2020年6月我院收治的MHD并已行AVF的患者232例,随访24个月,根据AVF是否发生血栓,分为血栓组和非血栓组,比较两组MHD患者AVF血栓发生情况;单因素分析和多因素分析AVF血栓发生的危险因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE1)、内皮细胞特异性分子-1(Endocan)水平单独及联合预测MHD患者AVF血栓发生的预测价值。结果随访过程中,有41例患者发生AVF血栓,血栓组和非血栓组SCUBE1、Endocan水平、年龄、糖尿病、血红蛋白、C反应蛋白、低密度脂蛋白胆固醇、低血压和普通肝素抗凝差异有统计学意义(均P<0.05);多因素COX回归分析结果提示,糖尿病病史、透析低血压、普通肝素抗凝、SCUBE1、Endocan水平为影响血栓发生的危险因素(P<0.05);SCUBE1、Endocan单独及联合预测AVF的AUC分别为0.813、0.912、0.939。结论SCUBE1、Endocan水平升高是AVF血栓形成的危险因素;SCUBE1、Endocan对AVF血栓预测具有较高诊断价值,对血清EndoCan>0.98 ng/mL、SCUBE-1>40 ng/mL的AVF患者应警惕其发生血栓的风险。

BMAL1减轻H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞损伤机制研究

目的探讨脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(BMAL1)通过核因子E2相关因子2(NRF2)调节活性氧(ROS)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的心肌细胞损伤的影响。方法体外培养H9c2细胞和BMAL1稳定过表达的H9c2细胞,建立H_(2)O_(2)诱导的H9c2细胞损伤模型,并将细胞分为对照(Control)组、H_(2)O_(2)组、BMAL1过表达(BMAL1-OE)组、BMAL1过表达+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+H_(2)O_(2))组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂(BMAL1-OE+ML385)组、BMAL1过表达+NRF2抑制剂+H_(2)O_(2)(BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2))组。采用CCK-8法检测细胞活力,荧光探针2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯检测ROS生成,Western blot检测BMAL1、NRF2和NLRP3蛋白表达,酶联免疫吸附试验法检测白细胞介素(IL)-1β释放。结果与Control组相比,H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,BMAL1和NRF2蛋白表达水平降低,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05);与H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力升高,ROS生成减少,BMAL1和NRF2蛋白表达水平升高,NLRP3蛋白表达水平降低,IL-1β释放减少(P<0.05)。与BMAL1-OE+H_(2)O_(2)组相比,BMAL1-OE+ML385+H_(2)O_(2)组H9c2心肌细胞活力减弱,ROS生成增多,NLRP3蛋白表达水平升高,IL-1β释放增多(P<0.05)。结论BMAL1可减轻H_(2)O_(2)诱导的H9c2心肌细胞损伤,其机制可能与NRF2调节ROS/NLRP3炎症小体通路有关。

大黄鱼UBXN1基因鉴定及其过表达后的转录组分析

为探究一种包含泛素调节性X结构域的蛋白(ubiquitin regulatory X domain-containing protein,UBXN1)在大黄鱼抗盾纤毛虫感染中的作用,以及可能涉及的免疫信号通路。本实验克隆鉴定了大黄鱼UBXN1基因,并利用在线软件对其序列特征进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UBXN1在健康大黄鱼各组织中的表达,及盾纤毛虫感染后的诱导表达变化;并进行了UBXN1的亚细胞定位;转录组测序分析了UBXN1过表达前后的差异表达基因。结果显示,UBXN1基因cDNA全长为915 bp,编码304个氨基酸。蛋白多重序列比对和结构预测表明UBXN1是一个进化保守的蛋白,包含UBA和UBX结构域。qRT-PCR分析表明UBXN1在所检测的11种组织中均有表达,脑中表达量最高,其次是肝脏、心脏和肾脏,在肌肉中表达量最低;盾纤毛虫感染大黄鱼后,UBXN1在脾脏、脑、肝脏和肾脏中表达量早期显著升高,后期逐步恢复至正常水平。亚细胞定位分析表明,UBXN1在大黄鱼肾脏细胞质和细胞核中均有表达。在293T细胞过表达UBXN1,转录组差异表达分析筛选到12个上调基因,4个下调基因,其中RPL41/RPL39/XIST/RNA45SN4表达量显著增加,而ATP8/ND4L表达量显著减少。研究表明UBXN1在大黄鱼抗寄生虫免疫应答中发挥重要作用。本实验为进一步研究UBXN1的免疫信号通路奠定基础。

2型糖尿病并发视网膜病变患者血清皮质醇、肌生成抑制素、SCUBE-1水平变化及临床意义

目的探讨2型糖尿病(T2DM)并发糖尿病视网膜病变(DR)患者血清皮质醇、肌生成抑制素(Mstn)、信号肽-补体蛋白C1r/C1s、Uegf和Bmp1-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE-1)的水平变化,并分析其与增生型DR的关系。方法将2018年3月至2021年12月北京中医医院怀柔医院眼科收治的T2DM并发DR患者365例纳入研究,根据有无新生血管分为增生型DR组(62例)和非增生型DR组(303例)。将同期北京中医医院怀柔医院内分泌科收治的单纯T2DM患者51例纳入研究作为T2DM组。另外,选取同期于北京中医医院怀柔医院体检健康者51例作为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清皮质醇、Mstn和SCUBE-1水平,同时收集纳入研究者基线资料,采用Pearson相关分析血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1与基线资料中各指标的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1对增生型DR的诊断价值。结果血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1水平的组间比较显示,增生型DR组均高于非增生型DR组,非增生型DR组均高于T2DM组,T2DM组均高于健康对照组(P<0.05)。单因素分析显示,增生型DR组体重指数(BMI)、空腹糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血清葡萄糖(FSG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、甘油三酯(TG)、血尿素(Urea)、血肌酐(Cr)、尿清蛋白排泄率(UAER)高于非增生型DR组(P<0.05)。Pearson相关分析显示,T2DM并发DR患者血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1水平与BMI、糖尿病病程、HbA1c、FSG、FINS、HOMA-IR、TG、Urea、Cr、UAER均呈正相关(P<0.05)。血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1、两两联合(皮质醇+Mstn、皮质醇+SCUBE-1、Mstn+SCUBE-1)及3项指标联合检测诊断增生型DR的ROC曲线下面积分别为0.695、0.747、0.742、0.768、0.758、0.771、0.838,3项联合应用的诊断效能较高。结论T2DM并发DR患者血清皮质醇、Mstn、SCUBE-1水平异常升高,与增生型DR有关,3项指标联合检测对增生型DR具有较高的诊断价值。

急性心肌梗死患者Tp-Te/QT比值、血清SCUBE1水平与并发恶性室性心律失常的关系

目的探讨急性心肌梗死(AMI)患者Tp-Te/QT比值、血清信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE1)水平与并发恶性室性心律失常(MVA)的关系。方法选取2021年2月—2023年2月收治的135例AMI作为病例组,另选取同期体检健康者102例作为对照组。应用心电散点图技术分析记录心电图资料,将病例组根据是否发生MVA又分为MVA组和非MVA组。分析各组Tp-Te/QT比值、血清SCUBE1水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估Tp-Te/QT比值、血清SCUBE1对AMI患者并发MVA的预测效能,采用多因素Logistic回归分析探讨AMI患者并发MVA的影响因素。结果病例组Tp-Te/QT比值与血清SCUBE1水平均高于对照组(P<0.01)。MVA组Tp-Te/QT比值与血清SCUBE1水平均高于非MVA组(P<0.01)。Tp-Te/QT比值联合血清SCUBE1预测AMI患者合并MVA的曲线下面积(0.918)高于各指标单独预测的曲线下面积。多因素Logistic回归分析显示,Tp-Te/QT比值≥0.22、SCUBE1≥50.20μg/L是AMI患者并发MVA的危险因素(P<0.01)。结论Tp-Te/QT比值、血清SCUBE1是影响AMI患者合并MVA的危险因素,Tp-Te/QT比值联合血清SCUBE1对预测AMI患者合并MVA的发生风险具有一定临床价值。

血清SCUBE1对老年缺血性心力衰竭患者的预后评估研究

目的探讨血清信号肽-CUB-表皮生长因子结构域包含蛋白1(SCUBE1)对老年缺血性心力衰竭(IHF)患者预后的评估作用。方法本研究为前瞻性队列研究。连续入组2020年3月至2021年3月于解放军总医院心血管内科住院的IHF患者,通过电子病历系统收集患者的基线临床资料、实验室检查等资料并检测血清SCUBE1水平。对所有患者进行为期1年的随访,随访终点为因心力衰竭恶化再入院或发生主要不良心血管事件。采用多因素Logistic回归模型分析预后不良患者的危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线评估不同危险因素对IHF患者预后的预测价值。结果研究最终入选患者231例,其中发生预后不良者85例(36.80%)。多因素Logistic回归分析结果显示,通过校正,N末端脑钠肽前体(NTproBNP,OR=1.000,95%CI:1.000~1.001,P<0.001)与SCUBE1(OR=3.838,95%CI:2.162~6.811,P<0.001)为老年IHF患者预后不良的独立危险因素。ROC曲线分析结果显示NT-proBNP及SCUBE1对于IHF患者预后评估同样具有良好的预测价值,AUC分别为0.875(95%CI:0.825~0.914)及0.815(95%CI:0.759~0.863)。且二者联合评估预后的AUC为0.906(95%CI:0.861~0.940),预测效能优于二者单独预测。结论SCUBE1对于老年IHF患者预后具有较好的预测价值,且与NT-proBNP联用能更好地提高预后评估效能,两种生物标记物均升高的患者预后较差。

脑小血管病与Toll样受体4核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3信号通路

脑小血管病是指由于各种病因影响脑内小动脉、微动脉、毛细血管、微静脉和小静脉导致的一系列临床、影像和病理综合征[1]。影像学主要表现为腔隙性病灶、脑白质高信号、脑微出血、近期皮质下小梗死灶和脑萎缩等异常信号[2]。在我国脑小血管病占缺血性脑卒中的46%[3]。随着我国人口老年化程度的不断加深,脑小血管病发病率呈逐年上升趋势。目前,脑小血管病的病理生理改变暂时集中于内皮功能障碍、血脑屏障破坏、慢性缺血低灌注和炎性反应等因素。

温肺降浊方对血管性痴呆大鼠线粒体外膜蛋白的影响

目的:探讨温肺降浊方对血管性痴呆(VaD)模型大鼠FUN14结构域包含蛋白1(FUNDC1)、线粒体分裂蛋白1(Fis1)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)等线粒体外膜蛋白的影响,探究本方可能的作用机制。方法:将24只大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、温肺降浊方组,每组各6只。采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备VaD大鼠模型,温肺降浊方组予以温肺降浊方药液,阳性对照组予以盐酸多奈哌齐。Morris水迷宫行为学测试检测各组大鼠认知水平,HE染色法检测各组大鼠海马组织病理形态,免疫荧光化学染色检测大鼠海马中FUNDC1与Fis1阳性细胞数表达,Western blotting检测FUNDC1、Fis1、Mfn1与Mfn2蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少(P<0.05),细胞破碎,核缩小,水肿化,海马中FUNDC1与Fis1阳性细胞表达量上升,FUNDC1、Fis1蛋白上升,Mfn1/2蛋白降低(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组和温肺降浊方组逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加(P<0.05),细胞核逐渐趋于正常,水肿化减少,FUNDC1与Fis1阳性细胞数及蛋白下降,Mfn1/2蛋白升高(P<0.05)。结论:温肺降浊方通过下调FUNDC1、Fis1蛋白水平,上调Mfn1/Mfn2蛋白维持线粒体动力学平衡,减轻海马神经元损伤,发挥脑保护作用。

益气升清方调节HIF-1α/NLRP3信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响

目的 探究益气升清方调节缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的影响。方法 将SD大鼠随机分为假手术组(S组),模型组(M组),益气升清方低、中、高剂量组(3.465、6.930、13.860 g/kg)及益气升清方高剂量+HIF-1α激活剂DMOG组(13.860 g/kg益气升清方+40 mg/kg DMOG),每组15只。采用线栓法构建脑卒中模型。造模成功后进行神经功能缺陷评估;TTC染色评估脑梗死体积;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-18水平;HE染色检测缺血皮质区病理变化;TUNEL染色检测神经元凋亡;Western blot检测焦亡及HIF-1α/NLRP3通路相关蛋白表达。结果 与S组比较,M组神经功能缺陷评分、梗死体积、IL-1β含量、IL-18含量、神经细胞凋亡率、胞膜穿孔蛋白D-N端(GSDMD-N)、胱天蛋白酶1(Caspase-1)、HIF-1α、NLRP3蛋白水平均上升(P<0.05);与M组比较,低、中、高剂量益气升清方组神经功能缺陷评分、梗死体积、IL-1β含量、IL-18含量、神经细胞凋亡率、GSDMD-N、Caspase-1、HIF-1α、NLRP3蛋白水平均下调(P<0.05);DMOG减弱了高剂量益气升清方对缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡的改善作用。结论 益气升清方可能通过下调HIF-1α/NLRP3信号通路减轻缺血性脑卒中大鼠神经元焦亡。

YTHDC1介导ABCB6上调诱导AD小鼠神经元细胞铁死亡促进认知功能障碍机制的实验研究

目的研究ATP结合盒B亚家族转运蛋白6(ATP-binding cassette subfamily B transporter 6,ABCB6)对阿尔兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)小鼠认知功能障碍的影响及其可能的潜在调控分子机制。方法通过注射β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)构建体内AD小鼠模型;采用水迷宫测试和Y迷宫测试评估大鼠学习与记忆能力、空间探索能力。通过神经元HT22细胞和Aβ构建体外AD细胞模型;采用RNA免疫沉淀(RNA immunoprecipitation,RIP)分析YTH结构域包含蛋白1(YTH domain containing proteins 1,YTHDC1)与ABCB6的结合关系;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测过表达和敲低转染效率;Western blot检测YTHDC1和ABCB6蛋白,以及铁死亡相关蛋白[溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)]表达水平;CCK-8检测细胞活力;检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平及Fe^(2+)含量。结果AD小鼠海马组织及Aβ诱导的HT22细胞中ABCB6 mRNA(3.51±0.17 vs 1.02±0.01,3.45±0.21 vs 1.02±0.01)和蛋白(3.25±0.14 vs 1.01±0.01,3.14±0.16vs 1.01±0.01)水平均显著上调,差异具有统计学意义(t=-46.238,-20.349;-50.468,-23.013,均P<0.001)。敲低ABCB6显著降低AD小鼠抵达平台的时间、到达平台距离,增加小鼠自发交替率和进入新异臂次数的比值(t=27.007,11.264,24.414,19.901,均P<0.001)。敲低ABCB6促进HT22细胞增殖,抑制Aβ诱导的MDA,Fe^(2+)水平上调和GSH水平下调,减少ROS生成,促进SLC7A11和GPX4蛋白表达(t=2.883~26.122,均P<0.05)。YTHDC1蛋白通过与ABCB6 mRNA结合促进其稳定性,上调ABCB6蛋白表达。敲低YTHDC1显著降低ABCB6蛋白水平(t=18.504,P<0.001),促进HT22细胞增殖,升高GSH含量及SLC7A11和GPX4蛋白水平,降低MDA和Fe^(2+)含量,抑制ROS生成(t=4.404~14.486,均P<0.05)。敲低YTHDC1可以改善AD小鼠学习与记忆能力和空间探索能力。过表达ABCB6可逆转敲低YTHDC1对HT22细胞铁死亡和AD小鼠认知功能障碍的影响。结论YTHDC1可能通过介导ABCB6上调,诱导神经元细胞铁死亡,进而促进AD小鼠的认知功能障碍发生。

蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1的中药抑制剂筛选

用含有蛋白质酪氨酸磷酸酶SHP-1催化结构域(ΔSHP-1)的质粒转化大肠杆菌,得到ΔSHP-1的高效表达,经分离纯化后,以ΔSHP-1为靶标,通过体外酶反应动力学实验,对157种中药水提液的抑制效果进行研究,筛选出两种对ΔSHP-1具有显著抑制作用的中药:山茱萸和蒲公英,并对其IC50及抑制类型做了进一步研究.为建立蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂的筛选方法和中药在治疗免疫疾病和糖尿病上的开发和应用提供了理论依据.

受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)调控人结肠癌HT-29细胞程序性坏死的分子机制

目的研究受体相互作用蛋白激酶1(receptor interacting protein kinase 1,RIPK1)在人结肠HT-29细胞程序性坏死过程中的作用,并探讨E3泛素连接酶三重结构域包含蛋白16(tripartite domain containing protein 16,Trim16)对其作用的潜在调控机制。方法用肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNFα)建立HT-29细胞的程序性坏死模型,采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测其对凋亡、坏死细胞数目的影响。分别用Western blot和qRT-PCR检测RIPK1在细胞程序性坏死中的表达。构建稳定表达Flag标记的RIPK1的HT-29细胞株,采用Flag标记的pulldown试验结合质谱检测发现与RIPK1有相互作用的新蛋白。应用NiNTA pulldown试验检测筛选出的E3泛素连接酶对RIPK1泛素化的调控。结果 TNFα能够成功诱导HT-29细胞程序性坏死。HT-29细胞在TNFα和半胱天蛋白酶抑制剂z-VAD处理后,表现出RIPK1、RIPK3、混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)表达水平显著增加,并伴随着炎性因子白介素1α(IL1α)和白介素6(IL6)水平明显升高。Flag标记的pulldown试验结合质谱检测发现一个与RIPK1有相互作用的E3泛素连接酶Trim16,体外实验表明Trim16可以增强RIPK1的泛素化程度,其可能调节RIPK1在程序性坏死过程中的作用。结论 RIPK1在TNFα和z-VAD诱导人结肠癌HT-29细胞的程序性坏死过程中起重要作用,E3泛素连接酶Trim16对此过程可能有重要调控作用。

NSCLC患者血清中PTBP1、CDCP1的表达及临床预后意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中多聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)、含CUB结构域的蛋白质1(CDCP1)的表达及临床预后意义。方法 选取于贵州航天医院就诊的90例NSCLC患者为NSCLC组,以同期诊治的40例肺部良性疾病患者为良性疾病组,40例体检健康者为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清PTBP1、CDCP1水平,并比较各组血清PTBP1、CDCP1水平差异,比较不同临床病理特征患者血清PTBP1、CDCP1水平差异。采用Pearson相关分析NSCLC组血清PTBP1与CDCP1水平的相关性,采用Kaplan-Meier生存曲线分析血清PTBP1、CDCP1水平对NSCLC患者生存预后的影响,采用单因素及多因素Cox回归分析影响NSCLC患者生存预后的因素。结果 NSCLC组血清PTBP1、CDCP1水平明显高于良性疾病组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组患者血清PTBP1与CDCP1水平呈正相关(r=0.721,P<0.001)。不同肿瘤分期、淋巴结转移患者血清PTBP1、CDCP1水平差异有统计学意义(P<0.05)。PTBP1高表达组和低表达组NSCLC患者的平均生存时间分别为(27.59±3.32)个月、(31.47±3.68)个月,Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,PTBP1高表达组患者累积生存率低于PTBP1低表达组患者(χ^(2)=5.910,P=0.015)。CDCP1高表达组和低表达组平均生存时间分别为(27.34±3.29)个月、(32.27±3.54)个月,CDCP1高表达组患者累积生存率低于CDCP1低表达组患者(χ^(2)=7.544,P=0.006)。肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、PTBP1高表达、CDCP1高表达是影响NSCLC患者生存预后的独立危险因素。结论 NSCLC患者血清PTBP1、CDCP1水平升高,二者与肿瘤分期及淋巴结转移有关,是影响NSCLC患者生存预后的独立危险因素,二者是潜在的NSCLC肿瘤标志物。

SETD1A与KDM4A在非小细胞肺癌中的表达及临床价值

目的研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中组蛋白赖氨酸甲基转移酶SET结构域包含1A(SETD1A)和赖氨酸去甲基酶4A(KDM4A)表达及与临床病理特征及预后的关系。方法选取2017年1月—2020年1月南通市肿瘤医院综合内科收治NSCLC患者116例为研究对象。采用免疫组织化学法检测NSCLC组织中SETD1A、KDM4A表达,二者相关性分析采用Spearman秩相关分析。Kaplan-Meier生存分析SETD1A、KDM4A表达对NSCLC患者生存预后的影响。Cox回归分析影响NSCLC患者预后因素。结果NSCLC癌组织中SETD1A棕黄色阳性染色主要位于细胞核,KDM4A阳性染色主要位于细胞浆和细胞膜。NSCLC癌组织SETD1A阳性率为61.21%(71/116),高于癌旁组织的6.90%(8/116),差异有统计学意义(χ^(2)=76.546,P<0.001)。NSCLC癌组织中KDM4A阳性率为65.52%(76/116),高于癌旁组织的8.62%(10/116),差异有统计学意义(χ^(2)=80.487,P<0.001)。NSCLC癌组织中SETD1A与KDM4A表达呈显著正相关(rs=0.722,P<0.001)。TNM分期Ⅲ期、低分化程度、伴淋巴结转移患者在NSCLC癌组织中SETD1A、KDM4A阳性率显著高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、高中分化程度、无淋巴结转移者(SETD1A:χ^(2)/P=15.808/<0.001,7.108/0.008,17.136/<0.001;KDM4A:χ^(2)/P=9.050/0.003,5.480/0.019,10.208/0.001)。SETD1A阳性组和阴性组患者3年总体生存率分别为49.28%(34/69)、78.72%(37/47)。SETD1A阳性组患者3年累积生存率明显低于阴性组患者(χ^(2)=12.984,P<0.001);KDM4A阳性组和阴性组3年总体生存率分别为48.65%(36/74)、83.33%(35/42),KDM4A阳性组患者3年累积生存率明显低于阴性组患者(χ^(2)=17.175,P<0.001)。TNM分期Ⅲ期、合并淋巴结转移、SETD1A阳性、KDM4A阳性是影响NSCLC患者不良预后的独立危险因素[OR(95%CI)=1.610(1.221~2.122)、1.904(1.307~2.774)、1.835(1.228~2.742)、1.744(1.245~2.443)]。结论NSCLC癌组织中SETD1A、KDM4A表达升高,两者表达与TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关,检测NSCLC组织中SETD1A、KDM4A表达有助于评估NSCLC患者临床预后。

NLRP3-CAMKⅡ-IRE-1α通路激活诱导氧化应激增强对糖尿病大鼠心室重构的影响

目的探讨核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体通过钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)激活肌醇需求激酶-1α(IRE-1α)促进氧化应激增强在糖尿病大鼠心室重构中的作用及机制。方法36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为对照组(CTL组)、糖尿病组(DM组)和糖尿病+格列苯脲组(GLB组),每组12只。大鼠通过单次腹腔注射55 mg/kg链脲佐菌素制备糖尿病模型,GLB组于造模成功后给予NLRP3抑制剂格列苯脲(1.25 mg/kg),连续灌胃8周。CTL组不进行任何干预。8周后记录各组血糖、血压、体质量,计算心室体质量比,测量血流动力学指标;心脏超声检查评估肺动脉血流加速时间、平均肺动脉压、收缩期与舒张期室间隔、心室前壁和心室后壁厚度;心外膜激活映射标测进行心外膜传导速度、绝对不均匀性和不均匀指数测定;采用蛋白免疫印迹检测NLRP3、胱天蛋白酶(caspase)-1、CaMKⅡ、IRE-1α、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)2、NOX4的蛋白水平;荧光染色法测定活性氧(ROS)含量;HE及Masson染色观察心室组织细胞形态和纤维化。结果与CTL组相比,DM组的血糖升高,心室体质量比增大,收缩期和舒张期室间隔厚度、左心室前壁厚度增加,体质量降低,左、右心室心外膜传导速度减慢,右心室不均匀指数增加,NLRP3、caspase-1、CaMKⅡ、IRE-1α、NOX2和NOX4蛋白表达水平升高,心室肌ROS产生增多,CVF升高(P<0.05),心室肌细胞排列紊乱,纤维化更明显;与DM组比较,GLB组收缩期和舒张期室间隔厚度、左心室前壁厚度降低,左、右心室心外膜传导速度增快,左心室绝对不均匀性和不均匀指数降低,NLRP3、caspase-1、CaMKⅡ、IRE-1α、NOX2和NOX4蛋白表达水平下降,ROS产生减少,CVF降低(P<0.05),心室肌纤维化程度减轻。结论糖尿病大鼠心室肌细胞NLRP3-CAMKⅡ-IRE-1α通路激活,促进氧化应激增强,参与心室重构,GLB可改善此变化。

麦芽提取物调控NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路抑制高催乳素血症大鼠垂体前叶细胞增殖及催乳素分泌

目的探讨麦芽提取物(ME)调控Nod样受体蛋白3(NLRP3)/胱天蛋白酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)通路对高催乳素血症(HPRL)大鼠垂体前叶细胞增殖及催乳素(PRL)分泌的影响。方法分别分离正常大鼠、HPRL大鼠的垂体前叶细胞,依次命名为NC组和Model组,免疫组织化学染色鉴定细胞中生长激素、PRL表达。将Model组细胞分别用0、25、50、100 mg/L ME,5 mmol/L腺苷三磷酸(ATP),100 mg/L ME+5 mmol/L ATP处理48 h,依次命名为空白组(Blank组)、ME低剂量组(ME-L组)、ME中剂量组(ME-M组)、ME高剂量组(ME-H组)、ATP组、ME-H+ATP组,光学显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附试验检测上清液中PRL水平;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、多巴胺受体D2(DRD2)、多巴胺转运体(DAT)、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达。结果成功分离大鼠垂体前叶细胞;与NC组比较,Blank组细胞体积变小,形状不规则,OD450值、PRL水平、DAT、PCNA、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达升高,细胞凋亡率、DRD2蛋白表达降低(P<0.05);与Blank组比较,ME-L组、ME-M组、ME-H组细胞形态有所改善,OD450值、PRL水平、DAT、PCNA、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达降低,细胞凋亡率、DRD2蛋白表达升高,且呈剂量依赖性,而ATP组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);ATP减弱了高剂量ME对HPRL大鼠垂体前叶细胞增殖与PRL分泌的抑制作用。结论ME可能通过下调NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路蛋白表达抑制HPRL大鼠垂体前叶细胞增殖及PRL分泌。