2017~2018年宁夏回族自治区手足口病流行特征及CV-A6基因特征分析

手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一种常见的儿童急性传染病,近年来由柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)引起的HFMD病例不断增多,CV-A6已逐渐成为HFMD的主要病原体之一。为了解2017~2018年宁夏回族自治区HFMD的流行特征及其病原谱构成,并分析CV-A6的基因特征,本研究收集2017~2018年宁夏回族自治区HFMD的流行病学资料,分析其流行特征及主要致病病原体;采集HFMD临床标本,并使用RD细胞进行病毒分离;对分离出的肠道病毒(Enterovirus,EV)毒株进行全长VP1区扩增及核苷酸序列测定,使用分子定型法鉴定其血清型,选取鉴定结果为CV-A6的序列与GenBank上下载的其他地区的CV-A6代表株共同构建系统进化树。结果显示,2017年宁夏HFMD的主要致病病原体为肠道病毒A组71型(EV-A71)(56.18%)和非EV-A71非CV-A16的其他EV(37.39%),2018年的主要病原为非EV-A71非CV-A16的其他EV(70.72%)和CV-A16(27.70%)。2017和2018年,非EV-A71非CV-A16的其他EV中CV-A6所占比例分别为64.86%(24/37)和70.59%(12/17)。35株CV-A6宁夏株获得全长VP1序列,与CV-A6原型株之间的核苷酸序列相似性为81.8%~83.8%,氨基酸序列相似性为94.0%~96.3%,所有宁夏CV-A6分离株均属于D3基因亚型的D3a进化分支。2017~2018年宁夏HFMD病原谱中,非EV-A71非CV-A16的其他EV已成为主要病原体,其中CV-A6所占比例最大。因此,应加强对CV-A6的监测,医院、疾控以及托幼机构等相关人员应提高对CV-A6引起的HFMD的识别与处置能力,这对HFMD防控具有重要意义。

北京市2018—2020年疱疹性咽颊炎相关CV-A6分子流行病学特征分析

目的了解北京市2018—2020年疱疹性咽颊炎(herpangina,HA)相关柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CV-A6)分子流行病学特征。方法收集2018—2020年北京市16个区哨点监测医院中就诊的18岁以下HA病例的基本信息及临床症状,利用real-time RT-PCR方法检测肠道病毒(enterovirus,EV)和CV-A6核酸,采用描述性统计方法分析HA病例流行特征。扩增CV-A6 VP1区并测序,采用IQ-tree软件进行最大似然法进行系统进化树的重建,对序列进行遗传进化分析。结果2018—2020年共收集HA病例2937例,EV阳性1373例,总阳性率为46.75%,其中CV-A6阳性占总阳性病例的29.42%(404/1373)。在CV-A6阳性病例中,性别比为1.08:1,发病高峰为秋季,主要症状为疱疹(93.32%,377/404)、发热(86.39%,349/404),全部为轻症病例。本研究新定义了CV-A6的E基因型,所测89条CV-A6全长VP1核苷酸序列进行的遗传进化和核苷酸相似度分析发现,均属于D3基因亚型。结论CV-A6是2018—2020年北京地区疱疹性咽颊炎主要病原之一,主要流行株为D3亚型。应开展HA病例的常规监测,及时分析CV-A6的分子进化特征。

一例澳门手足口病病例柯萨奇病毒A6全基因组序列特征分析

目的了解1例从广西口岸入境的澳门手足口病病例的病毒基因组序列特征。方法提取待测鼻咽拭子样本的病毒RNA,采用实时荧光RT-PCR方法检测肠道病毒核酸,同时将扩增产物进行测序,通过MEGA 7.0软件使用邻位相接法构建进化树分析。结果本次澳门手足口病病例为柯萨奇病毒A组6型,与CV-A6的Gdula原型株的核苷酸同源性为81%。基因型为D3a分支,与2018年的济南株(MK357084、MK357085)、2017年的广西株(MK839021)、2017年的青岛株(MN689954)具有较高的遗传同源性。结论本研究提示,目前澳门手足口病可能以CV-A6的D3a进化分支为流行株。

重组人干扰素α-2b辅助治疗CVA6型手足口病效果观察

目的观察重组人干扰素α-2b辅助治疗CV-A6型手足口病的效果。方法2018年3—6月该院收治的CV-A6型手足口病患儿77例,随机分为观察组42例与对照组35例。对照组给予常规对症治疗,观察组在对照组基础上给予重组人干扰素α-2b治疗。比较两组临床症状消失时间,治疗前后炎性因子水平、免疫功能和不良反应发生情况及疗效。结果观察组总有效率(95.2%)明显高于对照组(80.0%),临床症状消失时间明显短于对照组,白细胞计数、中性粒细胞计数、CRP、TNF-α水平低于对照组;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论重组人干扰素α-2b辅助治疗CV-A6型手足口病效果满意。

2017—2019年浙江省手足口病病原学特征分析

目的:分析2017—2019年浙江省手足口病的病原学特征,为制定手足口病防治措施提供依据。方法:从中国疾病预防控制中心传染病报告信息系统中获取2017—2019年浙江省手足口病监测数据和病原学数据,运用描述性流行病学方法分析浙江省手足口病的病原学特征。结果:2017—2019年浙江省报告手足口病实验室确诊病例分别为3 437例、4 329例和3 540例。病原学检测结果显示,EV-A71所占比例从2017年的22.6%持续下降到2019年的1.8%,CV-A16和CV-A6所占比例分别从2017年的17.1%和7.3%上升到2019年的40.6%和33.1%。CV-A16和CV-A6竞争成为肠道病毒生态中的优势血清型。与2008—2016年相比,浙江省手足口病EV-A71构成比和重症比例都呈下降趋势,但报告发病率并未呈现下降趋势。结论:EV-A71疫苗的主要作用在于预防重症手足口病,由于病原谱的变化,疫苗对降低手足口病发病率的作用并不显著,需要密切监测手足口病病原谱的变化和积极研发多价手足口病疫苗。

安徽省2017-2018年手足口病柯萨奇病毒A6型基因进化特征分析

人肠道病毒A组71型(Enterovirus A71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是引起手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)的主要病原体。近年来非EV-A71和非CV-A16的其他肠道病毒(Enterovirus,EV)已成为HFMD流行或暴发疫情的优势病原体。安徽省HFMD监测数据显示,2017-2018年HFMD样本非EV-A71和非CV-A16其他EV核酸阳性率超过50%,其中大部分为柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)。为了解安徽省2017-2018年HFMD其他肠道病毒构成和CV-A6基因进化特征,本研究收集2017-2018年HFMD咽拭子EV核酸阳性标本,采用人横纹肌肉瘤(RD)细胞进行病毒分离培养,对分离到的CV-A6毒株VP1全长序列基因扩增及核苷酸序列测定。从NCBI GenBank数据库下载CV-A6原型株和代表性毒株基因参考序列,运用生物软件MEGA 6.0构建VP1基因序列系统进化树,分析其基因遗传特征。结果显示,安徽省2017-2018年HFMD实验室确诊病例其他EV占66.1%,CV-A16占23.5%,EV-A71占10.4%。52株CV-A6毒株均为D3a基因亚型,其VP1区核苷酸序列间相似度为93.7%~100%,编码的氨基酸序列相似度为98.3%~100%;与CV-A6 Gdula原型株核苷酸相似度为78%~82.3%,氨基酸相似度为94.6%~96.3%。VP1区15个氨基酸位点有变异,氨基酸位点Q98L和G160S的变异发生率为100%。其他EV已成为安徽省引起HFMD流行的重要病原体,D3基因型CV-A6为优势流行毒株。持续加强其他EV的病原学监测与分析,对安徽省HFMD防控策略制定与疫情处置具有重要意义。

2015~2018年柯萨奇病毒A组6型在黑龙江省的持续流行

手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一类常见的儿童传染病,自2009年以来,柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)已经成为引起HFMD流行持续循环的重要病原之一,是其他肠道病毒(Enterovirus,EV)中的优势病原,而黑龙江省CV-A6相关研究报道尚欠缺。本研究为了解2015~2018年黑龙江省HFMD流行概况和病原学组成,并分析该地区CV-A6的基因特征,收集2015~2018年黑龙江省HFMD疫情资料进行流行病学分析,并采集HFMD病例临床标本进行EV核酸检测。对分离出的EV毒株进行CV-A6的特异性荧光定量PCR法检测,对所有CV-A6阳性毒株进行全长VP1区扩增和核苷酸序列测定,并与GenBank上下载的CV-A6分型代表株构建系统进化树,以了解CV-A6的基因特征。流行病学结果显示,2015~2018年黑龙江省HFMD疫情平稳且2017年有所下降,无死亡病例。黑龙江省每年7月~8月为HFMD流行高峰,患病人群平均年龄为(4.39±3.74)岁,男女患病比例为1.44∶1。全省13个地市均收集到标本,哈尔滨市标本数最多,占36.77%。2015~2018年在黑龙江省共分离到69株CV-A6,与CV-A6原型株的核苷酸相似性为81.8%~83.9%,氨基酸相似性为94.0%~96.3%,均属D3基因亚型的D3a进化分支。尽管肠道病毒A组71型(Enterovirus A71,EV-A71)和CV-A16为主要病原,但D3基因亚型的CV-A6也已成为引起黑龙江省HFMD流行的稳定型别之一,且有加强的趋势,因此应加强CV-A6疫情的监控和分析,为该地区HFMD防控及疫苗研制提供基础数据。

2013～2015年宁夏地区手足口病柯萨奇病毒A组6型基因特征分析

研究2013-2015年宁夏地区普通手足口病（hand,foot and mouth disease,HFMD）病例中柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A6,CV-A6）分离株基因特征。将2013-2015年收集的普通HFMD病例标本中所有非肠道病毒A71型（enterovirus,71）和非柯萨奇病毒16型（Coxsackievirus A16,CV-A16）的其它肠道病毒（Enterovirus,EV）核酸阳性标本,使用RD细胞进行病毒分离,获得的毒株使用兼并引物进行VP1区基因扩增和测序,测序结果编辑后通过BLAST比对进行型别鉴定,选择CV-A6毒株进行基因进化分析。2013-2015年共收集非EV71和非CV-A16的EV阳性标本998份,共分离到227株毒株,其中61株鉴定为CV-A6,同源性分析表明宁夏61株CVA6间核苷酸和氨基酸序列同源性分别是96.1%-99.8%和98%-100%,与Gudla原型株同源性为82%-83.5%和93.8%-95.7%,遗传距离较远。CV-A6成为宁夏地区2013年和2015年其它肠道病毒中导致HFMD的主要病原体与国内流行的CV-A6具有较高的同源性,流行趋势一致,并且在宁夏地区存在多个传播链。

江苏省2012-2013年柯萨奇病毒A组6型分子流行特征分析

目的分析江苏省2012-2013年流行的柯萨奇病毒A组6型(coxsackievirus A6,CV-A6)毒株VP1区序列特征。方法采集江苏省2012-2013年10例CV-A6感染引发的手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿的咽拭子或肛拭子样本,通过RT-PCR扩增完整VP1区。应用DNAStar软件包的MegAlign对CV-A6毒株的VP1区进行核苷酸和氨基酸序列比对分析,构建系统进化树。结果同源性和系统进化分析结果显示,10株流行株与2008年芬兰流行株同属于分支F,核苷酸同源性为95.1%~96.5%,而与原型株Gdula核苷酸同源性较低,为82.4%~84.0%。01-PZ/JS/2012、02-PZ/JS/2012、03-PZ/JS/2012、04-BY/JS/2012和08-PZ/JS/2013属于分支F2,05-PZ/JS/2013、06-PZ/JS/2013、07-PZ/JS/2013、09-PZ/JS/2013和10-BY/JS/2013属于F3,不同亚分支毒株之间核苷酸同源性为95.8%~97.2%。结论江苏省2012-2103年流行的10株毒株分别属于F2和F3分支,属于F2的5株毒株的VP1第30位氨基酸位点为V,而属于F3的5株毒株该位点为A。开展CV-A6流行株分子流行病学研究,了解毒株进化变异的趋势,对防控CV-A6引发的HFMD具有重要意义。

2014—2022年淄博市手足口病病原谱变化及基因特征分析

目的分析山东省淄博市2014—2022年手足口病(hand,foot,and mouth disease,HFMD)病原谱的构成变化,掌握淄博市手足口病主要致病原的流行规律,为手足口病预防控制工作提出建议及参考依据。方法采用实时荧光反转录PCR(RT-PCR)方法对来自2014—2022年间淄博市的4053份咽拭子样本进行肠道病毒核酸检测,选择人横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞培养阳性分离物进行肠道病毒VP1区扩增及测序,从GenBank中选取不同基因型别参考序列,用MAGA 11.0软件中邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统进化树,并采用DNAStar Mega Align软件对VP1区序列进行同源性比对分析。结果共采集淄博市手足口病患儿咽拭子样本4053份,核酸检测结果显示:样本的总阳性率为70.91%,3~6岁的幼托儿童阳性率最高(72.50%);2014年的优势血清型为EV-A71,2015年、2017年和2018年的优势血清型为非EV-A71和CVA16的其他肠道病毒,2016年和2019年的优势血清型为CVA16,2020年之后的优势血清型均为非EV-A71和CVA16的其他肠道病毒;淄博市手足口病发病高峰以5~8月为主,6月为高峰。不同区县的HFMD病原谱分布差异有统计学意义(χ^(2)=48.841,P<0.05);对获得的63份阳性毒株分离物进行测序后比对分析,显示淄博市存在6种肠道病毒CVA10(28.57%)、CVA16(17.46%)、CVA6(7.94%)、CV-A2(6.35%)、CV-A4(12.70%)和EV-A71(26.98%)。进化分析及同源性分析结果显示淄博市HFMD病例EV-A71毒株呈现高度集中,均为C4a亚型,其毒株间VP1区核苷酸同源性为92.50%~100.00%,HFMD病例CVA16毒株均属于B1亚型,其中B1a占36.36%,B1b占63.64%,存在B1a和B1b亚型共流行,其毒株间VP1区核苷酸同源性为88.10%~100.00%。结论2014—2022年淄博市手足口病原谱呈现多样性,2014—2019年,淄博市手足口病优势毒株交替出现,自2020年开始逐渐转变为以非EV-A71非CVA16的其他肠道病毒为主。3~6岁托幼儿童为重点人群,应重点开展其他肠道病毒的检测和VP1区的分型工作,以期了解本地HFMD流行规律,控制疾病流行。

2016-2020年郑州市儿童手足口病优势毒株变化趋势

目的分析近年来郑州市手足口病实验室检测结果,探索优势毒株变化趋势,为科学防控提供依据。方法运用实时荧光定量PCR技术对辖区疾控中心上报的手足口病病例粪便标本进行病原学检测分型,用SPSS 24.0软件进行统计分析。结果2016-2020年收到手足口病病例粪便标本2770份,检出阳性标本1682份,阳性率为60.72%。EV71型毒株逐年减少,由2016年的49.74%下降至2020年的未检出;CV-A6型毒株由2016年的22.28%上升至2020年的86.12%,成为郑州市手足口病的优势毒株。结论应严密监视CV-A6的流行态势,注意手足口病病原谱变化趋势,做好当前形势下手足口病的预防控制工作。

柯萨奇病毒A6病毒样颗粒的制备及免疫原性初步研究

手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一种常见传染病,以婴幼儿发病为主,柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)是引起HFMD暴发的主要病原体,其疫苗开发有待深入的研究,而病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是潜在安全的候选疫苗。为制备CV-A6 VLPs,并研究其免疫原性,本研究利用Bac-toBac昆虫细胞杆状病毒表达系统共表达P1和3CD蛋白,制备并纯化CV-A6 VLPs,应用间接免疫荧光试验(Indirect immunofluscent assay,IFA)、SDS-PAGE、Western Blot、透射电镜法等方法鉴定。以Al(OH)3为佐剂,三种不同剂量CV-A6 VLPs免疫BALB/c小鼠,采用微量中和试验法检测小鼠血清中和抗体滴度。结果显示,重组有P1和3CD的杆状病毒质粒转染Sf9细胞,可形成CV-A6类病毒颗粒,直径约为26nm。SDS-PAGE和Western Blot结果说明P1前体蛋白被3CD作用切割产生了VP0、VP1和VP3,CV-A6 VLPs由这三个病毒结构蛋白构成。小鼠免疫实验结果显示,CV-A6 VLPs可以刺激产生较高水平抗CV-A6的特异性中和抗体,维持至少12周,并且抗体中和效价与免疫剂量和免疫次数呈正相关。本研究获得重组杆状病毒rBac-CV-A6-P1-3CD,并在Sf9细胞内成功表达CV-A6 VLPs,可以刺激小鼠产生较高水平和持久的体液免疫反应。

2017~2018年河北省重症手足口病的主要致病病原体为柯萨奇病毒A组6型

肠道病毒是引起重症手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)的主要病原体,近年来引起重症手足口病的病原谱正在发生变化,这为病原谱的检测带来了困难,而包括高通量测序(High-throughput sequencing,HTS)在内的新技术为明确重症手足口病的病原谱提供了帮助。为了明确河北省2017~2018年重症手足口病的病原谱,本研究采集2017~2018年河北省重症HFMD病例的50份标本(2017年29份,2018年21份)进行病毒分离,从23份标本中分离到病毒,采用一代测序方法获得其全长VP1区序列,而其余27份标本未能直接分离到病毒,其中17份采用高通量测序的方法获得了部分或者全长基因组序列。序列分析结果显示,近年来河北省重症HFMD的肠道病毒病原谱发生了较大变化,2017年重症HFMD标本中,10份检出肠道病毒A组71型(Enterovirus A71,EV-A71),1份检出柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16),10份检出柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)(其中高通量测序检出5份),还有3份检出其他肠道病毒;2018年重症HFMD标本中,1份检出CV-A16,7份CV-A6通过高通量测序检出,5份检出柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)(其中高通量测序检出3份),还有3份检出其他肠道病毒。通过高通量测序,可检出病原体的重症标本由原来的23份上升到40份,可检出CV-A6的标本由5份上升到17份,CV-A10由2份上升到5份;重症病例病原谱中CV-A6所占的比例由21.7%(5/23)上升到42.5%(17/40),CV-A10由8.7%(2/23)上升到12.5%(5/40),而EV-A71由于病毒分离比较敏感,含有EV-A71的标本病毒分离全部是阳性,高通量测序并没有多检出,在病原谱中的比例由43.5%(10/23)下降到25.0%(10/40)。RAxML构建的CV-A6和CV-A10的VP1区的系统发育树显示,CV-A6属于中国流行的优势基因亚型D3a,CV-A10属于中国流行的优势基因型C。河北重症HFMD标本检测到的两株CV-A6与其余中国CV-A6序列的3D区的核苷酸相似度为76.4%~98.9%,氨基酸相似度为92.7%~99.7%,两株CV-A10与其余中国CVA10序列的3D区的核苷酸相似度为93.2%~97.1%,氨基酸相似度为97.4%~99.7%。本研究揭示,引起河北重症HFMD的CV-A6和CV-A10均是中国目前流行的优势基因型,与中国流行株相比,并未发生新的重组事件。CVA6和CV-A10在引起河北重症HFMD的病原谱中所占比例逐渐增高,CV-A6超过EV-A71,已成为引起HFMD重症病例的优势型别,提示应该加强对CV-A6和CV-A10的监测,积极研制这两种病毒的疫苗,这将有助于进一步减少重症HFMD病例数,并减轻重症HFMD疾病负担。

云南省柯萨奇病毒A组6型全基因组特征分析

目的分析2015年云南省4株柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)分离株的全基因组特征。方法取手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿粪便样本,制备悬液,接种至人横纹肌肉瘤细胞,CV-A6致细胞病变(CPE)后,收集病毒液,提取RNA,经RT-PCR分段扩增获得全基因组片段,并进行测序。采用Geneious 9.1.4和Mega 7.0、Simplot等生物学软件进行核苷酸和氨基酸序列比对、系统进化及重组分析,并构建系统进化树。结果4株CV-A6分离株之间核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.8%~97.9%和97.3%~98.4%,与近几年国内流行的CV-A6株核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.6%~97.9%和97.4%~99.1%;分离株在5′UTR、2A、2C、3A、3D、3′UTR区可能存在与毒力和临床表型相关的12个位点。结论4株云南分离株属于CV-A6血清型,为D3a基因亚型。

柯萨奇病毒A组6型构象表位的生物信息学预测

柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)近年成为手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)最重要的病原体之一。本实验室在之前的研究中发展了人肠道病毒构象表位的生物信息学预测算法,并成功应用于柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)构象表位的预测,发现CV-A10的构象表位在病毒衣壳表面呈现site 1、site 2和site 3三簇分布。本研究中,应用相同算法对CV-A6的构象表位进行系统性预测,并将CV-A6和CV-A10这两种手足口病的病原体的构象表位进行对比。结果显示:CV-A6(A颗粒)和CV-A10(A颗粒)的构象表位具有高度一致的site 1、site 2和site 3三簇分布模式,而且这种分布一致性超过了CV-A10两种颗粒状态(A颗粒和成熟颗粒)的一致性,说明衣壳结构和颗粒状态对于构象表位非常重要。虽然CV-A6(A颗粒)和CV-A10(A颗粒)具有高度一致的构象表位分布模式,但在共享的58个氨基酸残基位点中,仅有21个(36.2%)残基保守,而且绝大多数构象表位都有3个以上残基差异,提示构象表位残基上的差异造成了CV-A6和CV-A10的血清型差异。CV-A6构象表位的预测结果,为其构象表位的实验鉴定、分子流行病学研究和疫苗研发提供了重要支持。

2016年山东省烟台地区手足口病主要病原谱及柯萨奇病毒A6型VP1区基因特征分析

目的研究2016年山东省烟台地区手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的病原谱组成特点,分析烟台HFMD病原谱中柯萨奇病毒A组6型(coxsackie virus A group 6 type,CV-A6)流行株的进化及VP1区重要氨基酸位点的变异情况。方法采用real-time RT-PCR方法,对2016年烟台地区采集于HFMD患者的738份样品进行肠道病毒(enterovirus,EV)核酸检测和分子定型,统计各型EV阳性标本数量及比例。根据EV的优势型别,选取8株CV-A6进行VP1区扩增,并进行核苷酸序列测定和分析,然后进行系统进化分析。结果从738份标本中检出EV 460份,主要病原构成为柯萨奇病毒A组16型(coxsackie virus A group 16 type,CV-A16)(56.09%,258/460)、肠道病毒A组71型(enterovirus A group 71 type,EV-A71)(13.48%,62/460)、柯萨奇病毒A组10型(coxsackie virus A group 10 type,CV-A10)(10.65%,49/460)、CV-A6(9.57%,44/460)、柯萨奇病毒A组4型(coxsackie virus A group 4 type,CV-A4)(1.96%,9/460)。其中成功分离到8份CV-A6阳性标本毒株,并进行了全长VP1区核苷酸序列分析,8株CV-A6的序列分析结果表明,其核苷酸相似性为96.12%~100%,氨基酸相似性为97.78%~100%。系统进化分析显示8株CV-A6烟台株均属于D基因型中的D3基因亚型。与参考株CVA6-Gdula-AY421764相比,烟台市CVA16分离株VP1第10、14、174、194、279、283、305位氨基酸出现突变。结论CV-A16、EV-A71、CV-A10、CV-A6是引起2016年烟台地区HFMD发病的常见病原体,本次分离到的CV-A6均属于D基因型中的D3基因亚型。

银花青蒿栀子方抗A6型柯萨奇病毒活性成分的分离

目的研究银花青蒿栀子方(Yinhua Qinghao Zhizi Description,YQZ)抗A6型柯萨奇病毒(Coxsavirus A6,CV-A6)的活性成分。方法对YQZ进行提取、分离和结构鉴定,以病毒抑制率为指标追踪其抗CV-A6活性成分,利用Discovery Studio2017软件将其与受体蛋白进行分子对接。结果YQZ醇提物的石油醚部位分离得到的青蒿酸和青蒿素、正丁醇部位分离得到的栀子苷、绿原酸和木犀草苷对CV-A6的抑制率显著高于阳性对照利巴韦林(P<0.05、0.01),上述成分分子和CV-A6衣壳蛋白VP1之间均存在多个氢键、范德华引力等作用,亲和力大。结论YQZ中的青蒿酸、青蒿素、栀子苷、绿原酸和木犀草苷具有良好的抗CV-A6活性,可能与抑制病毒衣壳蛋白VP1有关。

银花青蒿栀子方抗A6型柯萨奇病毒的作用

A6型柯萨奇病毒(Coxsackievirus A6,CV⁃A6)感染致手足口病发病率呈上升趋势,逐渐成为部分地区的主要流行株。但是,CV⁃A6的相关研究目前较少,亟需抗CV⁃A6药物的研究。中药在抗病毒方面具有独特优势,银花青蒿栀子方(Yinhua⁃Qinghao⁃Zhizi,YQZ)对多种病毒有效,但对CV⁃A6的作用尚未见研究报道,本研究应用细胞和动物感染模型评价了YQZ体内外抗CV⁃A6的作用。体外实验中,利用CV⁃A6感染RD细胞模型,以病毒抑制率和细胞上清病毒载量为指标评价YQZ的抗病毒作用,并采用Box–Behnken设计⁃响应面法优化YQZ的配伍比例。体内实验中,10日龄ICR乳鼠按窝随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组(利巴韦林10 mg/kg)、低剂量YQZ组(生药1.3g/kg)和高剂量YQZ组(生药2.6 g/kg)。采用滴度为107.4 TCID50/mL的CV⁃A6 ip感染制备模型,统计生存率和临床评分;取骨骼肌、心脏、肺脏、脊髓、延髓等组织,HE染色观察病理变化;一步法RT⁃qPCR检测上述各组织的病毒载量。结果显示,YQZ抗CV⁃A6的最佳配伍为:金银花3 g、青蒿15 g、栀子2 g,其病毒抑制率和病毒载量拷贝数的对数均与模型预测值接近(P>0.05),且活性显著优于对照利巴韦林(P<0.01)。与模型组相比,低、高剂量YQZ组乳鼠生存率提高,急性弛缓性麻痹等症状明显缓解,骨骼肌、心脏、肺脏等脏器的病理损伤明显减轻,上述组织病毒载量均下降,其中高剂量YQZ组乳鼠骨骼肌、心脏和肺组织中的病毒载量显著降低(P<0.05)。以上结果表明,Box–Behnken设计⁃响应面法可促进YQZ的配伍优化筛选、提高药效,优化配伍比例的YQZ具有良好的体内外抗CV⁃A6作用。

一起柯萨奇病毒A6型引起的手足口病聚集性疫情分子流行病学分析

目的对2019年9月辽宁省阜新市某中学一起手足口病聚集性疫情的未分型肠道病毒进行病原学鉴定,分析其种系发生情况。方法使用实时荧光PCR对标本进行初步病原学鉴定,使用巢式PCR对未分型肠道病毒VP1区部分核苷酸序列进行扩增和测序,BLAST比对确定肠道病毒型别,利用生物信息学软件将VP1区全长序列与柯萨奇病毒A6型(CV-A6)各亚型参考序列进行同源性和系统进化分析。结果 5份标本经实时荧光PCR检测,结果显示肠道病毒通用型核酸阳性,CV-A16型和EV71型核酸均为阴性,判断为非CV-A16非EV71型肠道病毒感染。对肠道病毒VP1区部分核苷酸序列进行在线BLAST比对,结果显示5例患者标本均为CV-A6型肠道病毒阳性,其VP1区核苷酸序列同源性为100%。系统进化分析显示,5例标本属于我国广泛流行的CV-A6 D3亚型,且与辽宁省近几年的优势流行株在同一个进化树分支上。结论引起此次聚集性手足口病疫情的病原体为CV-A6型肠道病毒,与近年来辽宁省流行的CV-A6毒株亲缘关系密切,未发生明显变异。

手足口病主要病原变迁及分子进化研究

手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)是一种由多种肠道病毒引起的,以儿童急性感染为主的全球性传染病。引起该病的病原谱及优势流行毒株在世界范围内随时间推移而不断变化,情况日趋复杂。病原的不断进化在病原谱的变迁以及相关疾病的暴发流行中发挥重要作用。本文结合历年来欧美、东南亚及中国大陆HFMD重大疫情中的病原谱变化以及各主要病原的分子进化研究进行综述,为HFMD的持续有效防控及相关策略制定提供依据。