微小RNA-141-3p靶向调控含CUE结构域蛋白2基因对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响

目的 探讨微小RNA-141-3p(miR-141-3p)靶向调控含CUE结构域蛋白2(CUEDC2)对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。方法 2018年7月至2019年12月,从美国ATCC购买大鼠胰腺腺泡细胞AR42J。100 nm/L雨蛙素(CAE)刺激大鼠胰腺腺泡细胞AR42J 6 h建立急性胰腺炎细胞模型。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测雨蛙素干预后AR42J细胞中miR-141-3p和CUEDC2的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-141-3p和CUEDC2的靶向关系。利用脂质体转染法将miR-141-3p抑制物(anti-miR-141-3p)、miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、CUEDC2过表达载体(pcDNA-CUEDC2)、空载体(pcDNA)分别转染AR42J细胞,经雨蛙素干预处理后,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,酶联免疫吸附试验(Elisa)试剂盒检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平。结果 雨蛙素干预处理后AR42J细胞中miR-141-3p的表达水平显著升高[(2.43±0.24)比(1.00±0.09)],CUEDC2的表达水平显著降低。miR-141-3p靶向负性调控CUEDC2表达。与转anti-miR-NC和雨蛙素协同处理组比较,转染anti-miR-141-3p和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(27.48±2.33)%比(15.64±1.51)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(136.54±14.58)ng/L比(226.48±20.54)ng/L]和IL-6[(115.89±11.65)ng/L比(193.47±18.63)ng/L]的分泌显著降低;与转染pcDNA和雨蛙素协同处理组比较,转染pcDNA-CUEDC2和雨蛙素协同处理组AR42J细胞凋亡率显著增加[(23.87±2.35)%比(14.23±1.44)%],Bax蛋白的表达显著增加,Bcl-2蛋白的表达显著降低,TNF-α[(158.74±15.32)ng/L比(236.87±18.66)ng/L]和IL-6[(135.77±14.97)ng/L比(189.67±17.32)ng/L]的分泌显著降低;转染si-CUEDC2可逆转转染anti-miR-141-3p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤的影响。结论 抑制miR-141-3p通过靶向CUEDC2可促进急性胰腺炎腺泡细胞的凋亡,抑制TNF-α和IL-6分泌,从而减轻雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞损伤。

鼻咽癌CNE2与放疗抗拒株CNE2R细胞的放化疗敏感性及其CUEDC2表达量比较

目的比较鼻咽癌CNE2细胞与其放疗抗拒株CNE2R细胞的放化疗敏感性及两者CUE结构域2(CUEDC2)蛋白表达量的差异。方法裸鼠成瘤法比较CNE2与CNE2R细胞的体内生长情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CNE2及CNE2R细胞对顺铂、多西紫杉醇的敏感性;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测CUEDC2的相对mRNA水平、蛋白质免疫印迹法检测CUEDC2蛋白的表达量。结果 CNE2生长速度快于CNE2R,对多西紫杉醇更敏感(P<0.05)。0 Gy、4 Gy、8 Gy照射剂量下,CNE2R的G2/M期阻滞较CNE2明显,但12 Gy照射剂量下,CNE2R的G2/M期阻滞不如CNE2明显(均P<0.05)。在8 Gy、12 Gy照射剂量下,CNE2的凋亡率高于CNE2R(P<0.05)。CNE2R细胞CUEDC2蛋白相对mRNA扩增水平和蛋白表达量均高于CNE2(P<0.05)。结论放疗抗拒株细胞CNE2R的放化疗敏感性较其亲代细胞CNE2低,CUEDC2蛋白的表达量较CNE2的多。

CUEDC2在浆液性卵巢癌组织中的表达及其与临床指标的相关性分析

目的观察CUE结构域蛋白2(CUEDC2)在浆液性卵巢癌组织中的表达,并分析其与相关临床指标的关系。方法采用免疫组化法检测75例浆液性卵巢癌组织及20例未发生转移的输卵管伞端组织中CUEDC2蛋白的表达情况,并分析CUEDC2阳性表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达的相关性。结果75例浆液性卵巢癌患者中,FIGO分期:Ⅰ期患者的CUEDC2评分为1.35±0.60,Ⅱ期为1.54±0.57,Ⅲ期为1.78±0.71,Ⅳ期为2.13±0.27,各组间比较差异均有统计学意义(P=0.04),CUEDC2评分随FIGO分期的增加而升高,即CUEDC2的表达量逐级递增。早期患者的CUEDC2评分明显低于晚期患者(P=0.04)。按病理分级统计,低、中、高分化3组间评分差异无统计学意义。CUEDC2表达与卵巢癌患者的年龄、病理分级、有无淋巴结转移无关,与手术分期有关(P=0.014)。CUEDC2的表达与ER、PR的表达均无相关性(r=–0.0785、r=0.0111)。CUEDC2阳性患者的中位无病生存期(DFS)为32.6个月,中位总生存期(OS)为54.3个月,而阴性患者的中位DFS为51.9个月,中位OS为63.5个月,CUEDC2阳性组及阴性组的OS无明显差异(P>0.05),而CUEDC2阳性组的DFS短于阴性组(P<0.05)。结论CUEDC2在浆液性卵巢癌组织中呈高表达,且与患者的肿瘤分期、无病生存期相关,与ER、PR表达无相关性。

子宫内膜癌组织中SOCS-1、CUEDC2的表达变化及意义

目的探讨子宫内膜癌组织中细胞因子信号传导抑制因子(SOCS1)、CUE结构域蛋白2(CUEDC2)的表达变化及意义。方法选择80例子宫内膜癌患者的临床资料,应用免疫组化法检测癌组织及癌旁组织中SOCS1及CUEDC2表达。统计学分析癌组织中SOCS1、CUEDC2表达与患者临床病理参数关系。Spearman秩相关分析SOCS1与CUEDC2表达的相关性。结果与癌旁组织相比,子宫内膜癌组织中SOCS1表达阳性率降低,而CUEDC2表达阳性率升高(P<0.05)。子宫内膜癌组织中SOCS1、CUEDC2表达均与肿瘤分期、淋巴结转移相关(P均<0.05),而与年龄、肿瘤直径、肌层浸润及分化程度无关(P均>0.05)。子宫内膜癌组织中SOCS1与CUEDC2的表达呈负相关(r=-0.598,P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中SOCS1表达下调,CUEDC2表达上调,二者表达与肿瘤分期和淋巴结转移有关;检测二者表达有助于子宫内膜癌病情判断。

MUC4、CUEDC2、miR-193a-5p在子宫内膜癌组织中的表达及其临床价值

目的 探讨子宫内膜癌组织中黏蛋白4(MUC4)、CUE结构域蛋白2(CUEDC2)、微小RNA-193a-5p(miR-193a-5p)的表达情况及其临床价值。方法 选取2014年5月至2016年5月该院接受手术治疗的84例子宫内膜癌患者及84例子宫内膜息肉患者的病历资料进行回顾性研究。采用免疫组织化学法检测子宫内膜癌组织、癌旁组织及子宫内膜息肉组织中MUC4、CUEDC2表达情况,采用聚合酶链反应检测这3种组织中miR-193a-5p表达水平。比较子宫内膜癌组织、癌旁组织及子宫内膜息肉组织MUC4、CUEDC2、miR-193a-5p表达情况,分析不同病理特征子宫内膜癌组织MUC4、CUEDC2、miR-193a-5p表达情况,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同MUC4、CUEDC2、miR-193a-5表达情况子宫内膜癌患者5年生存率,采用Cox回归模型分析子宫内膜癌患者预后的影响因素。结果 子宫内膜癌组织MUC4、CUEDC2阳性表达率高于癌旁组织、子宫内膜息肉组织(P<0.05),miR-193a-5p表达水平低于癌旁组织、子宫内膜息肉组织(P<0.05)。与肌层浸润深度<1/2、FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移的子宫内膜癌组织相比,肌层浸润深度≥1/2、FIGO分期Ⅲ期、有淋巴结转移的子宫内膜癌组织MUC4、CUEDC2阳性表达率更高(P<0.05),miR-193a-5p表达水平更低(P<0.05)。子宫内膜癌组织MUC4、CUEDC2阳性患者5年生存率低于阴性患者(P<0.05),miR-193a-5p低表达患者5年生存率低于高表达患者(P<0.05)。Cox回归模型分析显示,阳性的MUC4、CUEDC2及低表达的miR-193a-5p是子宫内膜癌患者5年内死亡的独立危险因素(HR=3.582、4.171、0.390,P<0.05)。结论 子宫内膜癌组织中MUC4、CUEDC2高表达,miR-193a-5p低表达,它们与肿瘤肌层浸润深度、FIGO分期、淋巴结转移有关,且为影响患者预后的独立危险因素。

过表达CUEDC2人脑胶质瘤细胞系U251的构建

目的构建过表达CUE结构域蛋白2(CUEDC2)的人脑胶质瘤U251细胞系。方法 PCR扩增CUEDC2基因全长序列,将其连接于GV358载体质粒。酶切鉴定GV358-CUEDC后采用慢病毒包装三质粒系统(GV358-CUEDC2、Helper 1.0、Helper 2.0)转染293T细胞。转染48、72 h后收集病毒上清并感染U251细胞。将U251细胞分为空白对照组、过表达CUEDC2组、空载体组。空白对照组不进行感染操作,过表达CUEDC2组、空载体组分别感染GV358-CUEDC和GV-vector。流式筛选后采用实时荧光定量PCR法检测U251细胞中的CUEDC2 mRNA,采用Western blotting法检测CUEDC2蛋白。结果 GV358-CUEDC酶切结果显示在900 bp处有一条明显条带,CUEDC2测序结果与Gen Bank数据库比对完全一致。流式筛选感染GV358-CUEDC慢病毒的U251细胞,得到阳性率95%以上的U251细胞。U251细胞在感染GV358-CUEDC2及GV-vector病毒后荧光显微镜下均可见绿色荧光。空白对照组、空载体组、过表达CUEDC2组U251细胞中CUEDC2 mRNA相对表达量分别为5.290±0.663、0.823±0.059、1,CUEDC2蛋白相对表达量分别为0.48±0.020、0.51±0.015、0.92±0.150,过表达CUEDC2组CUEDC2 mRNA及蛋白相对表达量均高于空载体组和空白对照组(P均<0.01)。结论成功构建了过表达CUEDC2的人脑胶质瘤U251细胞系。

CUE结构域蛋白2对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响研究

目的探讨CUE结构域蛋白2(CUEDC2)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法肾小管上皮细胞HK-2分为高糖处理组(HG)、转染对照载体后给予高糖处理组(NC+HG)、转染过表达CUEDC2载体后给予高糖处理组(CUEDC2+HG)及对照组(Con)。流式细胞仪测定细胞凋亡;试剂盒检测细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平和培养液中TNF-α、IL-8水平。结果与Con组比较,HG组细胞凋亡率、MDA、TNF-α及IL-8升高[(6.23±0.65)%vs(18.56±3.14)%,(0.06±0.01)vs(0.15±0.02)nmol/mg,(29.54±3.56)vs(56.10±6.30)mg/L,(10.42±1.23)vs(19.59±1.68)mg/L;P<0.05],SOD活性降低[(36.20±2.78)vs(20.17±1.45)U/mg,P<0.05];与NC+HG、HG组比较,CUEDC2+HG组细胞凋亡率、MDA、TNF-α及IL-8降低[(17.14±2.98)%vs(18.56±3.14)%vs(11.47±1.20)%,(0.14±0.01)vs(0.15±0.02)vs(0.10±0.02)nmol/mg,(55.49±5.97)vs(56.10±6.30)vs(41.20±3.75)mg/L,(19.59±1.68)vs(20.12±2.35)vs(14.65±1.42)mg/L,P<0.05],SOD活性升高[(20.17±1.45)vs(19.64±1.37)vs(25.96±3.26)U/mg,P<0.05]。结论过表达CUEDC2可减少高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症因子释放,降低细胞氧化应激,减少细胞凋亡,保护高糖诱导损伤的肾小管上皮细胞。

CUE结构域包含蛋白2在白血病及实体肿瘤发生、发展中作用机制的研究进展

CUE结构域包含蛋白2（CUEDC2）是新近发现的含CUE结构域的泛素结合蛋白,在细胞周期调控、肿瘤形成、炎症及应激反应中均起着重要作用.研究表明,CUEDC2可介导蛋白质泛素化降解,与白血病及实体肿瘤的发生、发展和耐药密切相关.CUEDC2可促进纺锤体检查点（SAC）失活,导致有丝分裂过程中染色体不稳定,进而参与白血病和实体肿瘤发病进程.然而,CUEDC2在白血病及实体肿瘤发生、发展中,是具有抑制作用还是促进作用,尚存在争议.笔者拟就近年来CUEDC2在白血病与实体肿瘤发生、发展中作用机制的研究进展进行综述.

多西他赛联合放疗对乳腺癌患者DNMT1 Cripto-1及CUEDC2表达的影响

目的 探究多西他赛联合放疗对乳腺癌患者DNA甲基转移酶1(DNMT1)、癌胚基因cripto-1(CP-1)、CUE结构域蛋白2((CUEDC2)表达的影响。方法 前瞻性选取2014年9月—2017年9月台州市肿瘤医院接诊的136例乳腺癌患者作为研究对象,按照入院先后顺序分为放疗治疗组65例和联合治疗组71例。放疗治疗组采用X线调强放疗进行治疗,联合治疗组在放疗治疗组基础上加服多西他赛进行治疗。采用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原15-3(CA15-3)、几丁质酶-3样蛋白-1(YKL-40)水平;实时荧光定量(RT-PCR)检测血清DNMT1、CP-1、CUEDC2表达;观察两组患者治疗效果、不良反应发生情况及预后情况。结果 与放疗治疗组治疗后相比,联合治疗组CD3+、CD4+水平及治疗总有效率、3年生存率较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与放疗治疗组治疗后相比,联合治疗组CD8+、血清肿瘤标志物水平、血清DNMT1、CP-1、CUEDC2表达及远处转移、局部复发占比较低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与放疗治疗组治疗后相比,联合治疗组总不良反应发生率略高但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 多西他赛联合放疗可有效降低乳腺癌患者血清DNMT1、CP-1、CUEDC2表达及血清肿瘤标志物水平,疗效确切,可用于此病的治疗。