盐霉素体外对猪流行性腹泻病毒的抑制效果

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea, PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的一种以水样腹泻、呕吐和脱水为主要特征的猪肠道传染病,给全球养猪业造成巨大的经济损失,但目前仍无有效的疫苗和治疗药物。盐霉素(salinomycin, SLM)是一种常用的抗生素,具有不易产生耐药性、排泄迅速、残留量极低的优点。为明确SLM对PEDV的抑制作用,首先通过TCID_(50)(tissue culture infective dose)检测PEDV在Vero细胞上的增殖规律,进一步经CCK-8试验和细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)测定SLM的半数细胞毒性浓度(half-cytotoxic concentration, CC_(50))和其对PEDV的半数抑制浓度(median inhibition concentration, IC_(50)),最后建立SLM、PEDV和Vero细胞的作用模型,利用RT-qPCR、免疫印迹(Western blot)和间接免疫荧光(indirect immunofluorescent assay, IFA)技术检测SLM对PEDV复制周期的影响。结果表明PEDV感染Vero细胞后24 h病毒滴度最高(10^(7.7)·0.1 mL^(-1));SLM对Vero细胞的CC_(50)为7.698μmol·L^(-1),对PEDV的IC_(50)为1.617μmol·L^(-1);随着SLM浓度的增加,PEDV滴度、N蛋白和N基因mRNA的表达量逐渐下降;SLM抑制PEDV的复制阶段,对病毒的吸附、入侵和释放阶段无明显影响。该研究结果可以为进一步挖掘PEDV抑制药物提供新思路。

一株猪流行性腹泻病毒S、M、N基因的遗传变异分析

为研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777疫苗毒株与流行毒株的遗传变异和抗原位点的差异性,以RT-PCR进行PEDV CV777疫苗株和JS2016流行株S、M、N 3个基因的克隆测序,进行PEDV S、M、N 3个基因的核酸序列同源性分析,并通过软件比对CV777与JS2016毒株在这3个基因上的抗原差异。S、M、N基因的同源性分析表明流行毒株与CV777存在变异,但同源性在93%以上;免疫原性预测结果显示2个毒株在S、M、N 3个基因上的抗原区域存在较小的差异。

紫外照射对两种猪流行性腹泻病毒毒株体外感染细胞的影响比较

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起仔猪腹泻死亡的重要病因之一,目前尚无有效治疗药物。不同的PEDV毒株,其感染细胞方式、病毒增殖速度有所不同。目前,主要依靠消毒等预防管理措施防止病毒的传播和污染。本研究运用不添加胰酶法在体外贴壁培养细胞上分别感染PEDV CV777毒株和DR13毒株,检测紫外线对不同毒株的杀灭效果。结果显示:100 TCID_(50)DR13和CV777毒株需要使用48.6 m J∕cm^(2)的UV能量值灭活,10 000 TCID_(50)DR13和CV777毒株需要291.6 m J∕cm^(2)的UV能量值灭活。本研究对PEDV的防控具有重要意义。

PEDV中国流行株和疫苗株S蛋白免疫反应性差异分析

为分析PEDV流行株和疫苗株S基因差异对疫苗免疫效果影响,分别在大肠杆菌中表达PEDV流行株CH/ZMDZY/11与疫苗株CV777S蛋白差异较大的N端（22～380aa）区域（SA）,将纯化的SA蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体,并以SA蛋白为抗原,通过Western Blot及间接ELISA的方法检测2种蛋白与多克隆抗体的反应性差异。结果表明,抗PEDV疫苗株SA蛋白（YSA）多抗与疫苗株SA蛋白的反应性明显高于与流行株SA蛋白（LSA）的反应性;与此相反,抗PEDV流行株SA蛋白多抗与流行株SA蛋白的反应性明显高于与疫苗株SA蛋白的反应性。研究结果提示,PEDV S蛋白22～380aa区域存在差异性抗原表位,PEDV流行株和疫苗株S基因的差异可能是导致基于CV777疫苗株的PED疫苗免疫效果不好的原因。本研究将为开发PEDV流行株亚单位疫苗用于预防临床PEDV流行株的感染提供理论依据。