缺氧诱导因子2α对含CUB结构域蛋白1的调控及在肝癌转移中的作用

目的探讨缺氧诱导因子2α（HIF-2α）对CUB结构域蛋白1（CDCP1）的调控及其在肝癌转移中的作用。方法采用小干扰RNA（siRNA）和慢病毒转染的方法敲减和稳定过表达HIF-2α的肝癌细胞系MHCC97H，采用Western blot和实时荧光定量PCR检测CDCP1mRNA和蛋白的表达，采用Transwell侵袭实验检测HIF-2α对细胞侵袭能力的影响，采用免疫组化染色方法检测肝癌组织标本中CDCP1的表达。结果HIF-2α和CDCP1均能在乏氧条件下被诱导，且CDCP1在乏氧条件下的活化依赖于HIF-2α的表达。在肝癌细胞中，CDCP1在转录和翻译水平均受到HIF-2α的调控，过表达HIF-2α后，CDCP1mRNA的表达水平为5．92±0．28，高于阴性对照组（1．00±0．12），差异有统计学意义（P〈0．05）：敲减HIF-2α 48h和72h后，MHCC97H细胞中CDCP1mRNA的表达水平分别为0．25±0．04和0．18±0．02，均低于对照组（分别为1．00±0．18和1．00±0．19），差异均有统计学意义（均P〈0．05）。CDCP1的表达与患者的无瘤生存有关（P〈0．05）。结论CDCP1的表达与肝癌的进展有关，CDCP1的表达受HIF-2α的调控。通过靶向抑制HIF-2α和（或）CDCP1的表达可能对肝癌转移起到一定的抑制作用。

CUB结构域蛋白1在肺癌中的表达及临床意义

目的探讨CUB结构域蛋白1（CUB domain-containing protein 1,CDCP1）在肺癌中的表达及临床意义。方法肺癌患者78例,其中40例采用Western blot方法检测肺癌及手术切缘癌旁组织中CDCP1蛋白表达;应用免疫组织化学法检测78例肺癌及切缘组织病理切片中CDCP1的表达,并分析其与肺癌生物学行为的关系。结果肺癌组织中CDCP1高表达率（67.5%）高于癌旁组织（32.5%）,随TNM分期增加,CDCP1在肺癌组织中表达量逐渐增加（P〈0.05）;免疫组织化学结果显示,CDCP1在肺癌组织中高表达率（57.7%）高于癌旁组织（14.1%）（P〈0.05）;有淋巴结转移者CDCP1表达率（67.3%）高于无淋巴结转移者（38.5%）（P〈0.05）;CDCP1表达与肺癌患者生存期呈负相关（r=0.804,P=0.031）;Cox分析显示TNM分期（OR=1.216,95%CI：0.649～5.525,P=0.012）和CDCP1（OR=0.526,95%CI：0.153～0.426,P=0.009）是影响肺癌患者预后的独立因素。结论 CDCP1可能是肺癌多阶段演变过程中的重要变化分子之一,可能成为肺癌分子诊断的生物标志物。

NSCLC患者血清中PTBP1、CDCP1的表达及临床预后意义

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清中多聚嘧啶束结合蛋白1(PTBP1)、含CUB结构域的蛋白质1(CDCP1)的表达及临床预后意义。方法 选取于贵州航天医院就诊的90例NSCLC患者为NSCLC组,以同期诊治的40例肺部良性疾病患者为良性疾病组,40例体检健康者为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清PTBP1、CDCP1水平,并比较各组血清PTBP1、CDCP1水平差异,比较不同临床病理特征患者血清PTBP1、CDCP1水平差异。采用Pearson相关分析NSCLC组血清PTBP1与CDCP1水平的相关性,采用Kaplan-Meier生存曲线分析血清PTBP1、CDCP1水平对NSCLC患者生存预后的影响,采用单因素及多因素Cox回归分析影响NSCLC患者生存预后的因素。结果 NSCLC组血清PTBP1、CDCP1水平明显高于良性疾病组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组患者血清PTBP1与CDCP1水平呈正相关(r=0.721,P<0.001)。不同肿瘤分期、淋巴结转移患者血清PTBP1、CDCP1水平差异有统计学意义(P<0.05)。PTBP1高表达组和低表达组NSCLC患者的平均生存时间分别为(27.59±3.32)个月、(31.47±3.68)个月,Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,PTBP1高表达组患者累积生存率低于PTBP1低表达组患者(χ^(2)=5.910,P=0.015)。CDCP1高表达组和低表达组平均生存时间分别为(27.34±3.29)个月、(32.27±3.54)个月,CDCP1高表达组患者累积生存率低于CDCP1低表达组患者(χ^(2)=7.544,P=0.006)。肿瘤分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、PTBP1高表达、CDCP1高表达是影响NSCLC患者生存预后的独立危险因素。结论 NSCLC患者血清PTBP1、CDCP1水平升高,二者与肿瘤分期及淋巴结转移有关,是影响NSCLC患者生存预后的独立危险因素,二者是潜在的NSCLC肿瘤标志物。

HPVE2/E6、CDCP1、RASSF2A甲基化水平与局部免疫、HR-HPV持续感染的关系

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)E2/E6、含CUB结构域蛋白1(CDCP1)、RAS相关结构域蛋白2A基因(RASSF2A)甲基化水平与宫颈病变级别、局部免疫的关联性。方法选取2018年1月至2020年6月海口市妇幼保健院诊治的158例高危型HPV(HR-HPV)感染患者作为研究对象。比较不同宫颈病变级别患者HPVE2/E6、CDCP1、RASSF2A甲基化水平,并给予重组人干扰素治疗,根据治疗效果分为转阴组(n=132)、持续感染组(n=26),比较两组HPVE2/E6、CDCP1mRNA、RASSF2AmRNA、局部免疫功能水平及其相关性,探讨HR-HPV持续感染影响因素,评估上述指标预测HR-HPV持续感染的效能。结果高级别宫颈上皮内病变(HSIL)患者CDCP1阳性率、RASSF2AmRNA、CDCP1mRNA高于无宫颈上皮内病变(NSIL)、低级别宫颈上皮内病变(LSIL)患者,HPVE2/E6、RASSF2AmRNA低于NSIL、LSIL患者(P<0.05)。HPVE2/E6、RASSF2AmRNA与CD4^(+)呈正相关,与CD8^(+)呈负相关;CDCP1mRNA与CD4^(+)呈负相关,与CD8^(+)呈正相关(P<0.05);HPVE2/E6、CDCP1mRNA、RASSF2AmRNA是HR-HPV持续感染的重要影响因素(P<0.05);HPVE2/E6+CDCP1mRNA+RASSF2AmRNA预测HR-HPV持续感染的AUC最大,为0.887。结论HPVE2/E6、CDCP1、RASSF2A甲基化水平与宫颈病变级别、局部免疫密切相关,联合应用对临床预测HR-HPV持续感染、评估宫颈病变级别、预防宫颈癌变发生具有较高的临床应用价值。

CDCP1基因重组慢病毒表达载体的构建及其对宫颈癌细胞增殖与迁移的影响

目的:构建含CUB结构域包含蛋白1(CUB domain containing protein 1,CDCP1)基因的重组慢病毒表达载体,研究CDCP1蛋白对宫颈癌细胞增殖与迁移的影响。方法:以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)cDNA为模板,采用PCR法扩增出CDCP1基因,将其克隆至pHAGE-CMV-MCS-IzsGreen载体中,构建重组慢病毒表达载体pHAGE-CDCP1。将重组质粒pHAGE-CDCP1以及对照质粒pHAGE分别与包装质粒psPAX2以及包膜质粒pMD2.G共转染入人胚肾上皮细胞(293 T细胞),48 h后收集病毒悬液,并采用梯度稀释法测定病毒滴度。将重组慢病毒CDCP1感染人宫颈癌HeLa细胞,通过免疫印迹法检测CDCP1蛋白的表达,采用CCK-8实验检测过表达CDCP1对HeLa细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell细胞迁移实验观察过表达CDCP1对HeLa细胞迁移能力的影响。结果:质粒双酶切鉴定以及核酸测序比对结果证实重组质粒pHAGE-CDCP1构建成功。重组pHAGE-CDCP1慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞后细胞状态良好,CDCP1蛋白表达水平明显增加。高表达CDCP1可以显著提高HeLa细胞的增殖和迁移能力。结论:过表达CDCP1能够促进宫颈癌HeLa细胞的增殖和迁移。